КОАГУЛАЗНЫЙ ТЕСТ: ОБОСНОВАНИЕ, ПРОЦЕДУРА И ИСПОЛЬЗОВАНИЕ - БИОЛОГИЯ - 2025

Тест на коагулазу - это лабораторный метод, используемый для выявления присутствия фермента коагулазы. Этот фермент обладает свойством коагулировать плазму. Леб в 1903 году первым описал этот фермент.

Этот тест проводится на грамположительных каталаза-положительных кокках, что позволяет отличить штаммы Staphylococcus aureus от остальных стафилококков, поскольку это единственный клинически важный микроорганизм, который его продуцирует.

Оба изображения показывают положительный тест на коагулазу. Источник: Изображение слева: Филиппинджл. Изображение справа: Фотография сделана автором MSc. Мариельса Гил.

В этом смысле члены семейства Staphylococaceae с отрицательным результатом теста часто называются коагулазонегативными стафилококками.

Есть некоторые штаммы, кроме S. aureus, которые могут продуцировать коагулазу, такие как Staphylococcus schleiferi spp coagulans, S. hyicus, S. intermediateus и S. delphini.

Однако первые три имеют клиническое значение на ветеринарном уровне и очень редко могут быть обнаружены в качестве возбудителя инфекций у людей, в то время как S. delphini обнаруживается только в морской среде.

Кроме того, они легко дифференцируются, поскольку S. hyicus и S. intermediateus не ферментируют маннит, а S. schleiferi spp coagulans не ферментируют мальтозу или трегалозу, тогда как S. aureus ферментирует эти углеводы.

Присутствие фермента коагулазы связано с вирулентностью штаммов. Однако эта теория разваливается, поскольку наблюдаются другие вирулентные коагулазонегативные виды, способные вызывать серьезные инфекции.

основа

интерпретация

Агглютинация в течение 5-20 секунд (стойкий положительный тест).

Переменная агглютинация, происходящая от 20 секунд до одной минуты (отложенный положительный тест).

Некоторая степень агглютинации через одну минуту (сомнительные доказательства). Рекомендуется повторить тест или подтвердить пробиркой.

Агглютинации нет (тест отрицательный).

Результат с SSF. Он всегда должен давать отрицательный результат, если он дает положительный результат автоматически, результат теста считается недействительным.

-Трубный тест на коагулазу

материалы

-Стерильная пробирка

-Плазма

-Баня Марии при 37 ° C.

Техника

С помощью стерильной пипетки внесите 0,5 мл плазмы в пробирку 12 x 75. Загрузите в платиновую петлю от 2 до 4 чистых колоний для исследования из твердой культуры в течение 18-24 часов и растворите в плазме. тщательно перемешайте и инкубируйте при 37 ° C в течение 4 часов.

В течение первого часа осмотрите пробирку, не встряхивая ее, просто осторожно наклоните. Если сгусток все еще не виден, его можно продолжать наблюдать каждые 30 минут, пока не пройдут 4 часа. Если через 4 часа результат все еще отрицательный, его можно оставить на 24 часа, но при комнатной температуре. Наблюдайте и сообщайте результат.

Основываясь на опыте, некоторые микробиологи рекомендуют использовать для проведения теста 500 мкл бактериальной суспензии из 18-часовой культуры в жидкой среде.

Похоже, что он дает более быстрые и надежные результаты, чем при эмульгировании колоний из твердых сред, особенно если использовалась человеческая плазма, полученная из банка крови.

Использование штаммов из бульона помогает уменьшить возможное присутствие в плазме человеческих антистафилококковых антител, которые могут ингибировать действие коагулазы.

интерпретация

Если замечен сгусток, который охватывает всю жидкость (полное свертывание) или сгусток, в котором ничего не осталось (частичное свертывание), это следует рассматривать как положительный результат.

Если сгустка не образуется, то есть суспензия остается однородной, тест отрицательный.

-Коагулазный тест с использованием фибриногена

Фибриноген используется так же, как плазма, и используется как для тестов на предметных стеклах, так и в пробирках. Действуйте, как описано для плазмы, и интерпретируйте таким же образом.

использование

Он используется для дифференциации золотистого стафилококка от коагулазонегативных стафилококков.

QA

Имейте свежие культуры штамма S. aureus для использования в качестве положительного контроля. Штамм S. epidermidis также доступен в качестве отрицательного контроля.

Ограничения

-Положительный тест не следует оставлять в инкубации на 24 часа, поскольку S. aureus продуцирует фибринолизин, растворяющий сгусток.

-Для получения достоверных результатов следует использовать свежую или недавно восстановленную плазму, а также важно использовать свежие бактериальные культуры (от 18 до 24 часов). Это позволяет избежать ложноотрицательных результатов.

-Тест необходимо проводить вместе с отрицательным и положительным контролем.

-Некоторые твердые среды могут мешать тесту на коагулазу. Не рекомендуется использовать колонии из соленого маннитового агара.

-При использовании цитратной плазмы рекомендуется вводить 5 единиц гепарина на мл плазмы, чтобы избежать ложноположительных результатов. Это связано с тем, что некоторые микроорганизмы, кроме S. aureus, могут расщеплять цитрат и вызывать свертывание плазмы. В этом случае желательно сделать тест по Граму и каталазе.

- В пробирке важно контролировать реакцию каждые 30 минут, так как есть штаммы S. aureus, которые продуцируют высокие концентрации фибринолизина и быстро разжижают вновь образованный сгусток. Избегайте ложных негативов.

-При мониторинге теста избегайте резкого встряхивания пробирки, это может разрушить начало образования сгустка, который не будет восстановлен позже, что приведет к ложноотрицательным результатам.

Ссылки

1. Конеман Э, Аллен С., Джанда В., Шрекенбергер П., Винн В. (2004). Микробиологическая диагностика. 5-е изд. Редакция Panamericana SA Аргентина.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Микробиологический диагноз Бейли и Скотта. 12 изд. Редакция Panamericana SA Аргентина.
3. Мак Фаддин Дж. (2003). Биохимические тесты для идентификации бактерий, имеющих клиническое значение. 3-е изд. Редакция Panamericana. Буэнос айрес. Аргентина.
4. Pro-Lab Laboratories. Кролик свертывает плазму. Доступно на: pro-lab.com
5. «Коагулаза». Википедия, свободная энциклопедия. 12 фев 2019, 04:23 UTC. 22 апр 2019, 15:50 wikipedia.org.