ОКРАШИВАНИЕ КИНЁН: ОБОСНОВАНИЕ И МЕТОДЫ - БИОЛОГИЯ - 2025

Окрашивание Kinyoun представляет собой метод окрашивания используется для окраски бактерий и паразитов кислоты спиртостойких. Он родился в результате модификации окраски Ziehl-Neelsen; Оба метода интерпретируются одинаково, но отличаются двумя элементами: приготовлением основного реагента и тем, что в методе киньюна не используется тепло.

По этой причине оно также известно как холодное окрашивание по Цилю-Нильсену или холодное окрашивание по Киньюну. Он показан для окрашивания Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium leprae, атипичных микобактерий, Nocardias sp, Cryptosporidium parvum, Cryptosporidium meleagridis, Cryptosporidium felis, Cryptosporidium muris и Cyccanlosporas cayetanlosporas.

Cryptosporidium parvum окрашивали красителем Киньюна. Punlop Anusonpornperm, из Wikimedia Commons

Стоит отметить, что Nocardia плохо окрашивает этот метод, поскольку они частично устойчивы к кислотам и спиртам, поэтому для этого рода существует модификация методики.

В свою очередь, метод холодного киньюна был объединен с техникой трихрома, модифицированной Дидье для обнаружения кокцидий (Cryptosporidium parvum и Isospora belli) и спор микроспоридий (Enterocytozoon bieneusi и Encephalitozoon Кишечник).

основа

Основным окрашивающим реагентом является карболфуксин или карболфуксин, который имеет свойство связываться с карболовыми кислотами, присутствующими в богатой липидами восковидной клеточной стенке (миколиновые кислоты) микобактерий и некоторых паразитов.

Этому связыванию не противодействует кислотный отбеливатель; поэтому микроорганизмы считаются кислотоустойчивыми.

В отличие от метода Циля-Нильсена, который фиксирует краситель за счет тепла, в технике Киньюна этот этап не требуется, поскольку раствор карболового фуксина, приготовленный для этого метода, содержит высокую концентрацию фенола.

Фенол растворяет липидный материал в клеточной стенке, позволяя проникать красителю карболфуксин. После того, как краситель проникнет, он остается закрепленным, несмотря на промывку кислотным спиртом.

Таким образом, кислотоустойчивые микроорганизмы приобретают характерный красный цвет, а все, что не является кислотоустойчивым, обесцвечивается и окрашивается в синий цвет.

Техника

материалы

- Карбол фуксин модифицированный.

- Спирт-кислота.

- Метиленовый синий.

Приготовление фуксина киньюн карбол

- Базовый фуксин: 4 гр.

- Фенол: 8 мл.

- Спирт (95%): 20 мл.

- Дистиллированная вода: 100 мл.

Основной фуксин следует медленно растворять в спирте, постоянно перемешивая. Затем кристаллизованный фенол плавят на водяной бане при 56 ° C. После растворения к приготовленному выше раствору фуксина добавляют 8 мл.

Приготовление кислотно-спиртовой

- Концентрированная соляная кислота: 3 мл.

- Этанол (95%): 97 мл.

Его необходимо измерить, соединить и перемешать.

Приготовление контрастного красителя метиленовый синий

- Метиленовый синий: 0,3 г.

- Дистиллированная вода: 100 мл.

Его взвешивают и растворяют.

Техника окрашивания кинён

1- Подготовьте мазок непосредственно из образца, который может быть мокротой, легочной жидкостью, осадком мочи, спинномозговой жидкостью или калом, среди прочего; или из суспензии микроорганизмов, полученных из чистых колоний, выращенных в первичных питательных средах.

2- Закрепите мазок теплом.

3- Поместите мазок на окрашивающий мостик и накройте подготовленным фуксиновым реагентом киньюнкарбол. Оставьте на 3-5 минут.

4- Промыть дистиллированной водой.

5- Отбелить кислым спиртом в течение 3 минут и снова промыть дистиллированной водой.

6. Снова отбелить кислотным спиртом в течение 1 или 2 минут, пока не перестанет исчезать окраска.

7- Промойте дистиллированной водой и дайте стечь, установив предметное стекло в вертикальное положение.

8- Покройте препарат метиленовым синим и оставьте на 4 минуты.

9- Промойте дистиллированной водой и дайте высохнуть на воздухе.

10- Изучите на 40X, а затем на 100X.

Чтобы улучшить и ускорить окрашивание кислотоустойчивых микроорганизмов, добавьте 1 каплю увлажняющего агента (например, Tergitol № 7) в 30 или 40 мл Kinyoun Carbol Fuchsin.

Некоторые лаборатории меняют контрастный краситель метиленовый синий на ярко-зеленый или пикриновую кислоту; первый придает фону зеленый цвет, а второй - желтый.

Специальная техника кинён при нокардии

Для улучшения окрашивания бактерий рода Nocardia используется модификация красителя Киньюна. Техника следующая:

1- Покройте мазок фуксином Kinyoun carbol на 3 минуты.

2- Промыть дистиллированной водой.

3- Кратковременно обесцветить 3% -ным кислотным спиртом до тех пор, пока окраска не исчезнет.

4- Снова промойте дистиллированной водой.

5- Покройте препарат метиленовым синим и дайте ему подействовать на 30 секунд.

6- Промойте дистиллированной водой и дайте высохнуть на воздухе.

Комбинированный метод карбол-фуксина и трихрома, модифицированный Дидье

Этот метод рекомендуется для одновременного анализа образцов стула на споры кокцидий и микроспоридий. Следуйте следующей процедуре:

1- Покройте мазок фуксином Kinyoun carbol на 10 минут.

2- Удалите краситель и промойте дистиллированной водой.

3- Отбеливать в течение 30 секунд солянокислым спиртом.

4- Снова промойте дистиллированной водой.

5- Покройте мазок раствором трихрома на 30 минут при 37 ° C.

6- Промыть дистиллированной водой.

7. Отбеливайте в течение 10 секунд спиртом уксусной кислоты.

8- Промойте мазок 95% этанолом в течение 30 секунд.

QA

В качестве положительного контроля готовят мазки со штаммами Mycobacterium tuberculosis и окрашивают реагентами, приготовленными для проверки того, что бактерии приобретают соответствующий цвет (красно-фуксия).

Отрицательные контроли также можно использовать, готовя мазки с любым штаммом, кроме кислого спирта, таким образом подтверждая, что весь образец принимает контрастный цвет.

Техника киньюна в сравнении с техникой Циля-Нильсена

Метод киньюна проще, поскольку он исключает этап нагрева, но его главное преимущество состоит в том, что он позволяет избежать выделения паров, высокотоксичных и вызывающих рак в долгосрочной перспективе. Таким образом, окраска Киньюна более безопасна для окрашивания персонала.

Важно учитывать, что необходимо следить за тем, чтобы реагенты не вступали в прямой контакт с кожей, так как они вызывают коррозию, а отбеливатель легко воспламеняется.

Что касается недостатков, отрицательный мазок не обязательно свидетельствует об отсутствии организма. Кроме того, наличие клеточного мусора может привести к ложноположительным результатам, что приведет к путанице в диагностике.

Ссылка

1. Прикладная клиническая химия. (2016). Комплект BK Kinyoun, доступен на: cromakit.es
2. Ороско-Рико Мигель. Окраска киньюна и две кокцидии при ВИЧ. Медицинский журнал MD. 2011; 3 (2): 137
3. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A (2009). Микробиологический диагноз Бейли и Скотта. 12 изд. Аргентина. Редакция Panamericana SA
4. Конеман Э, Аллен С., Джанда В., Шрекенбергер П., Винн В. (2004). Микробиологическая диагностика. (5-е изд.). Аргентина, редакция Panamericana SA
5. Авторы Википедии. «Пятно кинён». Википедия, свободная энциклопедия. Википедия, Бесплатная энциклопедия, 8 февраля 2018 г., Интернет. 5 января 2019 г.
6. Combol A, Fernández N, Figueredo E, Acuña A, Zanetta E. Внедрение метода окрашивания для одновременной диагностики кокцидий и микроспоридий. Институт гигиены Университета Республики. Монтевидео. Уругвай. Доступно на: hygiene.edu.uy