ПИТАТЕЛЬНЫЙ АГАР: ОБОСНОВАНИЕ, ПОДГОТОВКА И ИСПОЛЬЗОВАНИЕ - БИОЛОГИЯ - 2025

Питательный агар является неселективной средой и не дифференциальной твердой культуры. В этой среде растут все виды бактерий, не требовательных с точки зрения питания.

Это простая среда, и, несмотря на свое название, она имеет более низкую пищевую ценность по сравнению с другими аналогичными средами, такими как агар для инфузии сердца мозга или триптиказо-соевый агар.

Подсчет колоний на питательном агаре

Его полезность в лаборатории очень разнообразна. Он в основном используется для субкультивирования видов, поддержания штаммов, подсчета колоний, среди прочего, в качестве основы для приготовления кровяного агара.

Точно так же, благодаря светло-бежевому цвету, производство пигментов, генерируемых некоторыми бактериальными штаммами, может быть исключено, например, зеленоватый пигмент синегнойной палочки, кирпично-красный пигмент, производимый Serratia marcescens при комнатной температуре, золотисто-желтый пигмент стафилококка. aureus и другие.

Кроме того, это один из самых дешевых средств выращивания на рынке.

основа

Как уже упоминалось выше, это очень простая среда, которая зависит от обеспечения питательными веществами для роста бактерий без ограничений и без сложных реакций для интерпретации.

Поскольку среда полупрозрачная, она идеально подходит для подсчета колоний методом глубинного высева.

Сочинение

Он состоит в основном из мясного или дрожжевого экстракта, пептонов или желатинового панкреатического переваривающего вещества, агар-агара, хлорида натрия и дистиллированной воды.

Мясной или дрожжевой экстракт и пептоны представляют собой основные источники углерода и минералов (азота, фосфора и серы), которые будут использоваться бактериями в качестве источника энергии и факторов роста.

Точно так же агар-агар является основой всех твердых питательных сред, пришедших на замену желатину, который был первым основным соединением, используемым Робертом Кохом для придания твердой консистенции его средам.

Агар - это полисахарид, состоящий из галактозы, галактоманнана, агарозы и агаропектина. Он схватывается при 40 ° C и плавится около 100 ° C.

Со своей стороны, хлорид натрия обеспечивает среде осмолярность, необходимую для развития бактерий.

Наконец, вода служит для гидратации и растворения лиофилизированных соединений. Следует использовать дистиллированную воду с нейтральным pH. Не следует использовать водопроводную воду, поскольку она содержит кальций и магний, которые могут реагировать с фосфатами в среде и образовывать нерастворимые соли.

подготовка

На один литр питательного агара необходимо взвесить 31 г обезвоженной среды. Поместите его в колбу и растворите в литре дистиллированной воды. После 5 минут отстоя нагреть на источнике тепла и постоянно перемешивать до кипения в течение 1-2 минут.

Приготовление питательной среды.

Затем колбу помещают в автоклав и стерилизуют при 121 ° C в течение 20 минут.

Стерилизация в автоклаве

По окончании времени его вынимают из автоклава и подают в стерильные чашки Петри с использованием вытяжного шкафа с ламинарным потоком или горелки Бунзена.

Если чашки Петри одноразовые (пластиковые), среду следует распределять при температуре агара около 50 ° C, чтобы предотвратить их деформацию из-за чрезмерного нагрева.

Дать застыть и хранить в перевернутом держателе тарелок и охладить при 2-8 ° C до использования.

Перед посевом пластины необходимо закалить. Не следует использовать чашки с питательным агаром, если они загрязнены или обезвожены.

PH приготовленной среды должен быть доведен до 7,3 ± 0,2.

Приложения

Это простейшая питательная среда, используемая в микробиологической лаборатории. Его состав отлично подходит для роста нетребовательных бактерий.

Его основные применения описаны ниже:

Как основа для приготовления кровяного агара

Эта среда иногда используется в качестве основы для приготовления кровяного агара, однако она не является наиболее часто используемой основой.

Стимулируют спороношение спорообразующих бактерий

Эта питательная среда особенно полезна для стимуляции споруляции спорообразующих бактерий, таких как Bacillus sp.

Для этого высевают штамм рода Bacillus и инкубируют в течение 24 часов при 37 ° C при аэробиозе. После того, как колонии вырастут, чашку подвергают температурному стрессу, то есть температуру в духовке повышают до 44 ° C и оставляют еще на 24 часа или помещают в холодильник на 24 часа.

По истечении этого времени берут мазки культуры и окрашивают по Граму или по Шефферу-Фултону для окрашивания спор. В них будут наблюдаться бациллы с эндоспорами (споры внутри палочки) и экзоспорами (споры вне палочки).

Поддержание штамма

Некоторые исследовательские или университетские лаборатории поддержки преподавания требуют как можно дольше поддерживать жизнеспособные бактерии, имеющие клиническое значение, чтобы использовать банк бактерий (bacterioteca) для исследовательской работы или для подготовки учебных практик, если Студенты научатся манипулировать и идентифицировать эти микроорганизмы.

Для этой цели можно использовать питательный агар, а также агар для инфузий мозга и сердца. Готовят агар, разливают в пробирки с бакелитовой крышкой и наклоняют на дно так, чтобы агар затвердел, образуя блок внизу и скос на поверхности (желобчатый клюв).

На каждой пробирке указано название бактерии, которую нужно высеять, и дата. Каждую из бактерий высевают на скос и инкубируют в течение 24 ч. После того, как колонии вырастут, пробирки хранят при комнатной температуре.

Бактериотеку необходимо обновлять от 1 до 3 месяцев, чтобы избежать загрязнения и обезвоживания среды, а также гибели бактерий.

Таким образом можно поддерживать только непривередливые бактерии.

Подсчет колоний

Хотя существуют специальные средства для подсчета колоний, такие как стандартный агар для подсчета, для этой цели можно использовать питательный агар, высев с поверхности шпателем Дригальского или по глубине. По этой причине он очень полезен при микробиологическом анализе пищи и воды.

Проведение диагностических тестов

Поскольку это среда, не содержащая крови или каких-либо других добавок, она идеально подходит для взятия колоний, выращенных на этой среде, для проведения теста на каталазу.

Аналогичным образом, из-за его светлого цвета рекомендуется проводить тесты на оксидазу непосредственно на засеянном участке агара без каких-либо помех.

Восстановление мезофильных аэробов из рекреационных соленых вод (пляжи)

Питательный агар, приготовленный с 10% морской водой, полезен для оценки мезофильных аэробов в прибрежных водах.

Таким образом, можно оценить реальный уровень загрязнения воды этими микроорганизмами, поскольку в образцах этого типа результаты перекрываются при использовании питательных сред, приготовленных обычным способом.

Это было продемонстрировано Cortez et al. в 2013 г. в научно-исследовательской работе.

Это можно объяснить резким изменением, которое бактерии претерпевают при переходе из гиперсоленой среды в среду с низким содержанием соли, поэтому микроорганизмы входят в состояние летаргии, в котором они жизнеспособны, но не культивируются.

Ссылки

1. «Питательный агар». Википедия, свободная энциклопедия. 13 сен 2016, 20:33 UTC. 29 декабря 2018, 21:04 en.wikipedia.org
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Микробиологический диагноз Бейли и Скотта. 12 изд. Аргентина. Редакция Panamericana SA
3. Конеман Э, Аллен С., Джанда В., Шрекенбергер П., Винн В. (2004). Микробиологическая диагностика. (5-е изд.). Аргентина, редакция Panamericana SA
4. Кортез Дж., Руис Ю., Медина Л., Вальбуэна О. Влияние питательных сред, приготовленных с морской водой, на показатели здоровья в морских водах курортов в Чичиривиче, штат Фалькон, Венесуэла. Rev Soc Ven Microbiol 2013; 33: 122-128
5. Паредес В., Диас В., Сильва де Алмейда М. и Кардосо М. Микробиологическое качество воды для доз для осеменения свиней. Cient.Agro.Amaz. 2013; 1 (2): 42-49.
6. Гарсия П., Паредес Ф., Фернандес дель Баррио М. (1994). Практическая клиническая микробиология. Университет Кадиса, 2-е издание. Служба публикаций УЦА.