ОТРИЦАТЕЛЬНОЕ ОКРАШИВАНИЕ: ОБОСНОВАНИЕ, МЕТОДИКА, ДОСТОИНСТВА И НЕДОСТАТКИ - БИОЛОГИЯ - 2025

Отрицательное окрашивание является методом специальной окраски , чтобы выделить наличие капсулы в некоторых микроорганизмах , в основном Пневмококк, Klebsiella пневмонии и Cryptococcus neoformans-, из клинических образцов или чистых культур.

Прямой образец, обычно используемый для отрицательного окрашивания, - это спинномозговая жидкость. Этот метод представляет собой быструю альтернативу предполагаемой диагностике менингита, особенно Cryptococcus neoformans.

A. Зубной камень, окрашенный индийскими чернилами. B. Cryptococcus neoformans var gatti, плохо инкапсулированный, как это происходит в природе, с использованием нигрозина. C. Cryptococcus neoformans var gatti с толстой капсулой, обнаруженный в его паразитической форме с использованием нигрозина. D. Cryptococcus neoformans слегка разбавленными тушью. Гизелл Квинд, из Wikimedia Commons / CDC, через Wikimedia Commons / Фото предоставлено: Поставщики контента: CDC / Dr. Линор Хейли, через Wikimedia Commons

Подобным образом это окрашивание можно наносить на мокроту и стерильные жидкости в целом, а также на штаммы, полученные из молодых чистых культур. В этой технике для выполнения используются нигрозин или тушь; Следовательно, это очень простой и недорогой в применении метод, позволяющий получить информацию, имеющую большую диагностическую ценность, за короткое время.

В этом смысле любая лаборатория способна провести такое окрашивание. Конечно, в лаборатории должен быть компетентный персонал, способный распознавать изолированные или почкующиеся дрожжи Cryptococcus neoformans и дифференцировать их от лейкоцитов и артефактов, которые могут присутствовать в образце.

основа

Аналогичным образом действуют нигрозин и индийские чернила; следовательно, любое из двух веществ можно использовать как взаимозаменяемые.

Этот метод называется отрицательным окрашиванием, потому что он действует противоположно остальным методам окрашивания. При этом неокрашенной остается структура, которую ищут или которую желают видеть; то есть микроорганизмы.

Поэтому окрашивание основано на окрашивании нижней части мазка в темный цвет. В этом случае капсулированные структуры будут выделяться светлым или бесцветным цветом.

В целом дрожжи рефлексивны, они окружены четким ореолом, соответствующим капсуле. Это происходит потому, что индийские чернила и нигрозин - вещества, не способные проникать через полисахарид, из которого состоят капсулы живых микроорганизмов.

Стоит отметить, что другие структуры, которые могут присутствовать в прямом образце, такие как лейкоциты или эритроциты, также не проникают.

Однако, если микроорганизмы мертвы, краситель может проникнуть внутрь них, так что это окрашивание также полезно для оценки жизнеспособности микроорганизмов.

Техника

материалы

Нигрозин

Нигрозин получил свое название от черного цвета, который он имеет. Это синтетическое вещество, которое получают при нагревании смеси органических соединений, таких как нитробензин, анилин и гидрохлорит анилина, с использованием катализатора (железа или меди) в указанной реакции.

Китайские чернила

Китайские туши - это вещество, которое азиаты используют в основном для письма, изготовления произведений искусства и монохромной живописи. Это очень популярно в китайской культуре.

Его получают из чернил кальмара, смешанных с измельченным древесным углем, продукта сжигания слабосмолистых деревьев.

Его также можно приготовить из сажи от сжигания углеводородов (растительных масел) вместе с белковым желатином, который придает ему нужную консистенцию, чтобы избежать осаждения частиц углерода.

Технические условия для отбора проб

- Не требует голодания.

- Образец СМЖ, мокроты или стерильной жидкости должен содержать не менее 1 мл объема и должен быть немедленно передан в лабораторию при комнатной температуре.

- Пробы спинномозговой жидкости и стерильной жидкости должен брать специализированный врач.

- Это также может быть чистая культура подозрительного штамма, связанного с вышеупомянутыми патогенами.

Выполнение техники с прямыми пробами

- Образцы необходимо центрифугировать, затем супернатант сливают и отбирают осадок.

- На чистое предметное стекло помещают каплю центрифугированного материала (осадок) и каплю туши или нигрозина.

- Его следует хорошо перемешать и накрыть покровным стеклом, чтобы капля растеклась тонкой пленкой, не выходя за края.

- Затем препарат помещается на микроскоп.

- Если препарат слишком темный, его можно разбавить водой.

Выполнение методики со штаммами из культуры

- С помощью иглы для посева берут очень небольшую часть молодой культуры и растворяют в капле туши, предварительно помещенной на чистое предметное стекло.

- Сверху ставится покровное стекло.

- Это наблюдается в микроскоп при 10-кратном, а затем при 40-кратном.

Вы также можете растворить часть колонии в дистиллированной воде, а оттуда взять каплю и смешать ее с индийскими чернилами. Таким образом, подготовка не будет такой густой, что позволит рассматривать конструкции изолированно; если будет толпа, это будет плохо наблюдаться.

Другая методология следующая:

- Поместите каплю суспензии культуры на один конец предметного стекла.

- На тот же конец капните каплю нигрозина и перемешайте.

- С помощью другого предметного стекла разложите образец, как будто делаете гематологический мазок.

- Дайте высохнуть и наблюдайте под микроскопом.

Наблюдение под микроскопом

Сначала вы должны сфокусироваться с объективом 10X, чтобы иметь широкий обзор поля. Впоследствии следует искать, есть ли свободные места; если есть, сфокусируйтесь на 40X, чтобы увидеть детали.

преимущество

- Легко выполнить.

- Это недорогая техника.

- Этот метод не требует закрепления мазка нагреванием или химическими веществами; поэтому микроорганизмы наблюдаются без искажений.

- Свежий препарат не нужно сушить, поэтому его можно сразу наблюдать, что быстро дает результаты.

Недостаток

После сборки необходимо немедленно наблюдать за свежими препаратами; если им дать высохнуть, их уже невозможно будет наблюдать и необходимо установить новый.

Окрашивание тканей тушью

Еще одна функция, которую могут выполнять индийские чернила, - это лаборатория патологии. Это применяется к образцам ткани, извлеченным хирургическим путем, чтобы отметить границы резекции опухоли.

На отмеченную ткань опрыскивают уксусной кислотой. Это действует как протрава и предотвращает вытекание чернил, когда ткань подвергается стандартной обработке для подготовки к биопсии.

Процедура заключается в омовении ткани в спирте и ксилоле, а затем в парафиновом воске. Эта маркировка направляет патолога при осмотре ткани, указывая, где находится хирургический край резекции или другая интересующая точка.

Ссылки

1. «Нигрозина». Википедия, свободная энциклопедия. 11 июля 2017 г., 22:46 UTC. 6 янв 2019, 16:56: en.wikipedia.org
2. «Китайская тушь». Википедия, свободная энциклопедия. 1 октября 2018 г., 03:08 UTC. 6 янв 2019, 18:20: es.wikipedia.org/
3. Сильва Л., Сильва С., Фернандес Н., Буэно С., Торрес Дж., Рико М., Масиас Дж. И соавторы. (2006). Трудовые кадры автономного сообщества Эстремадура. Конкретная повестка дня Том IV. Редакция MAD. Севилья-Испания, стр 211-212.
4. Сильва М., Гарсия М., Корралес Дж., Понсе Э. (2006). Техник-лаборант Галицкой службы здравоохранения (СЕРГАС). Конкретная тема повестки дня. Том 2. От редакции МАД. Севилья-Испания, стр 79-80.
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Микробиологическая диагностика Бейли и Скотта. 12 изд. Аргентина. Редакция Panamericana SA