ГИСТОХИМИЯ: ОБОСНОВАНИЕ, ОБРАБОТКА, ОКРАШИВАНИЕ - БИОЛОГИЯ - 2025

Гистохимический является полезным инструментом в изучении морфологии различных биологических тканей (растения и животные) из - за его принцип реакции компонентов ткани , таких как углеводы, липиды и белки, в частности, химические красители.

Этот ценный инструмент позволяет не только определять состав и структуру тканей и клеток, но и различные реакции, которые в них происходят. Точно так же может быть доказано возможное повреждение тканей, вызванное присутствием микроорганизмов или других патологий.

Гистохимические пятна. Вирус Нила, грамположительные и грамотрицательные бактерии (Gram), Histoplasma capsulatum (Grocott), Mycobacterium tuberculosis (Ziehl Neelsen). Источник: Pixinio.com/Wikipedia.org/Nephron / CDC / Dr. Джордж П. Кубица

Гистохимия прошлых веков внесла важный вклад, такой как демонстрация существования гематоэнцефалического барьера Полем Эрлихом. Это стало возможным, потому что мозг экспериментального животного, использованного Эрлихом, не был окрашен анилином, который является основным красителем.

Это привело к использованию различных красителей, таких как метиленовый синий и индофенол, для окрашивания различных типов клеток. Это открытие привело к классификации клеток на ацидофильные, базофильные и нейтрофильные в соответствии с их специфическим окрашиванием.

Недавние исследования применили этот метод, чтобы показать присутствие различных соединений, включая фенолы, а также углеводы и неструктурные липиды, в тканях видов Litsea glaucescens, более известных как лавр. Найти их как в листе, так и в древесине.

Аналогичным образом, Colares et al, 2016 определили интересующее лекарство растение Tarenaya hassleriana, используя гистохимические методы. У этого вида обнаружено присутствие крахмала, мирозина, а также фенольных и липофильных соединений.

основа

Гистохимия основана на окрашивании клеточных структур или молекул, присутствующих в тканях, благодаря их сродству со специфическими красителями. Реакция окрашивания этих структур или молекул в их первоначальном формате позже визуализируется в оптическом микроскопе или электронном микроскопе.

Специфичность окрашивания обусловлена ​​присутствием ионоакцепторных групп в клетках или тканевых молекулах.

Наконец, цель гистохимических реакций - показать это при окрашивании. От самых больших биологических структур до мельчайших тканей и клеток. Этого можно добиться благодаря тому, что красители химически реагируют с молекулами тканей, клеток или органелл.

судебное преследование

Гистохимическая реакция может включать этапы, предшествующие выполнению техники, такие как фиксация, заделка и разрезание ткани. Следовательно, необходимо учитывать, что на этих этапах идентифицируемая структура может быть повреждена, что приведет к ложноотрицательным результатам, даже если она присутствует.

Несмотря на это, важна предварительная фиксация ткани, выполненная должным образом, поскольку она предотвращает автолиз или разрушение клеток. Для этого используются химические реакции с такими органическими растворителями, как формальдегид или глутаральдегид, среди прочих.

Включение ткани сделано таким образом, чтобы она сохраняла свою прочность при разрезании и, таким образом, не допускала деформации. Наконец, делается разрез с помощью микротома для исследования образцов с помощью оптической микроскопии.

Кроме того, перед тем, как приступить к гистохимическому окрашиванию, рекомендуется включать внешние или внутренние положительные контроли в каждую серию тестов. А также использование специальных красителей для исследуемых структур.

Гистохимические пятна

С момента появления гистохимических методов до настоящего времени использовался широкий спектр красителей, в том числе наиболее часто используемые, такие как: Periodic acid Schiff (PAS), Grocott, Ziehl-Neelsen и Gram.

Точно так же реже использовались другие красители, такие как тушь, орсеин или трихромное пятно Массона.

Периодическая кислота Шиффа (ПАС)

При такой окраске можно наблюдать молекулы с высоким содержанием углеводов, такие как гликоген и муцин. Однако он также полезен для идентификации таких микроорганизмов, как грибы и паразиты. Помимо определенных структур (базальная мембрана) в коже и других тканях.

Основанием для этого окрашивания является то, что краситель окисляет углеродные связи между двумя соседними гидроксильными группами. Это приводит к высвобождению альдегидной группы, что обнаруживается реактивом Шиффа, выделяя пурпурный цвет.

Реагент Шиффа состоит из основного фуксина, метабисульфита натрия и соляной кислоты, эти компоненты отвечают за пурпурную окраску при наличии альдегидных групп. В противном случае образуется бесцветная кислота.

Интенсивность окраски будет зависеть от количества гидроксильных групп, присутствующих в моносахаридах. Например, у грибов, базальных мембран, муцинов и гликогена цвет может варьироваться от красного до фиолетового, а ядра окрашиваются в синий цвет.

Grocott

Это одно из красителей с наивысшей чувствительностью для выявления грибков в тканях, залитых парафином. Это позволяет идентифицировать различные грибковые структуры: гифы, споры, эндоспоры и другие. Поэтому он считается обычным красителем для диагностики микоза.

Он особенно используется при диагностике легочных микозов, таких как пневмоцистоз и аспергиллез, вызываемых некоторыми грибами родов Pneumocystis и Aspergillus соответственно.

Этот раствор содержит нитрат серебра и хромовую кислоту, которая является фиксатором и красителем. Обоснованием является то, что эта кислота вызывает окисление гидроксильных групп до альдегидов мукополихаридами, присутствующими в структурах грибов, например, в клеточной стенке грибов.

Наконец, серебро, присутствующее в растворе, окисляется альдегидами, вызывая черное окрашивание, которое называется реакцией аргентафина. Также можно использовать контрастные красители, такие как светло-зеленый, и, таким образом, грибковые структуры будут отображаться черным цветом на светло-зеленом фоне.

Циля-Нильсен

Это окрашивание основано на наличии кислотно-спиртовой устойчивости, частично или полностью, у некоторых микроорганизмов, таких как роды Nocardia, Legionella и Mycobacterium.

Использование этого красителя рекомендуется, так как клеточная стенка ранее упомянутых микроорганизмов содержит сложные липиды, препятствующие проникновению красителей. Особенно в пробах из дыхательных путей.

В нем используются сильные красители, такие как карбол фуксин (основной краситель), и нагревается, чтобы микроорганизмы могли удерживать краситель, и он не обесцвечивался кислотами и спиртами. Наконец, для окрашивания обесцвеченных структур наносится раствор метиленового синего.

Наличие кислотно-спиртовой устойчивости наблюдается у структур, окрашенных в красный цвет, в то время как структуры, не устойчивые к выцветанию, окрашиваются в синий цвет.

Грамм и китайские чернила

Краска по Граму очень полезна, в частности, при диагностике бактериальных и грибковых инфекций. Это окрашивание позволяет различать грамположительные и грамотрицательные микроорганизмы, четко показывая различия, существующие в составе клеточной стенки.

В то время как тушь India - это краситель, который используется для контрастирования структур, содержащих полисахариды (капсулы). Это связано с тем, что в окружающей среде образуется кольцо, что возможно у Cryptococcus neoformans.

Orcein

При таком окрашивании окрашиваются эластичные волокна и хромосомы различных клеток, что позволяет оценить процесс созревания последних. По этой причине он оказался очень полезным в цитогенетических исследованиях.

Это основано на поглощении красителя отрицательным зарядом молекул, таких как ДНК, присутствующих в ядрах самых разных клеток. Итак, они окрашены от синего до темно-фиолетового.

Трихром Массона

Это пятно используется для идентификации некоторых микроорганизмов или материалов, содержащих меланические пигменты. Это случай микозов, вызываемых дематиозными грибами, феогифомикозом и эумицетомой черного зерна.

Последние мысли

В последние годы было много достижений в создании новых диагностических методов, в которых задействована гистохимия, но она связана с другими основами или принципами. Эти методы имеют другое назначение, как в случае иммуногистохимии или энзимогистохимии.

Ссылки

1. Acuña U, Elguero J. Histoquímica. An. Chem. 2012; 108 (2): 114-118. Доступно на: are.iqm.csic.es
2. Mestanza R. Частота гистохимических окрашиваний PAS, Grocott и Ziehl-Neelsen, используемых для идентификации микроорганизмов, выполненных в Службе патологической анатомии специализированной больницы Eugenio Espejo в 2015 г. Центральный университет Эквадора, Кито; 2016. Доступно на: dspace.uce.edu
3. Тапиа-Торрес Н., де ла Пас-Перес-Ольвера С., Роман-Герреро А., Кинтанар-Исайас А., Гарсиа-Маркес Е., Крус-Соса Ф. Гистохимия, общее содержание фенола и антиоксидантная активность лицевого листа и древесины glaucescens Kunth (Lauraceae). Лес и леса. 2014; 20 (3): 125-137. Доступно на: redalyc.org
4. Коларес, Миннесота, Мартинес-Алонсо, С., Арамбарри, AM. Анатомия и гистохимия Tarenaya hassleriana (Cleomaceae), вида, представляющего медицинский интерес. Бюллетень лекарственных и ароматических растений Латинской Америки и Карибского бассейна, 2016 г .; 15 (3): 182-191. Доступно на: redalyc.org
5. Бонифаз А. Основы медицинской микологии. 4-е издание. Мексика: редакторы McGraw-Hill Interamericana, SA de CV 2012.
6. Сильва Диего Филипе Безерра, Сантос Хеллен Бандейра де Понтес, Леон Хорхе Эскиш, Гомеш Далянья Кейрога де Кастро, Алвес Поллианна Мунис, Нонака Кассиано Франсиско Вееге. Клинико-патологический и иммуногистохимический анализ веретеноклеточного плоскоклеточного рака языка: редкий случай. Эйнштейн (Сан-Паулу) 2019; 17 (1): eRC4610. Доступно на: scielo.br