ОРСЕИН: ОСНОВА И ПОДГОТОВКА - ХИМИЯ - 2024

Orceína является естественным фиолетовым цветом, извлеченный из различных лишайников как orchilla или леканора, кустистый лишайник Rocella красильные и Lecanora Парелла главным образом. Rocella tinctoria встречается на африканском и американском континентах, хотя ее можно заменить другими видами, обитающими в Европе.

Этот краситель издревле широко используется в цитогенетических исследованиях. В этом смысле препарат орсеина, содержащий уксусную кислоту, был представлен LaCourt в 1941 году, поэтому первоначально он был назван методом LaCourt.

Химическая структура орсеина и раствора орсеина. Источник: Wikipedia.org/ Oguenther на de.wikipedia (д-р Гюнтер)

Точно так же, из-за своей простоты и низкой стоимости, он использовался для производства лакмуса (краситель, выделяемый из лишайников) и в гистологических исследованиях (окрашивание клеток и тканей).

В нескольких исследованиях это окрашивание использовалось в сочетании с другими химическими веществами, такими как пикрокарминат аммиака и уксусная кислота, для окрашивания эластичных волокон и хромосом соответственно. В настоящее время орсеин продолжает использоваться в цитогенетических исследованиях животных и растений.

Недавно Silva et al. 2017 успешно использовал это окрашивание, чтобы наблюдать различные изменения, которые происходят в эластичных волокнах кожи большого пальца у чилийских пожилых людей. Это исследование показало, как волокна большого пальца меняются с возрастом.

В этом смысле эластичные волокна имели коричневато-черный цвет у лиц старше 80 лет; в то время как у самых молодых (от 60 лет) они выглядят красновато-коричневыми. Цитоплазма и другие клеточные структуры становятся желтовато-зелеными.

Это позволило подтвердить наличие и состояние эластичных волокон с точки зрения их расположения, количества и целостности. С другой стороны, также было указано, что орсеин очень помогает в выявлении аневризм и диагностике артериита, среди других состояний.

основа

Орсеин является частью оксазиновой группы красителей, и окрашивание основано на его сродстве к ДНК. Краситель связывается с отрицательным зарядом этой молекулы, представленной фосфатной группой. Поэтому хромосомы окрашены в фиолетовый цвет.

Однако остальные структуры клетки приобретают другой цвет. В частности, в случае эластичных волокон они окрашены в красновато-коричневый цвет, ядра клеток от синего до темно-фиолетового, а коллаген не окрашивается.

По этой причине орсеин используется для окрашивания хроматина и определения пола у некоторых видов мух. Аналогичным образом могут быть окрашены ядра и некоторые включения печени, продуцируемые антигенами гепатита В.

Растворы орсеина выполняют специфические функции при окрашивании. Орсеин А имеет функцию смягчения клеточных мембран, вызывая их гибель и парализуя процесс их деления. Между тем, орсеин B отвечает за завершение окрашивания за счет его адгезии к хромосомам.

подготовка

Раствор ацето-орсеина 1%

Для приготовления 1% раствора ацетоорсеина 2 грамма орсеина растворяют в 45 мл ледяной уксусной кислоты, предпочтительно горячей, и добавляют 55 мл дистиллированной воды при комнатной температуре.

Затем его постоянно перемешивают для гомогенизации раствора, чтобы позже дать ему остыть. Наконец, его хранят при 4ºC в темных банках. Этот препарат был использован Флорес 2012 для наблюдения за фазами созревания ооцитов коровы.

В этом случае, например, раствор ацетоорсеина наносят на ткань, предварительно зафиксированную в смеси уксусная кислота-этанол, на 24 часа. Процесс окрашивания длится 30 минут, после чего ткань обесцвечивается.

Точно так же его можно использовать для идентификации органелл в многоклеточных тканях. В этом случае мазок слизистой оболочки щеки окрашивается каплей раствора ацетоорсеина, покровное стекло помещается на предметное стекло и сразу же можно наблюдать ядро ​​клетки с его субструктурами.

Лакто-пропонический раствор орсеина 1%

Кроме того, орсеин можно получить с другими химическими веществами, такими как молочная кислота и пропионовая кислота. Для этого один грамм орсеина растворяют в растворе-премиксе при комнатной температуре 23 мл молочной кислоты и 23 мл пропионовой кислоты; доведение объема дистиллированной водой до 100 мл.

С помощью этого раствора лакто-пропионового орсеина можно наблюдать различные фазы мейотического деления растительных клеток. В этом случае предварительно зафиксированный и гидролизованный образец помещают на 15 минут в раствор лакто-пропионового орсеина, а затем ткань распределяют на предметных стеклах микроскопа.

В исследовании полигенных хромосом Дуке в 2016 году он использовал препарат из 2 граммов орсеина, разбавленного уксусной кислотой и 85% молочной кислотой, разбавленный 65% раствором уксусной кислоты. Наконец, он изучил хромосомы слюнных желез Drosophila melanogaster.

Орсеин А и Орсеин Б

Важно отметить, что в зависимости от образца и того, что необходимо оценить, готовится соответствующий раствор орсеина. Так, например, к раствору орсеина А добавляют 1 н. Соляную кислоту для наблюдения за делящимися клетками.

При этом раствор орсеина Б растворяют в 45% уксусной кислоте. Этот метод является сокращенным методом окрашивания и обычно используется в качестве дополнения к окрашиванию хромосомных структур.

Последние мысли

С давних пор лишайники, такие как Lecanora, Parmelia и Umbilicaria, можно найти в странах американского континента, таких как Аргентина, которые являются прекрасными источниками орсеина. Также европейские регионы, такие как Канарские острова, были в то время крупными производителями орхиллы.

Его экспортировали в другие города того же континента, такие как Генуя и такие страны, как Англия, в то время как Голландия монополизировала производство лакмуса из орхиллы. Поэтому позже этот лишайник был сокращен до тех пор, пока он не вымер.

Это привело к замене орхиллы другими растениями с красителями. Однако появление синтетических красителей способствовало прекращению торговли этим лишайником из источника орсеина.

Это стало возможным благодаря Кокку, который в 1812 году описал синтез орсеина, зная тогда, что он синтезируется фенольным соединением под названием орцинол. Однако, несмотря на это, сегодня предпочтение отдается натуральному орсеину.

Это может быть связано с тем, что орцинол представляет собой соединение с очень сильным запахом, и длительное воздействие которого может нести риски для здоровья, например потерю способности обнаруживать запахи. Эти повреждения гипофиза могут переходить от временного к постоянному при большем воздействии.

Ссылки

1. Ортега Л., Гарсия Р., Моралес С. «Применение лакказы, продуцируемой грибами, для разложения микробиологических красителей (орсеин и кристаллический фиолетовый)». Молодые люди в науке 2. 2015; 633-637. Доступно на: jovenesenlaciencia.ugto.mx.
2. Barcat J. Orceína и эластичные волокна. Медицина (Буэнос-Айрес) 2003; 63: 453-456. Доступно на: Medicinabuenosaires.com.
3. Сильва Дж., Рохас М., Арайя С., Вильягра Ф. Гистологические характеристики кожи большого пальца «летающего лица» у чилийских индивидов с выцветанием дактилограммы. J. Morphol. 2017; 35 (3): 1107-1113. Доступно на: scielo.conicyt.
4. Оррилло М., Меридет Б. «Репродуктивная биология и цитогенетика картофеля». Международный центр картофеля (CIP). Техническое руководство. Доступно по адресу: research.cip.cgiar.org/
5. Флорес Ф. «Сбор, культивирование и созревание in vitro ооцитов коров (bos taurus) в высокогорье Боливии». . Национальный университет Альтиплано, Пуно-Перу; 2012. Доступно по адресу: repositorio.unap.edu.pe.
6. Duque C. Политенические хромосомы: взгляд на феномен эндоредупликации. Национальный университет Колумбии, Медельин; 2016. Доступно по адресу: edu.
7. Камарена Ф. Клеточная и молекулярная биология. Практическое пособие. Автономный университет Нижней Калифорнии. 2017. Доступно по адресу: pez.ens.uabc.mx.
8. ФАО / МАГАТЭ. 2018. Руководство по дифференциации диких и выращенных мух Anastrepha ludens (Loew) от нормальной («двуполой») и генетически выделенной линии (Tapachula-7), облученных и необлученных. Гильен Агилар Дж. К., Лопес Муньос Л., Лопес Вильялобос Е. Ф. и Сото Гарсия Д. Н. Продовольственная и сельскохозяйственная организация Объединенных Наций. Рим, Италия, 95 с.
9. Орсеин. (2018, 30 ноября). Википедия, свободная энциклопедия. Дата консультации: 03:38, 31 июля 2019 г. es.wikipedia.org.
10. Мерк Миллипор. (2018, 16 июля). Микроскопия Орсеина для микроскопии Certistain. Доступно на: merckmillipore.com