Маннитол агар соль или маннит соль представляет собой твердую среду селективной и дифференциальной культуры. Он был создан Чепменом для изоляции патогенных грамположительных кокков, особенно Staphylococcus aureus.
Однако также полезно изолировать Staphylococus epidermidis, который иногда может присутствовать как условно-патогенный микроорганизм, и Staphylococcus saprophyticus, признанный патоген мочи, среди других видов.
A. Fiola с приготовленной соленой агаровой средой с маннитом. B. Чашки с соленым агаром с маннитом, засеянные ферментирующими и неферментирующими штаммами маннитовых бактерий. Источник: A и B: Фотографии автора MSc. Мариельса Гил.
Некоторые энтерококки способны расти на этой среде, а также некоторые грамположительные спорообразующие палочки.
Эта среда очень полезна при анализе клинических образцов, но она также используется при микробиологическом исследовании пищевых продуктов и при контроле качества промышленных продуктов, таких как косметика, лекарства и другие.
Соленый маннитовый агар состоит из экстрактов и пептонов говядины, триптеина, маннита, хлорида натрия, фенолового красного и агара.
основа
Маннитол агар селективен благодаря высокой концентрации соли. Соленость действует как тормозящее вещество и предотвращает рост грамотрицательных бактерий.
Он также отличается из-за присутствия углеводного маннита и индикатора pH фенолового красного. Из-за этого бактерии, способные ферментировать маннит, продуцируют кислоты, подкисляющие среду, делая колонии и среду желтыми.
С другой стороны, колонии, которые не ферментируют маннит, растут в среде, принимая питательные вещества, обеспечиваемые экстрактами и пептонами мяса и триптеином. Оттуда бактерии извлекают углерод, азот, витамины и минералы, необходимые для их роста.
Колонии в этом случае могут быть слабыми или ярко-розовыми, а среда остается того же цвета или меняется на фуксию.
Агар - это вещество, придающее среде консистенцию.
подготовка
Для приготовления литра соленого агара с маннитом 111 г дегидратированной среды от предпочтительной коммерческой компании взвешивают и растворяют в 1000 мл дистиллированной воды, используя колбу.
Нагревают при частом перемешивании среды для улучшения процесса растворения. Варить минуту.
Колбу помещают в автоклав при 121 ° C на 15 минут.
По окончании времени выньте флакон из автоклава, дайте ему отдохнуть и подавайте от 15 до 20 мл на стерильных чашках Петри при температуре примерно от 50 до 55 ° C.
Допускается застывать, укладывая в перевернутом виде в плакеры и храня до употребления в холодильнике. Перед посевом образца подождите, пока пластина не достигнет комнатной температуры.
Пластины высевают штрихами или поверхностным посевом шпателем дригальского. Конечный pH приготовленной среды должен составлять 7,4 ± 0,2.
Цвет обезвоженной среды - светло-бежевый, а цвет приготовленной среды - оранжево-красный.
Приложения
Благодаря своей высокой селективности эта среда идеально подходит для посева образцов со смешанной флорой, в которых ищется присутствие Staphylococus aureus как основного патогена этого рода.
В этом смысле одним из наиболее частых его применений является микробиологический анализ глоточного экссудата и образцов выделений из носа, особенно для выявления бессимптомных носителей S. aureus.
Некоторые страны внедрили этот анализ как обязательное требование для людей, которые хотят работать продавцами продуктов питания.
Этот контроль предотвращает заражение людей, которые являются носителями S. aureus, тем самым предотвращая массовое пищевое отравление из-за употребления пищи, загрязненной стафилококковым энтеротоксином.
Его также можно включать в посев раневых инфекций, посев крови, спинномозговую жидкость, бронхоальвеолярный лаваж и другие.
Соленый маннитовый агар полезен для повторного выделения колоний из культур мочи из агара CLED или кровяного агара, грамположительные кокки которых обнаружены в скоплениях по Граму.
Это также справедливо для микробиологического анализа продуктов питания, питьевой воды, почв и других областей применения.
контроль качества
После приготовления партии чашек с агаром с соленым маннитом рекомендуется провести контроль качества. Контрольные штаммы высевают, чтобы показать, есть рост или нет.
Известные штаммы Staphylococcus aureus можно использовать в качестве положительного контроля. Должны расти удовлетворительно развивающиеся желтые колонии, и среда также станет того же цвета.
Подобным образом удобно включать известный штамм Staphylococcus epidermidis. В нем должны расти удовлетворительно развивающиеся розовые колонии, а среда останется того же цвета или темнеет до более ярко-розового.
В качестве отрицательного контроля используют штаммы, которые не должны расти на этой среде. Например, можно выращивать известный штамм Escherichia coli или Klebsiella pneumoniae. Ожидаемый результат - полное торможение, то есть никакого роста.
Кроме того, инокулированный планшет необходимо инкубировать. В нем не должно быть ни роста, ни изменения цвета.
Важно, чтобы пластина не использовалась, если есть признаки ухудшения, такие как загрязнение, обезвоживание, обесцвечивание и другие.
Последние мысли
При использовании агаровой среды с соленым маннитом следует учитывать несколько важных аспектов:
- Рост желтых колоний не означает, что это золотистый стафилококк. Следует помнить, что некоторые штаммы Enterococcus способны расти в этой среде и ферментировать маннит, а также некоторые спорообразующие грамположительные палочки.
Поэтому важно выполнить грамм-анализ колонии и тест на каталазу.
-С другой стороны, следует учитывать, что другие виды Staphylococcus, кроме aureus, также способны ферментировать маннит. Следовательно, важно пересеять колонию в питательный бульон, чтобы взять оттуда и выполнить тест на коагулазу.
Среди видов стафилококков, имеющих клиническое значение для человека, которые ферментируют маннит, входят: S. aureus, S. simulans, S. capitis ssp capitis, S. capitis ssp urealyticus, S. xylosus, S. cohnii ssp urealyticum и другие.
Другие могут давать различную реакцию, то есть иногда положительную, а иногда отрицательную. Некоторые из них - это S. saprophyticus, S. haemolyticus, S. warneri, S. intermediateus и другие.
-Не рекомендуется брать колонии непосредственно с маннитового агара для проведения теста на коагулазу, поскольку высокая концентрация соли в среде может повлиять на результат.
- Наконец, рекомендуется инкубировать чашки, засеянные соленым маннитом, до 48 часов, поскольку некоторые штаммы S. aureus могут медленно ферментировать маннит, хотя это не очень часто.
Ссылки
- Britannia Laboratories. Соленый агар с маннитолом. 2015. Доступно на: britanialab.com.
- «Соленый агар с маннитом». Википедия, свободная энциклопедия. 31 октября 2018 г., 19:08 UTC. 17 января 2019 г., 20:55, доступно на: es.wikipedia.org.
- Конеман Э, Аллен С., Джанда В., Шрекенбергер П., Винн В. (2004). Микробиологическая диагностика. (5-е изд.). Аргентина, редакция Panamericana SA
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Микробиологический диагноз Бейли и Скотта. 12 изд. Аргентина. Редакция Panamericana SA
- BD Laboratories. BD Mannitol Salt Agar. 2013. Доступно на: bd.com.