ЛИЯ (ЛИЗИН-ЖЕЛЕЗО) АГАР: ОСНОВА, ПОДГОТОВКА И ПРИМЕНЕНИЕ - БИОЛОГИЯ - 2025

Агар LIA (Лизин железо) биохимический тест , используемый для идентификации бактерий семейства Enterobacteriaceae. Эта среда была создана Эдвардсом и Файфом на основе формулы Фалькоу.

Первоначально этот тест представлял собой бульон, содержащий пептоны, дрожжевой экстракт, глюкозу, L-лизин, бромкрезоловый пурпурный и дистиллированную воду. Эдвардс и Файф добавили агар-агар, цитрат железа и аммония и тиосульфат натрия.

Положительный и отрицательный тест на декарбоксилирование лизина. Источник: Собственность автора фото и схемы MSc. Мариельса Гиль

Тест в основном состоит из демонстрации присутствия фермента лизиндекарбоксилазы, способного реагировать с карбоксильной группой аминокислоты L-лизина. Дезаминирование аминокислоты также может происходить из-за присутствия фермента лизиндезаминазы.

Кроме того, состав среды показывает способность некоторых родов бактерий продуцировать сероводород. Наконец, также можно наблюдать образование или отсутствие газа в среде.

основа

Пептоны и дрожжевой экстракт

Как и большинство питательных сред, лизиновый железный агар содержит компоненты, которые являются источником питательных веществ, необходимых для роста бактерий. Эти компоненты представлены пептонами и дрожжевым экстрактом.

глюкоза

Точно так же этот агар содержит глюкозу как ферментируемый углевод. Известно, что все бактерии семейства Enterobacteriaceae сбраживают глюкозу.

Этот шаг имеет решающее значение, поскольку он будет отвечать за подкисление среды, что является важным условием для действия фермента лизиндекарбоксилазы, если она присутствует, на свой субстрат.

У некоторых родов бактерий может наблюдаться газообразование из-за ферментации глюкозы.

Наличие газа обнаруживается, когда происходит смещение агара в пробирке, оставляя пустое пространство на дне, или при разделении среды на две или более порции.

L-лизин

После декарбоксилирования лизина образуются диамин (кадаверин) и диоксид углерода.

Декарбоксилирование происходит в присутствии пиридоксальфосфата кофермента. Эта реакция необратима.

Индикатор PH (бромкрезоловый фиолетовый)

Все изменения pH, происходящие в среде в результате различных реакций, регистрируются пурпурным индикатором pH бромкрезола.

В этом смысле при подкислении среда становится желтой, а при подщелачивании среда возвращается к первоначальному пурпурному или пурпурному цвету.

Когда дезаминирование лизина происходит из-за присутствия фермента лизиндезаминазы, на поверхности образуется красноватый цвет, типичный для родов Proteus, Providencia и некоторых видов Morganella.

Это связано с тем, что в процессе дезаминирования образуется альфа-кетокарбоновая кислота, которая реагирует с цитратом аммония в присутствии кислорода, что вызывает вышеупомянутый цвет.

Цитрат железа и аммония и тиосульфат натрия

С другой стороны, наличие бактерий, продуцирующих сероводород, будет подтверждено наличием тиосульфата натрия (источника серы) и цитрата аммония железа, который является проявителем H ₂ S.

Бактерии, у которых есть фермент тиосульфатредуктаза, обладают способностью действовать, уменьшая присутствующий тиосульфат натрия, образуя сульфит и сероводород (H ₂ S).

Последний представляет собой бесцветный газ, но при реакции с солью железа образует сульфид двухвалентного металла, который является нерастворимым соединением (видимый черный осадок).

Однако способность образовывать H ₂ S с этой средой не очень надежна, потому что некоторые лизиндекарбоксилаза-отрицательные бактерии, способные продуцировать H ₂ S, не будут образовывать черный осадок, поскольку кислотность среды мешает. Поэтому рекомендуется проверить другие носители, содержащие железо.

Интерпретация теста

Декарбоксилирование лизина

Через 24 часа инкубации следует считывать показания пробирок, в противном случае есть риск неверной интерпретации реакции и получения ложноотрицательных результатов.

Следует помнить, что первой реакцией, которая произойдет, будет ферментация глюкозы, поэтому все пробирки через 10–12 часов станут желтыми.

Если по истечении времени инкубации (24 часа) наблюдается желтый фон с пурпурной или пурпурной поверхностью, реакция отрицательная. Фиолетовый цвет поверхности соответствует ощелачиванию среды пептонами.

Положительная реакция - это реакция, при которой дно и поверхность трубки полностью пурпурные, то есть она возвращается к исходному цвету.

Следовательно, кто определяет положительность теста - это основа или фон среды. Если вы сомневаетесь в цвете, его можно сравнить с пробиркой LIA без инокулирования.

Дезаминирование лизина

Пробирка, показывающая дезаминирование лизина, будет иметь красновато-бордовую поверхность и желтый (кислотный) фон, либо вся пробирка будет красновато-бордовой.

Эта реакция интерпретируется как отрицательная для декарбоксилирования лизина, но положительная для дезаминирования лизина.

Эта реакция определяется и интерпретируется на лицевой панели.

Производство сероводорода (H

Положительная реакция наблюдается по появлению черного осадка во всей или части среды. Обычно между краем фаски и основанием.

Если осадок образуется по всей пробирке, он не покажет другие реакции, происходящие в середине.

Запись результатов

При интерпретации теста результаты записываются следующим образом:

Сначала считывается фаска, затем дно или блок, затем добыча H ₂ S и, наконец, добыча газа.

Пример: K / A + (-). Это означает:

• K: щелочная рамка (пурпурный цвет)
• A: Кислотный фон (желтый), т.е. отрицательная реакция декарбоксилирования и отрицательное дезаминирование.
• +: Производство сероводорода
• (-): Без газа.

подготовка

Взвесьте 35 г обезвоженной лизиновой среды на железном агаре и растворите ее в одном литре дистиллированной воды.

Нагрейте до полного растворения агара, для этого дайте ему покипеть в течение минуты, часто помешивая. Разлить по 4 мл среды в пробирки 13/100 с ватными крышками.

Стерилизовать в автоклаве при 121 ° C в течение 15 минут. Извлеките из автоклава и дайте постоять под углом, чтобы получилось глубокое основание и короткий скос.

Хранить в холодильнике при 2-8 ° С. Дайте ему нагреться перед посевом штамма бактерий.

Цвет обезвоженной среды бежевый, а приготовленная среда - красновато-пурпурный.

Конечный pH приготовленной среды - 6,7 ± 0,2.

Среда становится желтой при pH 5,2 или ниже и пурпурной при pH 6,5 и выше.

Приложения

Этот тест, наряду с другими биохимическими тестами, используется для идентификации бацилл семейства Enterobacteriaceae.

Среду засевают с помощью прямой петли или иглы, делают один или два прокола на дне пробирки, а затем зигзагообразно надрезают поверхность среды.

Инкубируйте 24 часа при 35-37 ° C в условиях аэробиоза. При необходимости инкубируют еще на 24 часа.

В основном это полезно для дифференциации отрицательных по лактозе видов Citrobacter от Salmonellas sp.

Источник: Конеман Э., Аллен С., Янда В., Шрекенбергер П., Винн В. (2004). Микробиологическая диагностика. 5-е изд. Редакция Panamericana SA Аргентина.

Ссылки

1. Мак Фаддин Дж. (2003). Биохимические тесты для идентификации бактерий, имеющих клиническое значение. 3-е изд. Редакция Panamericana. Буэнос айрес. Аргентина.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Микробиологический диагноз Бейли и Скотта. 12 изд. Редакция Panamericana SA Аргентина.
3. Конеман Э, Аллен С., Джанда В., Шрекенбергер П., Винн В. (2004). Микробиологическая диагностика. 5-е изд. Редакция Panamericana SA Аргентина.
4. Britannia Laboratories. Лизиновый железо-агар. 2015. Доступно на: britanialab.com.
5. BD Laboratories. BBL Lysine Iron Agar Slants. 2007. Доступно на: bd.com
6. Valtek Laboratories. Средняя LIA 2009 г. Доступно на: andinamedica.com