ОКРАШИВАНИЕ ГЕМАТОКСИЛИН-ЭОЗИНОМ: ХАРАКТЕРИСТИКИ, ПРИМЕНЕНИЕ, ТЕХНИКИ - ХИМИЯ - 2025

Гематоксилин - эозин представляет собой метод окрашивания с использованием комбинации красителей гематоксилином и эозином. Эта пара красителей составляет идеальный дуэт, поскольку гематоксилин действует как основной краситель, а эозин - кислотный краситель.

Обозначение основных или кислотных красителей не относится к pH, полученному в растворе, а скорее говорит о преобладающем соотношении с точки зрения анионных или катионных зарядов, которыми они обладают, или местоположения хромофорной группы.

Ресничный столбчатый эпителий, окрашенный гематоксилин-эозином (HE) Источник: Тодд Штраус и Владимир Осипов

В этом смысле гематоксилин считается основным (катионным) красителем и поэтому имеет сродство к кислотным структурам, таким как ядра клеток. В то время как эозин, будучи кислотным (анионным) красителем, имеет сродство к щелочным или основным структурам, таким как цитоплазма клетки.

По этой причине эта комбинация красителей широко используется для окрашивания тканей, так как позволяет четко различать ядра и цитоплазмы. Ядра окрашиваются в темно-синий или фиолетовый цвет, а цитоплазма - в розовый цвет.

Окрашивание гематоксилин-эозином является одним из наиболее широко используемых методов окрашивания в области гистологии и цитологии из-за простоты использования и низкой стоимости. Он используется для визуализации клеток, толстых нервных волокон и наличия определенных микроорганизмов в тканях, таких как паразиты, грибки и бактерии, среди прочих.

характеристики

Гематоксилин

Гематоксилин - нейтральный краситель. Однако компонент, обеспечивающий окраску (хромофор), находится в катионном или основном центре молекулы. Отсюда его сродство к кислотным структурам. Его химическая формула - C ₁₆ H ₁₄ O _6, а научное название - 7,11b-дигидроинденохромен-3, 4,6a, 9,10 (6 H) -пентол.

В основном он окрашивает ядра клеток, так как они очень богаты нуклеиновыми кислотами. Также он может окрашивать цитоплазматические включения вирусного происхождения.

Чтобы гематоксилин окрасился, он должен находиться в окисленном состоянии и быть связанным с металлом. Последний будет служить для фиксации к ткани, то есть действовать как протрава.

Когда гематоксилин окисляется, он называется гематеином. Окисление достигается воздействием кислорода (старение) реагента или веществами, которые способствуют его окислению (химическое окисление).

Эозин

Эозин - краситель, окрашивающий в красный или розовый цвет. Он нерастворим в воде, хотя есть водорастворимая версия. Обычно эозин получают растворением в спирте (95 ° этанол).

Он окрашивает цитоплазму, мышечные волокна, цитоплазматические органеллы и коллаген, но не окрашивает ядра клеток. Это потому, что он отрицательно заряжен, следовательно, он имеет сродство к положительно заряженным структурам.

Есть два типа эозина «Y» и «B». Эозин «Y» известен как желтый эозин. Его научное название - тетрабромфторесцеин, а его химическая формула - C ₂₀ H ₈ Br ₄ O ₅ .

С другой стороны, эозин «B» иногда называют голубоватым эритрозином B. Его научное название - дибромодинитрофлуоресцеин, формула - C ₂₀ H ₈ Br ₂ N ₂ O ₉ . Оба очень похожи, и разница между использованием одного или другого практически не заметна. Однако наиболее популярным является эозин «Y».

Эозин обладает свойством различать живую и мертвую клетку, поскольку он способен пересекать мембрану и окрашивать свою цитоплазму, только когда клетки мертвы, оставляя цитоплазму клетки бесцветной, если она остается живой.

Приложения

Окрашивание нервных волокон

Толстые нервные волокна можно окрашивать и идентифицировать гематоксилин-эозином. Однако это бесполезно для окрашивания тонких нервных волокон, так как окрашивание серебром требуется для визуализации последних.

Пятна на гистологических срезах кожи

При окрашивании рогового слоя кожи действует краситель эозин, так как на этом уровне у клеток нет ядра.

В зернистом слое кожи гематоксилин сильно окрашивает гранулы кератогиалина внутри гранулярных клеток. Напротив, остистый слой кожи слабо окрашен гематоксилином, тогда как базальный или зародышевый слой окрашен довольно сильно.

Эозин окрашивает цитоплазму всех клеток, и интенсивность окраски может варьироваться от слоя к слою.

Окрашивание образцов стула гематоксилином-эозином

Gómez et al., В 2005 году продемонстрировали, что окрашивание гематоксилин-эозином было более эффективным для выявления случаев амебиаза, вызванного Entamoeba histolytica и Entamoeba dispar, чем свежий метод визуализации (физиологический раствор и люголь) у пациентов с острым диарейным заболеванием.

Также было показано, что он очень чувствителен при обнаружении эритрофагоцитоза (амеб, охвативших эритроциты).

Окрашивание гистологических срезов для диагностики инфекции

Walwyn et al., В 2004 году предложили использовать гистологические окрашивания для обнаружения вызывающих инфекцию микроорганизмов.

Используя окрашивание гематоксилин-эозином, они смогли визуализировать инфекции, вызванные Clostridium, Actinomyces, spirillae или Candida. Они также смогли наблюдать присутствие паразита Sarcoptes escabiei в срезах кожи и вирусные включения цитомегаловируса и герпеса в срезах различных тканей.

методы

Для гистологических образцов

Окрашивание гистологического среза проходит в несколько этапов. Первым делом нужно получить гистологический срез. Его необходимо обработать воском, чтобы позже получить срезы (ультратонкие) с помощью микротома. Методика состоит из следующих этапов:

1-Устранение лишнего парафина : для этого можно использовать ксилол или Heme-D, погрузить на 3-5 минут.

2-Регидратация образца: это достигается погружением образца в различные концентрации спиртов (этанол) в порядке убывания (100 °, 90 °, 70 °). Во всех случаях по 7 минут.

3-Устранение лишнего спирта: для этого его погружают в воду на 7 минут.

4-Окрашивание гематоксилином: образец погружают на 6-10 минут в лоток, содержащий гематоксилин. Время воздействия зависит от размера и толщины образца.

5-Устранение избытка гематоксилина: его промывают водой в течение 5 минут, а затем проводят быстрое прохождение (10-20 секунд) через кислый спирт. Позже снова промывают водой в течение 5 минут. Затем его погружают в этанол при 96 ° на 1 минуту.

6-Окрашивание эозином: для этого образец погружают на 5 минут в лоток с эозином.

7-Обезвоживание образца : для этого он проходит через поддоны со спиртом (этанолом), но на этот раз в порядке возрастания. (70 °, 90 °, 100 °). (На 5 секунд, 5 секунд, 1 минуту соответственно).

8-Осветление образца : для этого его подвергают воздействию ксилола в течение 5-10 минут и сушат для окончательной герметизации канадским бальзамом или другим подобным материалом.

Для образцов кала, ищущих

На предметное стекло со стулом пациента делают мазок и фиксируют 80% спиртом в течение 5 минут. Лист погружают в гематоксилин на 5 минут и сразу промывают водой.

Затем его быстро погружают в кислый спирт, а затем в аммиачную воду. Его промывают водой. Окрашивается в течение 5 минут в эозине. Образец обезвоживают, как описано в предшествующем уровне техники, и, наконец, промывают ксилолом.

Приготовление реагентов

- гематоксилин

В одном литре дистиллированной воды растворите 50 г сульфата калия или аммония алюминия. Когда он полностью растворится, добавьте 1 грамм кристаллизованного гематоксилина. После полного растворения добавляют 1 г лимонной кислоты вместе с 50 г хлоралгидрата и 0,2 г йодата натрия.

Смесь кипятят 5 минут, затем оставляют охлаждаться и фильтруют, чтобы удалить все оставшиеся твердые частицы. Приготовленный таким образом реагент можно использовать немедленно.

- Эозин

Его можно приготовить на спиртовой основе или на водной основе.

Алкогольный эозин

В 100 мл этанола при 95 ° растворяют 0,5 г эозина «Y». Затем добавьте несколько капель ледяной уксусной кислоты.

2% водный эозин

В 1250 мл дистиллированной воды растворите 25 г водорастворимого эозина «Y». Затем добавьте несколько капель ледяной уксусной кислоты.

Кислый спирт

Отмерьте 0,5 мл концентрированной соляной кислоты и доведите до 100 мл абсолютным спиртом.

Аммиачная вода

Отмерьте 0,5 мл концентрированного аммиака и доведите до 100 мл дистиллированной водой.

Ссылки

1. Наваррете, Г. Гистология кожи. Rev Fac Med UNAM 2003; 46 (4): 130-133. Доступно на: medigraphic.com
2. Гомес-Ривера Н., Молина А., Гарсия М., Кастильо Дж., Кастильо Дж., Гарсия Р., Фонсека I, Валенсуэла О.
3. Идентификация Entamoeba histolytica / E. Dispar методом свежей амебы по сравнению с окрашиванием гематоксилином-эозином при острой диарее. Rev Mex Pediatr 2005; 72 (3); 109-112. Доступно на: medigraphic.com
4. Валвин В., Иглесиас М., Альмаралес М., Акоста Н., Мера А., Кабрехас М. Полезность гистологических методов для диагностики инфекции в анатомических образцах. Rev Cub Med Mil, 2004 год; 33 (2). Доступно на: scielo.sld
5. Реагенты PanReac AppliChem ITW. Окраска гематоксилин-эозином. 2017, Испания. Доступно на: itwreagents.com
6. Эозин. Википедия, свободная энциклопедия. 7 ноя 2018, 08:18 UTC. 4 августа 2019, 22:13 en.wikipedia.org
7. «Гематоксилин». Википедия, свободная энциклопедия. 3 мая 2019, 11:23 UTC. 4 августа 2019, 22:48 wikipedia.org