ТИОГЛИКОЛАТНЫЙ БУЛЬОН: ОБОСНОВАНИЕ, ПРИГОТОВЛЕНИЕ И ПРИМЕНЕНИЕ - БИОЛОГИЯ - 2025

Тиогликолята бульон является среде , обогащенной консистенции жидкости. Он известен под аббревиатурой FTM по аббревиатуре от английского Fluid Thioglycollate Medium. Он был создан Брюером и модифицирован в 1944 году Верой, которая добавила в него казеиновый пептон.

Эта среда имеет низкий окислительно-восстановительный потенциал, поэтому не рекомендуется для развития строго аэробных бактерий, но идеальна для восстановления факультативных аэробных, строго анаэробных и нетребовательных микроаэрофильных бактерий.

Тиогликолятный бульон без индикатора. Показывает выделения из влагалища. Источник: Bobjgalindo

Высокая эффективность, наблюдаемая с этой средой при выделении и выделении широкого спектра микроорганизмов, сделала ее принятой Фармакопеей США (USP), Официальной ассоциацией сельскохозяйственных химиков (AOAC) и Европейской фармакопеей ( ЕР).

Эти организации рекомендуют его для контроля стерильности фармацевтических продуктов и для обогащения различных типов образцов.

Тиогликолят кадо состоит из дрожжевого экстракта, панкреатического гидролизата казеина, безводной декстрозы, L-цистина, хлорида натрия, тиогликолата натрия, резазурина и небольшого количества агара.

Существует несколько вариантов этой среды, среди которых: бульон тиогликолятов с индикатором, бульон тиогликолятов без индикатора, бульон тиогликолятов с индикатором, обогащенный гемином и витамином К _1, и бульон тиогликолятов с карбонатом кальция.

Примечательно, что вариант тиогликолатного бульона, обогащенный гемином и витамином К, служит для усиления роста привередливых анаэробов, а вариант тиогликолатного бульона, содержащий карбонат кальция, полезен для противодействия кислотам, образующимся во время роста микробов.

основа

Тиогликолатный бульон считается неселективной средой для обогащения, поскольку он позволяет расти большинству неприхотливых бактерий. Потребности в питательных веществах обеспечиваются дрожжевым экстрактом, панкреатическим переваром и глюкозой.

С другой стороны, эта среда, хотя и является бульоном, содержит небольшое количество агара; Это означает, что он имеет низкий окислительно-восстановительный потенциал из-за того, что он замедляет поступление кислорода таким образом, что кислород уменьшается по мере того, как он углубляется в трубку.

Вот почему эта среда идеально подходит для развития факультативных аэробных, микроаэрофильных и строго анаэробных бактерий, причем последние 2 не нуждаются в инкубации в этих условиях. Эта же среда регулирует количество кислорода в среде, поскольку отсутствует на дне трубки и в достаточном количестве на поверхности.

Точно так же тиогликолят и L-цистин действуют как восстанавливающие агенты, помогая предотвратить накопление веществ, вредных для развития бактерий, таких как перекись. Кроме того, эти соединения содержат сульфгидрильные группы (-SH-), нейтрализующие ингибирующие эффекты производных ртути, мышьяков, а также других тяжелых металлов.

Со своей стороны, резазурин является индикатором восстановления оксидов. Это вещество бесцветное при восстановлении и розовое при окислении. Существуют индикаторные и неиндикационные варианты тиогликолятного бульона. Его использование будет зависеть от типа образца и предпочтений лаборатории.

Между тем, хлорид натрия поддерживает осмотический баланс тиогликолятного бульона, а использование глюкозы в безводной форме предотвращает избыток влаги в обезвоженной среде.

подготовка

Тиогликолятный бульон с индикатором

Взвешивают 29,75 г обезвоженной среды и растворяют в 1 литре дистиллированной воды. Смеси дают постоять примерно 5 минут. Доставьте к источнику тепла и часто помешивайте до полного растворения.

Разлить среду в пробирки и автоклавировать при 121 ° C в течение 15 минут. Дайте остыть перед использованием. Проверьте врезку коммерческого дома на предмет ее сохранности. Одни рекомендуют хранить при комнатной температуре в темном месте, другие - в защищенном от света холодильнике.

PH приготовленной среды 7,1 ± 0,2.

Цвет дегидратированной среды светло-бежевый, а приготовленная среда светло-янтарная с некоторой опалесценцией.

Тиогликолатный бульон с индикатором, обогащенный гемином и витамином К

Существуют коммерческие среды, которые уже содержат гемин и витамин K ₁ , особенно для выращивания анаэробов.

Если у вас нет обогащенной среды для анаэробов, вы можете приготовить базовый бульон тиогликолятов. Для этого на каждый литр среды _{добавляют} 10 мг гидрохлорида гемина и 1 мг витамина К ₁ . Однако, если в бульон тиогликолата добавляется кровь или сыворотка, добавление гемина или витамина К не требуется.

Тиогликолятный бульон с карбонатом кальция

Он поступает в продажу и готовится в соответствии с инструкциями на вкладыше.

Тиогликолятный бульон без индикатора

Он имеет тот же состав, что и основной тиогликолят, но не содержит резазурина.

Взвешивают 30 г обезвоженной среды и растворяют в литре дистиллированной воды. В остальном препарат такой же, как описанный в тиогликолятном бульоне с индикатором.

использование

Бульон тиогликолятов полезен для обогащения клинических образцов, особенно из стерильных мест. Это также полезно для неклинических образцов, таких как косметика, лекарства и т. Д.

Для инокуляции жидких образцов (таких как спинномозговая жидкость, синовиальная жидкость и др.) Образцы сначала центрифугируются, а затем берутся 2 капли осадка и помещаются в бульон тиогликолата. Инкубируйте при 35 ° C в течение 24 часов. Если за это время нет роста (помутнения), инкубируют максимум до 7 дней.

Если образец берется тампоном, культуральная среда сначала инокулируется в чашки, и, наконец, тампон вводится в бульон, выступающая часть разделяется, и пробирка закрывается, оставляя тампон внутри. Инкубируйте при 35 ° C в течение 24 часов, максимум 7 дней.

Для твердых образцов гомогенизируйте их в физиологическом солевом растворе (SSF), а затем инокулируйте тиогликолятный бульон 2 каплями суспензии.

Иногда его можно использовать в качестве транспортной среды для образцов, в которых есть подозрения на наличие строгих анаэробов, или в качестве резервного бульона для обогащения.

Вариант тиогликолатного бульона с карбонатом кальция используется для поддержания контрольных штаммов в течение более длительного времени, поскольку он обладает способностью нейтрализовать кислоты, образующиеся при использовании глюкозы; Эти кислоты токсичны для определенных бактерий.

Рост в тиогликолятном бульоне будет наблюдаться по мутности среды. В зависимости от типа образца и подозреваемых микроорганизмов рекомендуется выполнить окрашивание по Граму и последующее пересеивание в неизбирательные и селективные среды.

контроль качества

Для контроля стерильности рекомендуется инкубировать один или два бульона без инокуляции. Ожидаемый результат - прозрачный бульон без изменения цвета, хотя появление легкого розового цвета на поверхности тюбика - это нормально.

Для контроля качества следует засеять от 10 до 100 КОЕ сертифицированных контрольных штаммов, таких как Staphylococcus aureus ATCC 6538, Micrococcus luteus ATCC 9341, Bacillus subtilis ATCC 6633, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Clostridium sporogenes ATCC 19404, Clostridium 11437 sporogenes. Bacteroides vulgatus ATCC 8482.

Инкубируйте при 30-35 ° C в условиях аэробиоза от 24 часов до максимум 3 дней, так как эти микроорганизмы быстро растут.

Во всех случаях ожидается хорошее развитие, за исключением Micrococcus luteus и Bacillus subtilis, где развитие может быть умеренным.

Для контроля качества тиогликолятного бульона, обогащенного гемином и витамином K ₁ , можно использовать контрольные штаммы Bacteroides vulgatus ATCC 8482, Clostridium perfringens ATCC 13124 и Bacteroides fragilis ATCC 25285. Ожидаемый результат - удовлетворительный рост.

рекомендации

-Иногда можно заметить, что поверхность тиогликолятного бульона с индикатором становится розовой; Это связано с окислением среды. Если розовый цвет покрывает 30% или более всего бульона, его можно нагреть на водяной бане в течение 5 минут, снова охладить и использовать.

Это удалит поглощенный кислород, вернув среде ее первоначальный цвет. Эту процедуру можно проделать только один раз.

-Чтобы улучшить рост аэробных бактерий, инкубируйте при слегка открытой крышке. Однако предпочтительнее использовать для этой цели бульон с инфузией мозга и сердца или соевый бульон с триптиказой для правильного развития строгих аэробов.

- Следует избегать замерзания среды или перегрева, так как оба условия повреждают среду.

-Прямой свет повреждает питательную среду, ее необходимо хранить в защищенном от света месте.

Ссылки

1. Britannia Laboratories. Тиогликолят USP с индикатором. 2015. Доступно на: labBritania.com.
2. Chios Sas Laboratories. 2019. Тиогликолятный бульон. Доступно на: quios.com.co
3. Laboratories BD Fluid Thioglycollate Medium (FTM). 2003. Доступно по адресу: bd.com/Europe.
4. Среда BBL приготовлена ​​в пробирках для культивирования анаэробных микроорганизмов. Тиогликолятные среды. 2013. Доступно на: bd.com
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Микробиологический диагноз Бейли и Скотта. 12 изд. Редакция Panamericana SA Аргентина.