ОКРАШИВАНИЕ КАПСУЛ: ОБОСНОВАНИЕ И МЕТОДЫ - БИОЛОГИЯ - 2025

Окрашивания капсула представляет собой дифференциальный метод окрашивания , который обладает свойством структуры полисахарида напряжений окружающего определенных бактерий и дрожжи называемых капсулами. Он используется в клинических лабораториях для диагностики определенных патологий, вызванных капсулированными микроорганизмами.

Он также используется в учебных лабораториях для демонстрации этой морфологической структуры студентам медицинских специальностей, таких как медицина, биоанализ, сестринское дело или цитотехнология, среди прочего.

Мазок на Klebsiella pneumoniae окрашен капсулой. Метод туши с сафранином. Источник: А.А.В

Есть несколько простых методов, чтобы продемонстрировать присутствие капсулы у микроорганизмов, которые ею обладают, это: отрицательная окраска, окраска Энтони и вариант, сочетающий в себе два предыдущих.

Отрицательное окрашивание в основном используется в образцах спинномозговой жидкости при подозрении на наличие дрожжевого грибка Cryptococcus neoformans. Эти дрожжи - частая причина менингита.

Этот метод использует нигрозин или тушь и основан на создании контраста между фоном препарата и непроницаемой капсулой микроорганизма. Фон становится темным, а капсула обесцвечивается. Таким образом раскрывается эта структура.

Что касается техники Энтони, можно сказать, что она в основном используется в учебных лабораториях для демонстрации структуры полисахаридов у бактерий, таких как Klebsiella pneumoniae, Streptococcus pneumoniae и Neisseria meningitidis.

Этот метод используется в диагностических целях очень редко, поскольку существуют другие стандартные тесты, позволяющие идентифицировать эти микроорганизмы.

основа

Капсула представляет собой прочную структуру полисахаридной природы. Это защищает микроорганизмы от фагоцитоза, и поэтому в структуру трудно проникнуть.

Вот почему окрашивание капсул основано на контрасте. Красители окрашивают дно препарата, при этом капсула остается бесцветной.

Таким образом, с помощью этих методов капсула легко узнаваема. Если у микроорганизма нет капсулы, он не будет различим при таком типе окраски, потому что все будет окрашено в один цвет.

Все методы, используемые для окрашивания капсулы, имеют одно и то же обоснование, несмотря на использование разных красителей и процедур.

Методы по номинальной

-Энтони пятно

Пятно Энтони использует кристально-фиолетовый как пятно. Это окрасит тело бактерии и фон в фиолетовый цвет.

С другой стороны, используется 20% сульфат меди. Он служит моющим раствором, то есть удаляет излишки фиолетовых кристаллов из препарата, делая капсулы прозрачными, но без потери цвета бактериального тела или фона.

материалы

- Радужное молоко.

- Горка.

- 1% фиолетовый кристалл.

- 20% медный купорос.

- Оптический микроскоп.

- Иммерсионное масло.

Обработать

Эта техника состоит из:

1. Выращивайте микроорганизм в радужном молоке в течение 36 часов.
2. Поместите каплю культуры в конец предметного стекла и рядом с ним поместите каплю фиолетового стекла, перемешайте и распределите концом другого предметного стекла.
3. Высушите на воздухе и не нагревайте.
4. Промыть 20% раствором медного купороса, дать высохнуть на воздухе.
5. Наблюдайте под микроскопом с иммерсионным объективом. Ищите ближе к концам разворота.

Важно не использовать тепло ни для фиксации, ни для сушки, так как это повредит капсулу. Также не смывайте водой.

Интерпретация

Радужное молоко - отличная питательная среда, поскольку оно обеспечивает микроорганизмам необходимые питательные вещества для развития заметной капсулы.

С другой стороны, переливающееся молоко образует толстое и компактное дно, которое будет окрашено в фиолетовый цвет вместе с телом бактерии, но капсула, окружающая микроорганизм, останется бесцветной. Поэтому вокруг тела бактерии наблюдается четкий ореол.

Графическое изображение микроскопического исследования мазка Klebsiella pneumoniae, окрашенного красителем Энтони. Источник: Сделано автором MSc. Мариельса Гил.

преимущество

Это простая техника. Не требует фиксации.

Также следует отметить, что можно использовать и другие питательные среды, но предпочтительна молочная среда, поскольку она дает более заметные капсулы.

Недостатки

Это немного более трудоемкая техника, чем негативное окрашивание, и для ее визуализации необходимо дождаться полного высыхания препарата.

-Отрицательное окрашивание

материалы

- Слайды слайдов.

- Питательная среда с микроорганизмом.

- Китайская тушь или нигрозин.

- Оптический микроскоп.

- Физиологический солевой раствор.

Обработать

Нанесите каплю физиологического раствора на покровное стекло и растворите небольшую часть микробной культуры. Важно, чтобы препарат не был слишком густым. Затем поместите каплю китайской туши или нигрозина и перемешайте.

Затем на препарат накладывают покровное стекло, не переливая жидкости. Его наблюдают под микроскопом, сначала сфокусировавшись на объективе с 10-кратным увеличением, а затем переместившись на 40-кратный.

Этот метод также можно использовать напрямую с образцами CSF. То есть вместо капли микробной культуры помещается капля CSF.

преимущество

Это простой в исполнении и в то же время недорогой метод. Не требует фиксации или сушки препарата.

Недостатки

Недостатком является то, что его необходимо наблюдать под микроскопом до высыхания препарата, так как в этом случае микроорганизмы будут сокращаться, что затруднит визуализацию.

С другой стороны, ложные срабатывания могут произойти, если аналитик неопытен, поскольку лейкоциты часто путают с дрожжами.

Наблюдение за дрожжевыми капсулами с помощью китайских чернил или нигрозина следует рассматривать как предполагаемый диагноз Cryptococcus neoformans, пока он не будет продемонстрирован с помощью посева.

Это потому, что есть другие дрожжи, которые могут быть причиной менингита, а не только Cryptococcus neoformans, такие как дрожжи рода Candida и Rhodotorula, а также другие виды Cryptococcus.

Интерпретация

Если есть капсулированные микроорганизмы, будет наблюдаться темный фон с прозрачными телами, плавающими в жидкости, что подчеркивает присутствие капсулы.

Капсула Cryptococcus neoformans, окрашенная китайской тушью. Источник: Фото: контент-провайдеры: CDC / Dr. Линор Хейли

-Техника индийской туши

Эту технику также можно применять с нигрозином. Это комбинация ранее описанных техник. В этой технике используются кристально-фиолетовый и тушь или нигрозин.

Тело бактерии становится пурпурным из кристаллического фиолетового, потому что оно отрицательно заряжено, тогда как нигрозин окрашивает нижнюю часть мазка. Если у бактерии есть капсула, она будет выглядеть как прозрачный ореол вокруг микроорганизма.

Кристаллический фиолетовый можно заменить любым из этих цветов: сафранином, основным фуксином или метиленовым синим.

материалы

- Фиолетовое стекло.

- Нигрозин или тушь.

- Слайды слайдов.

- Микроскоп.

Обработать

- Выращивайте микроорганизмы в питательной среде.

- Поместите каплю культуры в конец слайда и рядом с ней поместите каплю кристально-индийских чернил или нигрозина, перемешайте и распределите с концом другого слайда.

- Высушите на воздухе и не нагревайте.

- Залейте фиолетовым кристаллическим раствором на 1 минуту, промойте дистиллированной водой, но очень осторожно (мягкая струя), дайте высохнуть на открытом воздухе.

- Наблюдайте под микроскопом с иммерсионным объективом. Ищите ближе к концам разворота.

Интерпретация

Будет видно фиолетовое тело бактерии и темный фон. Капсула, если она есть, вокруг бактерий будет бесцветной.

Ссылки

1. Ковадонга А., Силонис М., Серрано С. Основные методы микробиологии. Наблюдение за бактериями. Reduca (Биология). Серия микробиологии. 2010; 3 (5): 15-38. D
2. Лопес-Хакоме Л., Эрнандес-Дуран М., Колин-Кастро С., Ортега-Пенья С., Серон-Гонсалес Г., Франко-Сендехас Р. Основные красители в микробиологической лаборатории. Mediagraphic.org. 2014; 3 (1): 10-18. Доступно на: medigraphic.com
3. Гил М. Негативное окрашивание: обоснование, методика, преимущества и недостатки. Lifeder.com.
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Микробиологическая диагностика Бейли и Скотта. 12 изд. Аргентина. Редакция Panamericana SA
5. Танкешвар А. Капсульное окрашивание: принцип, процедура и результаты. 2019. Руководство по медицинской микробиологии. Доступно на: microbeonline.com