ПЯТНО МАЙ ГРЮНВАЛЬДА-ГИМЗЫ: ОБОСНОВАНИЕ, ТЕХНИКА И ПРИМЕНЕНИЕ - БИОЛОГИЯ - 2024

Мая Грюнвальд-Гимз или Паппенхайм пятно представляет собой дифференциальный метод окрашивания , который смешивает Гимз и май Грюнвальд реагенты. Он используется для дифференциации нормальных и аномальных клеток крови в мазках периферической крови и костного мозга, а также для окрашивания гистологических срезов и цитологических образцов.

Оба реагента - Гимза и Май Грюнвальд - получены путем окрашивания по типу Романовского, методики, основанной на сочетании кислотных и основных красителей.

Мазок, показывающий сегментированный нейтрофил и миллеоцит в случае хронического миелоидного лейкоза, окрашенный красителем May Grünwald Giemsa. Д-р Рамон Симон-Лопес (https://es.m.wikipedia.org/wiki/Archivo:LMC-1.JPG) через Wikipedia.org.

Гимза усовершенствовал методику, стабилизируя смесь эозина, метиленового синего и их производных глицерином. Вместо этого Мэй Грюнвальд использует эозин и метиленовый синий, используя метанол в качестве растворителя. Эта стратегическая комбинация дала отличные результаты.

Хотя с точки зрения наблюдения за морфологией клеток он действует аналогично окрашиванию по Гимзе и Райту, этот метод улучшает предыдущие, улучшая окрашивание паразитов, вызывающих малярию, болезнь Шагаса, лейшманиоз и трихомониаз.

Кроме того, это оказалось очень полезным методом для цитологического исследования семенной жидкости. Он выделяется не только тем, что показывает морфологические характеристики сперматозоидов, но и позволяет с большой эффективностью дифференцировать лейкоциты, эпителиальные клетки и клетки сперматогенеза.

основа

Техника основана на красителях Романовского, в которых кислотные красители обладают избирательным сродством к основным клеточным компонентам, а кислотные компоненты притягивают основные пятна.

Другими словами, как клеточные структуры, так и красители имеют положительные или отрицательные электрические заряды; одинаковые заряды отталкиваются, и разные заряды притягиваются.

Например, основные красители, такие как метиленовый синий, заряжены положительно и притягиваются к отрицательно заряженным структурам. Вот почему этот краситель окрашивает ядра, богатые ДНК и РНК, которые имеют отрицательно заряженные фосфатные группы.

Также окрашиваются гранулы сегментированных базофилов и цитоплазма мононуклеарных лейкоцитов, содержащих РНК.

Точно так же кислотный краситель несет отрицательный заряд, поэтому он связывается с положительно заряженными структурами, такими как эритроциты и гранулы сегментированных эозинофилов. Что касается гранул сегментоядерных нейтрофилов, то они фиксируют оба красителя.

Разнообразие красителей

В этой технике сосуществует комбинация реакций между ортохроматическими и метахроматическими красителями. Ортохроматические соединения (эозин и метиленовый синий) связываются с клеточной структурой, к которой они относятся, и обеспечивают стабильный цвет, который не меняется.

С другой стороны, метахроматы (производные метиленового синего, лазурного А и лазурного В) меняют свой первоначальный цвет после присоединения к определенной структуре, и даже могут быть разные оттенки.

Наконец, шаг, который предпринимает раствор May Grünwald, требует присутствия воды, так как без этого краситель проникнет в структуры, но не закрепится. Чтобы это произошло, краситель должен стать полярным или ионизированным и, таким образом, иметь возможность осаждаться и связываться с соответствующими структурами.

Техника

материалы

- Слайды слайдов.

- Мосты окраски.

- Решение Мая-Грюнвальда.

- Пятно Гимзы.

- Дистиллированная вода.

Концентрированный раствор красителя May Grünwald

0,25 г эозин-метиленового синего (окраска по Май Грюнвальду) необходимо взвесить и растворить в 100 мл метанола. Затем препарат перемешивают 1 час и оставляют на 24 часа. Когда время истекло, оно фильтруется.

Чтобы применить методику, краситель May Grünwald необходимо разбавить следующим образом: на 200 мл разбавленного красителя отмерьте 30 мл концентрированного раствора, добавьте 20 мл буферного раствора и 150 мл дистиллированной воды с доведением pH до 7,2-7,3. . Позже его смешивают и фильтруют.

Концентрат красителя Гимза

0,5 г азур-эозин-метиленового синего (краситель по Гимзе) необходимо взвесить, растворить в 50 мл метанола и добавить к смеси 50 мл глицерина.

Для выполнения техники разведите буферный раствор 1:10 и дайте ему постоять 10 минут. При необходимости его можно отфильтровать.

Приготовление буферного раствора при pH 7,2.

Их следует взвесить:

- 40 мг дигидрофосфата калия (KH2PO4).

- 151 мг 12-гидрата гидрофосфата натрия (Na2HPO4).

Оба соединения растворяются в 100 мл воды.

Процедура окрашивания мазка крови или костного мозга

Есть два режима: классический и быстрый.

Классический режим

1. Покройте мазки разбавленным раствором Мая-Грюнвальда на 2–3 минуты.
2. Промойте забуференной дистиллированной водой, чтобы удалить предыдущий раствор.
3. Накройте тем же забуференным промывочным раствором и оставьте на 1 минуту. Идея состоит в том, что предыдущий краситель фиксируется на структурах и в то же время клетки гидратируются.
4. Добавьте 12 капель разбавленной настойки Гимзы в забуференную воду и продуйте, чтобы перемешать и гомогенизировать. Оставьте на 15-20 минут.
5. Промойте мазки забуференной дистиллированной водой и высушите на воздухе.
6. Сфокусируйте и просмотрите окрашенные клетки крови под световым микроскопом с помощью объектива 40X. При необходимости можно использовать 100X.

Быстрый режим

1. Покройте мазок разбавленным красителем May Grünwald на 1 минуту.
2. Промыть забуференной дистиллированной водой.
3. Залейте буферной водой и дайте постоять 1 минуту.
4. Добавьте разбавленное пятно Гимзы и оставьте на 5 минут.
5. Вымойте забуференной дистиллированной водой и дайте высохнуть на воздухе.

Описанные здесь методы являются ориентировочными, но следует учитывать, что процедуры и время окрашивания различаются в зависимости от коммерческой компании, распространяющей реагенты. Желательно следовать инструкциям, строго указанным каждым коммерческим домом.

Техника окрашивания мазков семенной жидкости

1- Покройте мазок тонким слоем раствора May Grünwald на 4 минуты.

2- Удалите краситель и промойте дистиллированной водой.

3- Поместите слой разбавленного Giemsa (1:10) в дистиллированную воду на 15 минут.

4- Удалите краситель и промойте дистиллированной водой.

5- Дайте высохнуть и наблюдайте под микроскопом.

Ожидаемые цвета с морилкой May Grünwald Giemsa

Важные характеристики

Этот метод требует, чтобы реагенты и промывочные растворы имели pH, доведенный до 7,2-7,3, чтобы не искажалось сродство красителей к клеточным структурам и не изменялся ожидаемый окончательный цвет.

Приложения

Этот метод используется клиническими лабораториями для окрашивания мазков периферической крови и костного мозга, срезов тканей и цитологических исследований.

В гематологии этот метод имеет жизненно важное значение при изучении аномалий клеток с точки зрения формы, размера и количества. Это очень ценный инструмент для диагностики некоторых заболеваний, таких как лейкемии и анемии.

Кроме того, он очень полезен при поиске паразитов в гематологических (Plasmodium sp и Trypanosoma cruzi) или гистологических (Leishmanias sp) областях.

Вагинальная цитология

Что касается цитологии влагалища, этот метод особенно полезен для наблюдения за Trichomonas vaginalis. Это важное открытие, поскольку его присутствие имитирует изображения карциномы in situ, которые позже исчезают, когда паразит уничтожается.

Образец спермы

Это идеальный инструмент для исследования образцов спермы, поскольку он предоставляет ценную информацию о качестве спермы.

Предлагаемые данные касаются в основном количества и морфологии, а также сопутствующих клеток, которые могут присутствовать и имеют жизненно важное значение, таких как половые клетки, лейкоциты и эпителиальные клетки.

С помощью этого анализа можно описать аномалии, наблюдаемые в сперматозоидах в голове, шее, средней части и основной части.

Кроме того, они также могут помочь выявить случаи гемоспермии (наличие эритроцитов в сперме) и лейкоспермии или пиоспермии (повышенное количество лейкоцитов в сперме).

Ссылки

1. Costamagna S, Prado M. Валидация свежего теста, окраски May Grünwald-Giemsa и Gram и питательных сред для диагностики Trichomonas vaginalis. Паразитол. 2001; 25 (1-2): 60-64. Доступно на: scielo.
2. Лаборатория Merck KGaA. Май Грюнвальд эозин метиленовый синий для микроскопии.
3. «Пятно Мая-Грюнвальда-Гимзы». Википедия, свободная энциклопедия. 15 ноя 2018, 14:37 UTC. 8 янв 2019, 04:29: en.wikipedia.org
4. Лаборатория Glass Chemicals Panreac. Реактивы для гистологических методов, гематологии и микробиологии. Доступно на: glasschemicals.com
5. Retamales E, Manzo V. Рекомендации по окрашиванию мазков крови для считывания гемограммы. Национальная и справочная биомедицинская лаборатория. Институт общественного здравоохранения Чили.
6. Сарабия Л. Спермограмма по критериям ВОЗ. Программа по анатомии и биологии развития. Школа медицины. Университет Чили. Доступно на: pp.centramerica.com