- основа
- Методы по номинальной
- -Энтони пятно
- материалы
- Обработать
- Интерпретация
- преимущество
- Недостатки
- -Отрицательное окрашивание
- материалы
- Обработать
- преимущество
- Недостатки
- Интерпретация
- -Техника индийской туши
- материалы
- Обработать
- Интерпретация
- Ссылки
Окрашивания капсула представляет собой дифференциальный метод окрашивания , который обладает свойством структуры полисахарида напряжений окружающего определенных бактерий и дрожжи называемых капсулами. Он используется в клинических лабораториях для диагностики определенных патологий, вызванных капсулированными микроорганизмами.
Он также используется в учебных лабораториях для демонстрации этой морфологической структуры студентам медицинских специальностей, таких как медицина, биоанализ, сестринское дело или цитотехнология, среди прочего.

Мазок на Klebsiella pneumoniae окрашен капсулой. Метод туши с сафранином. Источник: А.А.В
Есть несколько простых методов, чтобы продемонстрировать присутствие капсулы у микроорганизмов, которые ею обладают, это: отрицательная окраска, окраска Энтони и вариант, сочетающий в себе два предыдущих.
Отрицательное окрашивание в основном используется в образцах спинномозговой жидкости при подозрении на наличие дрожжевого грибка Cryptococcus neoformans. Эти дрожжи - частая причина менингита.
Этот метод использует нигрозин или тушь и основан на создании контраста между фоном препарата и непроницаемой капсулой микроорганизма. Фон становится темным, а капсула обесцвечивается. Таким образом раскрывается эта структура.
Что касается техники Энтони, можно сказать, что она в основном используется в учебных лабораториях для демонстрации структуры полисахаридов у бактерий, таких как Klebsiella pneumoniae, Streptococcus pneumoniae и Neisseria meningitidis.
Этот метод используется в диагностических целях очень редко, поскольку существуют другие стандартные тесты, позволяющие идентифицировать эти микроорганизмы.
основа
Капсула представляет собой прочную структуру полисахаридной природы. Это защищает микроорганизмы от фагоцитоза, и поэтому в структуру трудно проникнуть.
Вот почему окрашивание капсул основано на контрасте. Красители окрашивают дно препарата, при этом капсула остается бесцветной.
Таким образом, с помощью этих методов капсула легко узнаваема. Если у микроорганизма нет капсулы, он не будет различим при таком типе окраски, потому что все будет окрашено в один цвет.
Все методы, используемые для окрашивания капсулы, имеют одно и то же обоснование, несмотря на использование разных красителей и процедур.
Методы по номинальной
-Энтони пятно
Пятно Энтони использует кристально-фиолетовый как пятно. Это окрасит тело бактерии и фон в фиолетовый цвет.
С другой стороны, используется 20% сульфат меди. Он служит моющим раствором, то есть удаляет излишки фиолетовых кристаллов из препарата, делая капсулы прозрачными, но без потери цвета бактериального тела или фона.
материалы
- Радужное молоко.
- Горка.
- 1% фиолетовый кристалл.
- 20% медный купорос.
- Оптический микроскоп.
- Иммерсионное масло.
Обработать
Эта техника состоит из:
- Выращивайте микроорганизм в радужном молоке в течение 36 часов.
- Поместите каплю культуры в конец предметного стекла и рядом с ним поместите каплю фиолетового стекла, перемешайте и распределите концом другого предметного стекла.
- Высушите на воздухе и не нагревайте.
- Промыть 20% раствором медного купороса, дать высохнуть на воздухе.
- Наблюдайте под микроскопом с иммерсионным объективом. Ищите ближе к концам разворота.
Важно не использовать тепло ни для фиксации, ни для сушки, так как это повредит капсулу. Также не смывайте водой.
Интерпретация
Радужное молоко - отличная питательная среда, поскольку оно обеспечивает микроорганизмам необходимые питательные вещества для развития заметной капсулы.
С другой стороны, переливающееся молоко образует толстое и компактное дно, которое будет окрашено в фиолетовый цвет вместе с телом бактерии, но капсула, окружающая микроорганизм, останется бесцветной. Поэтому вокруг тела бактерии наблюдается четкий ореол.

Графическое изображение микроскопического исследования мазка Klebsiella pneumoniae, окрашенного красителем Энтони. Источник: Сделано автором MSc. Мариельса Гил.
преимущество
Это простая техника. Не требует фиксации.
Также следует отметить, что можно использовать и другие питательные среды, но предпочтительна молочная среда, поскольку она дает более заметные капсулы.
Недостатки
Это немного более трудоемкая техника, чем негативное окрашивание, и для ее визуализации необходимо дождаться полного высыхания препарата.
-Отрицательное окрашивание
материалы
- Слайды слайдов.
- Питательная среда с микроорганизмом.
- Китайская тушь или нигрозин.
- Оптический микроскоп.
- Физиологический солевой раствор.
Обработать
Нанесите каплю физиологического раствора на покровное стекло и растворите небольшую часть микробной культуры. Важно, чтобы препарат не был слишком густым. Затем поместите каплю китайской туши или нигрозина и перемешайте.
Затем на препарат накладывают покровное стекло, не переливая жидкости. Его наблюдают под микроскопом, сначала сфокусировавшись на объективе с 10-кратным увеличением, а затем переместившись на 40-кратный.
Этот метод также можно использовать напрямую с образцами CSF. То есть вместо капли микробной культуры помещается капля CSF.
преимущество
Это простой в исполнении и в то же время недорогой метод. Не требует фиксации или сушки препарата.
Недостатки
Недостатком является то, что его необходимо наблюдать под микроскопом до высыхания препарата, так как в этом случае микроорганизмы будут сокращаться, что затруднит визуализацию.
С другой стороны, ложные срабатывания могут произойти, если аналитик неопытен, поскольку лейкоциты часто путают с дрожжами.
Наблюдение за дрожжевыми капсулами с помощью китайских чернил или нигрозина следует рассматривать как предполагаемый диагноз Cryptococcus neoformans, пока он не будет продемонстрирован с помощью посева.
Это потому, что есть другие дрожжи, которые могут быть причиной менингита, а не только Cryptococcus neoformans, такие как дрожжи рода Candida и Rhodotorula, а также другие виды Cryptococcus.
Интерпретация
Если есть капсулированные микроорганизмы, будет наблюдаться темный фон с прозрачными телами, плавающими в жидкости, что подчеркивает присутствие капсулы.

Капсула Cryptococcus neoformans, окрашенная китайской тушью. Источник: Фото: контент-провайдеры: CDC / Dr. Линор Хейли
-Техника индийской туши
Эту технику также можно применять с нигрозином. Это комбинация ранее описанных техник. В этой технике используются кристально-фиолетовый и тушь или нигрозин.
Тело бактерии становится пурпурным из кристаллического фиолетового, потому что оно отрицательно заряжено, тогда как нигрозин окрашивает нижнюю часть мазка. Если у бактерии есть капсула, она будет выглядеть как прозрачный ореол вокруг микроорганизма.
Кристаллический фиолетовый можно заменить любым из этих цветов: сафранином, основным фуксином или метиленовым синим.
материалы
- Фиолетовое стекло.
- Нигрозин или тушь.
- Слайды слайдов.
- Микроскоп.
Обработать
- Выращивайте микроорганизмы в питательной среде.
- Поместите каплю культуры в конец слайда и рядом с ней поместите каплю кристально-индийских чернил или нигрозина, перемешайте и распределите с концом другого слайда.
- Высушите на воздухе и не нагревайте.
- Залейте фиолетовым кристаллическим раствором на 1 минуту, промойте дистиллированной водой, но очень осторожно (мягкая струя), дайте высохнуть на открытом воздухе.
- Наблюдайте под микроскопом с иммерсионным объективом. Ищите ближе к концам разворота.
Интерпретация
Будет видно фиолетовое тело бактерии и темный фон. Капсула, если она есть, вокруг бактерий будет бесцветной.
Ссылки
- Ковадонга А., Силонис М., Серрано С. Основные методы микробиологии. Наблюдение за бактериями. Reduca (Биология). Серия микробиологии. 2010; 3 (5): 15-38. D
- Лопес-Хакоме Л., Эрнандес-Дуран М., Колин-Кастро С., Ортега-Пенья С., Серон-Гонсалес Г., Франко-Сендехас Р. Основные красители в микробиологической лаборатории. Mediagraphic.org. 2014; 3 (1): 10-18. Доступно на: medigraphic.com
- Гил М. Негативное окрашивание: обоснование, методика, преимущества и недостатки. Lifeder.com.
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Микробиологическая диагностика Бейли и Скотта. 12 изд. Аргентина. Редакция Panamericana SA
- Танкешвар А. Капсульное окрашивание: принцип, процедура и результаты. 2019. Руководство по медицинской микробиологии. Доступно на: microbeonline.com
