КСАНТОПРОТЕИНОВАЯ РЕАКЦИЯ: ОБОСНОВАНИЕ, МЕТОДИКА, ПРИМЕНЕНИЕ - ХИМИЯ - 2026

Реакция xanthoprotein представляет собой химическую процедуру , используемая для определения наличия или отсутствий ароматических аминокислот, таких как тирозин и триптофан, которые могут быть в свободной форме или представляют собой растворимые белки, пептиды или полипептиды.

Он также использовался для обнаружения в крови токсичных веществ, содержащих в своей структуре бензольную группу. Этот тест также известен как реакция Бехера на ксантопротеин.

Положительная реакция на ксантопротеин Источник: Взято из видео: https://youtu.be/GzGMbw5w4Wo

В реакции с ксантопротеином используются концентрированная азотная кислота, тепло и нейтрализующая щелочь. Если после нейтрализации реакции цвет раствора изменится с желтого на оранжевый, тест считается положительным. Наблюдаемое окрашивание связано с образованием азотистых соединений, полученных в результате нитрификации бензольных групп.

Если необходимо определить количество общего белка, необходимо использовать другие методы определения белка, такие как Biuret.

Ксантопротеиновая реакция используется в основном при анализе веществ, химический состав которых неизвестен. Эта реакция обычно является частью набора тестов, которые помогают определить химический состав конкретного вещества или экстракта. Именно поэтому он широко используется исследователями.

С другой стороны, ксантопротеиновая реакция Бехера используется для обнаружения фенольных и индольных веществ в крови, что позволяет предсказать появление нефропатии до того, как будут увеличены другие последующие параметры.

основа

Реакция в основном определяет присутствие бензольной группы как в аминокислотах, так и в белках и пептидах. Азотная кислота действует на бензольное кольцо аминокислот, которые ей принадлежат, образуя фенольные нитросоединения.

Для проведения реакции требуется тепло, обычно образуется осадок, который замутняет среду, делая ее молочной. Осадок может быть белым или желтым. Наконец, требуется подщелачивание, которое подчеркивает цвет. Для этого используется такое основание, как 40% гидроксид натрия или аммиак.

Реакция будет интерпретирована как положительная, если наблюдается сильное желтое окрашивание во время процесса нагревания, или темно-оранжевое, когда реакция подщелачивается. Обнаруживаемые им аминокислоты - это в основном тирозин и триптофан.

Ксантопротеиновая реакция. Источник: http://esteroisomeras.blogspot.com/2013/06/caracterizacion-de-proteinas.html

В случае фенилаланина, хотя это ароматическая аминокислота, бензольное ядро ​​этой аминокислоты трудно нитровать в простой реакции, поэтому он будет давать либо отрицательную, либо слабоположительную реакцию.

Как правило, ксантопротеиновый тест можно дополнить тестом Хопкинса-Коула, который используется для специфической идентификации триптофана. Если тест на ксантопротеин положительный, а тест Хопкинса-Коула отрицательный, присутствие триптофана в этом растворе исключается, что указывает на присутствие в основном тирозина. Точно так же его также можно дополнить реакцией Миллона для обнаружения тирозина, среди прочего.

Эту реакцию также можно использовать в образцах крови, плазмы или обессоленной сыворотки для диагностики уремии или почечной недостаточности. В этом случае требуется обнаружение токсичных веществ (фенольных и индоловых), образующихся при гниении кишечника.

Эти вещества имеют бензольную группу и поэтому дают положительную ксантопротеиновую реакцию, даже если реагирующее вещество не является ни аминокислотой, ни белком.

Обработать

- Ксантопротеиновая реакция для обнаружения аминокислот с ароматическими группами

Поместите 1 мл исследуемого образца в чистую сухую пробирку.

-Добавьте 0,5 мл концентрированной азотной кислоты.

-Инкубируйте смесь на водяной бане при 70 ° C в течение 2 минут. Предварительно приготовьте водяную баню указанной температуры.

-При извлечении трубки из водяной бани можно заметить, что раствор стал молочным и приобрел определенный желтовато-белый цвет.

- Раствор охлаждают, капая холодную воду у основания трубки.

-Препарат подщелачивают путем медленного добавления (по каплям) 40% раствора гидроксида натрия до изменения цвета.

-Если тест положительный, на границе раздела жидкостей образуется темно-оранжевое кольцо.

-Если реакция отрицательная, цветообразования не будет.

- Ксантопротеиновая реакция для обнаружения фенольных и индольных веществ в крови

-Распределите 5 см3 20% трихлоруксусной кислоты на 5 см3 венозной крови, плазмы или сыворотки, последняя является наиболее показанной. Хорошо перемешайте и профильтруйте.

-Возьмите 2 мл фильтрата и смешайте его с 0,5 мл азотной кислоты. Затем ее нагревают до кипения, для чего трубку помещают прямо над пламенем зажигалки на 30 секунд. Охлаждают водой и добавляют 1,5 33% хлорида натрия.

Это трактуется следующим образом:

-Отрицательный результат: желтоватый цвет.

-Положительный (+) лимонно-желтый результат.

- (++) золотисто-желтый.

- (+++) от темно-желтого до коричневого

Его также можно интерпретировать с помощью справочной колориметрической шкалы Autenrieth, состоящей из различных концентраций дихромата калия. Его готовят в разведениях 10 из 10 из 0,03874% исходного раствора. Каждая трубка представляет собой процент.

Шкалы интерпретации

Есть две шкалы интерпретации: древняя и современная. Нормальные значения:

Старая таблица: от 75 до 85%

Современный стол: от 15 до 25%

Если цвет пробирки находится в середине двух стандартных пробирок, между двумя измерениями делается среднее значение.

Стандартный раствор дихромата калия готовят следующим образом: отмеряют 7,9 мл 10 н. Дихромата калия и доводят его до 100 мл в мерной колбе. Разведения выполняются, как показано в колориметрической таблице Autenrieth.

Колориметрическая таблица Autenrieth. Источник: Васкес А. Ксантопротеиновая реакция. Испанский клинический журнал. 1949; 35 (5): 326-327. Доступно по адресу: Elsevier

использование

Использование ксантопротеиновой реакции является частью набора биохимических тестов, которые помогают узнать химический состав неизвестного вещества. Этот тест способствует химическому анализу обнаружения белков, содержащих в своей структуре бензольные группы.

Эта реакция широко используется исследователями в различных исследованиях интересующих веществ.

В этом смысле Васкес-Хорхе и его сотрудники использовали эту и другие реакции для исследования содержания белка в жидкостях, извлеченных из мангровых устриц (Crassostrea rhizophorae).

Аналогичным образом, Рохас и соавторы (2009) использовали серию тестов, в том числе ксантопротеиновую реакцию, для анализа гликомакропептидов в преципитатах сыворотки рикотты.

С другой стороны, реакция ксантопротеина Бехера была модифицирована Фольхардом для использования в других целях. В этом случае для обнаружения фенольных и индольных веществ, которые могут повыситься намного раньше (недели или месяцы) до повышения уровня мочевины и остаточного азота в крови.

Эти токсичные отходы образуются в результате гниения пищи в кишечнике.

Эти вещества накапливаются в крови, когда они не выводятся должным образом, поэтому положительный ксантопротеиновый тест может предсказать раннее начало почечной недостаточности или состояние уремии.

В зависимости от интенсивности цвета вы можете определить, насколько он развит. В этом случае тест количественный.

У здоровых людей этот тест дает легкий желтый цвет, соответствующий нормальным уровням триптофана и тирозина, которые могут быть в крови.

В то время как у пациентов с почками реакция на ксантопротеин является сильно положительной из-за присутствия следующих веществ: фенола, индола, паракрезола, ароматических оксикислот и других.

Меры предосторожности

Этот тест должен выполняться обученными профессионалами. Необходимо учитывать все правила биобезопасности, поскольку используемые реагенты являются едкими кислотами и основаниями.

Если случайно на кожу или ногти упадет несколько капель азотной кислоты, они пожелтеют, так как обе структуры содержат белки. Кроме того, на коже и слизистых оболочках он вызывает сильные ожоги.

В случае контакта с кожей следует немедленно промыть пораженный участок водой с мылом в течение примерно 20 минут.

При попадании брызг в глаза промойте большим количеством пресной воды, стараясь держать глаза открытыми.

Ссылки

1. «Ксантопротеиновая реакция» Википедия, Бесплатная энциклопедия. 2 сен 2019, 17:49 UTC. 21 окт 2019, 20:31 wikipedia.org/
2. Васкес-Хорхе Й, Герра-Молина Л., Кинтана-Тамайо Дж., Рамирес-Арсуага Дж., Фернандо-Баллестерос Р., Васкес-Хорхе Ю. Физико-химические характеристики и содержание белка в жидких экстрактах мангровых устриц (Crassostrea rhizophorae). Преподобный Кубана де Кимика, 2014 год; 26 (1): 66-74. Доступно в Redalyc.
3. Рохас Э., Вальбуэна Э., Торрес Г, Гарсия А., Пиньеро М., Галиндо Л. Выделение и выполнение GMP путем осаждения сыворотки трихлоруксусной кислотой. Cient. (Маракайбо) 2009 г .; 19 (3): 295-302. Доступно на: ve.scielo.
4. Васкес А. Ксантопротеиновая реакция. Испанский клинический журнал. 1949; 35 (5): 326-327. Доступно по адресу: Elsevier
5. Gálvez I, Gárate O. Реакции Бехера и Эндрюса в хирургии мочевыводящих путей. Урологическая служба испанской больницы. Аргентинский урологический журнал 395-404