САФРАНИН: ХАРАКТЕРИСТИКИ, ПРИМЕНЕНИЕ, МЕТОДЫ, ТОКСИЧНОСТЬ - ХИМИЯ - 2025

Сафранина является meriquinoide красителем, названный по своей химической структуре , имеющей два бензольных кольца и из 2 -х колец хиноидных, причем последние те , которые обеспечивают красный цвет.

Его также называют диметилсафранином или основным красным 2 в его короткой форме, поскольку его научное название - 3,7-диамино-2,8-диметил-5-фенилфеназиниумхлордиметилсафранин, а химическая формула - C ₂₀ H ₁₉ N _4. Cl.

Химическая структура сафранина с указанием бензоидных и хиноидных колец / Водный раствор сафранина. Источник: NEUROtiker под редакцией MSc. Мариельса Гил / LHcheM

Существует вариант под названием триметил-сафранин, но между этими двумя веществами нет значительной разницы.

Сафранин - монохроматический краситель и, в зависимости от характеристик химической формулы, является положительно заряженным веществом. Следовательно, он имеет сродство к отрицательно заряженным структурам. Эти структуры будут окрашены в красный цвет.

Это свойство дает возможность применять его во многих гистологических методах для окрашивания различных клеточных структур как эукариотических, так и прокариотических организмов.

Сафранин используется в качестве контрастного красителя в важных и хорошо известных методах повседневного использования в бактериологии. Эти методы включают, среди прочего, окрашивание по Граму-Гекеру, окрашивание по Шефферу-Фултону для выявления спор или окрашивание бактериальных капсул.

характеристики

Цвет шафрана (пряность, полученная из рылец цветка Crocus sativus) послужил вдохновением для названия этого красителя. От термина шафран происходит название сафранин. Это связано с большим сходством цвета шафрана и окраски, которую дает этот краситель.

Сафранин доступен в виде кристаллов или порошка, причем оба вида растворимы в воде. Краситель сафранин не имеет запаха. Пятна структуры красные. Структуры, привлекающие краситель сафранин, называются сафранофилами.

Структурно сафранин сложен, он имеет два бензоидных кольца на концах и в центре расположены два хиноидных кольца, в которых находится катион N ⁺ . Центр структуры - это система, отвечающая за обеспечение цвета. По этой характеристике краситель относится к категории II.

использование

Сафранин используется для окрашивания различных структур. Особенно выделяются клетки Кульчицкого, присутствующие в желудочно-кишечном тракте, также называемые энтерохромаффинными клетками.

Он способен окрашивать микроорганизмы, принадлежащие к семейству Rickettsiaceae. Точно так же он используется в различных методах, таких как метод Костера, модифицированный, используемый для окрашивания бактерий рода Brucella.

С другой стороны, сафранин используется в технике окрашивания спор Schaeffer Fulton и при окрашивании по Граму-Хакеру. В обеих техниках сафранин работает как контрастный краситель.

В первом случае споры приобретают цвет малахитового зеленого цвета, а остальные структуры окрашиваются в красный цвет из-за сафранина. На втором этапе грамотрицательные бактерии теряют цвет фиолетового кристалла на этапе обесцвечивания, поэтому сафранин окрашивает грамотрицательные бактерии в красный цвет.

Кроме того, сафранин используется в бактериологии для приготовления агаровых сред с бруцеллами с разведением сафранина 1: 5000. Эта среда служит для дифференциации видов Brucella suis от остальных видов. На этой среде растут Brucella melitensis и Brucella abortus, но рост B. suis подавляется.

В агропромышленной сфере сафранин использовался в концентрации 2,25% и в разведении 1:10 для окрашивания образцов стеблей сахарного тростника.

Это растение обычно поражается бактериями Leifsonia xyli subsp. xyli, который повреждает ксилему растения. Окрашенные стебли оценивают для определения функции сосудов ксилемы.

Методы в области бактериологии

Краситель Кастаньеда для окрашивания r

Мазок крови или ткани помещают в буферный раствор (фосфатный буфер pH 7,6). Дайте высохнуть самопроизвольно, затем накройте метиленовым синим на 3 минуты и протрите сафранином. Риккетсии окрашены в синий цвет, контрастирующий с красным фоном.

Краска Костера модифицирована для

Делается мазок и обжигается в зажигалке для фиксации. Затем его покрывают смесью 2 частей насыщенного водного сафранина с 3 частями раствора КОН с концентрацией 1 моль / л в течение 1 минуты. Промывают дистиллированной водой и контрастно окрашивают 1% -ным карболовым метиленовым синим.

Если образец содержит бактерии рода Brucella, они будут оранжевыми на синем фоне.

Окрашивание бактериальной капсулы

Готовится смесь бактериальной суспензии с индийскими чернилами и добавляется сафранин. Под микроскопом вокруг каждой бактериальной капсулы на черном фоне появляется красноватый ореол.

Окрашивание спор

Распространяется бактериальная суспензия. Затем закрепляют на тепле. Он покрыт 5% малахитовой зеленью, часто пламенеет до испарения. Процесс повторяется 6-10 минут. Наконец, его промывают водой и окрашивают 0,5% сафранином в течение 30 секунд. Бациллы окрашиваются в красный цвет, а споры - в зеленый.

Окраска по Граму-Гекеру

Делается мазок с бактериальной взвесью и фиксируется в тепле. Покройте предметное стекло кристально-фиолетовым на 1 минуту. Затем в качестве протравы вводят люголь на 1 минуту. Затем его отбеливают ацетоновым спиртом и, наконец, окрашивают сафранином в течение 30 секунд.

Грамположительные бактерии окрашивают синевато-фиолетовый цвет, а грамотрицательные - красный.

Некоторые лаборатории перестали использовать технику Грама-Хакера, чтобы принять модифицированную технику Грама-Копелеффа. В последнем сафранин заменен основным фуксином. Это связано с тем, что сафранин слабо окрашивает виды родов Legionella, Campylobacter и Brucella.

Методы в области гистологии

Окрашивание клеток Кульчицкого (энтерохромафины)

Срезы тканей желудочно-кишечного тракта окрашивают хлоридом серебра. Затем его обесцвечивают тиосульфатом натрия и, наконец, окрашивают сафранином.

Клетки Кульчицкого отличаются наличием гранул черно-коричневого цвета.

Пятно от остеоартрита

Поскольку сафранин имеет положительный заряд, он очень хорошо связывается с карбоксильными и сульфатными группами гликозаминогликанов. Они входят в состав протеогликанов, составляющих суставной хрящ. В этом смысле при окрашивании сафранином О можно определить, есть ли потеря хряща.

Утрата хрящевой ткани может быть измерена с помощью шкалы Манкина или также называемой шкалой остеоартрита.

Методика объясняется ниже: гистологический срез погружается в лоток с раствором гематоксилина железа Вейгерта, затем пропускается через кислотный спирт и промывается водой.

Продолжайте процесс окрашивания, погружая предметное стекло в быстро-зеленый цвет, его промывают уксусной кислотой, а теперь погружают в сафранин О. Для завершения процесса его обезвоживают спиртами с различной концентрацией в порядке возрастания. На последнем этапе для осветления образца требуется ксилол или ксилол.

Слайды обработаны канадским бальзамом или аналогичным средством для наблюдения под микроскопом.

При использовании этого метода ядра окрашиваются в черный цвет, кости - в зеленый, а хрящи, в которых обнаружены протеогликаны, - в красный цвет.

Краситель для идентификации макроводорослей

Перес и др. В 2003 году предложили простой и недорогой метод окрашивания макроводорослей. Образцы готовят на гистологических срезах парафина. Срезы закрепляют 1% глицерином, позволяя им полностью высохнуть. Затем его помещают в ксилол, чтобы удалить парафин.

Секцию регидратируют, пропуская ее через серию поддонов, содержащих этанол разной степени концентрации (в порядке убывания), в течение 2 минут каждая.

Затем его окрашивают в течение 5 минут смесью 1% сафранина с 1% толуидиновым синим в соотношении 3: 1, оба препарата приготовлены с использованием 50% этанола. В смесь добавляют три капли пикриновой кислоты, которая действует как протрава.

Затем его обезвоживают, снова пропуская через ванночки со спиртом, но на этот раз восходящим образом. Наконец, его промывают ксилолом и готовят образец с канадским бальзамом для наблюдения.

Токсичность

К счастью, сафранин - краситель, который не представляет опасности для тех, кто с ним обращается. Это безвредный краситель, он не канцерогенный и негорючий.

Прямой контакт с кожей или слизистыми оболочками может вызвать легкое покраснение в этой области без серьезных осложнений. Для этого рекомендуется промыть пораженное место большим количеством воды.

Ссылки

1. Гарсиа Х. Колоранте сафранина О. Технический специалист по здравоохранению, 2012 г .; 1 (2): 83-85. Доступно на: medigraphic.com
2. Окраска по Гилю М. Граму: основа, материалы, техника и применение. 2019. Доступно на: lifeder.com
3. Гил М. Окрашивание спор: обоснование, методы и использование. 2019. Доступно на: lifeder.com
4. Сафранина ». Википедия, свободная энциклопедия. 7 марта 2017 г., 10:39 UTC. 3 августа 2019, 20:49 en.wikipedia.org
5. Перес-Кортес С., Вера Б., Санчес С. Техника окрашивания, полезная для анатомической интерпретации Gracilariopsis tenuifrons и Gracilaria chilensis (Rhodophyta). Act Bot. Venez. 2003; 26 (2): 237-244. Доступно на: scielo.org.
6. Церковь Алейка, Перальта Эстер Лилия, Альварес Эльба, Милиан Дж., Матос Мадью. Связь функциональности сосудов ксилемы и присутствия Leifsonia xyli subsp. xyli. Преподобный Veg Protection. 2007; 22 (1): 65-65. Доступно на: scielo.sld