ТЕТРАТИОНАТНЫЙ БУЛЬОН: ОБОСНОВАНИЕ, ПРИГОТОВЛЕНИЕ И ПРИМЕНЕНИЕ - БИОЛОГИЯ - 2025

Тетратионат бульона или бульона ТТ представляет собой селективный жидкую культуральную среду для обогащения и извлечения штаммов рода Salmonella. Он был создан Мюллером, а позже модифицирован Кауфманном, поэтому некоторые называют его бульоном Мюллер-Кауфманн.

Исходная среда содержала протеозопептоны, карбонат кальция и тиосульфат натрия. Кауфманн добавил к нему соли желчных кислот и создал еще одну модальность с ярко-зеленым. Эти вещества подавляют рост колиформ, оставляя среду свободной для развития патогенных бактерий, в данном случае сальмонеллы.

Добавление йодистого раствора в тетратионатный бульон. Источник: Мануэль Альмагро Ривас

Модификация оказалась очень удачной, так как значительно повысила чувствительность среды. По этой причине в настоящее время он полезен для поиска сальмонелл в образцах любого типа, но особенно для твердого или жидкого стула и пищевых продуктов.

Его подготовка состоит из двух этапов; Коммерческая среда является основой для приготовления тетратионатного бульона, а затем, чтобы можно было получить тетратионат, для завершения среды добавляют раствор йодированного йода.

Американская ассоциация общественного здравоохранения (APHA) рекомендует использовать тетратионатный бульон с добавлением ярко-зеленого для обогащения образцов на сальмонеллы, поскольку он более селективен, чем тетратионатный бульон и селенитовый бульон.

В целом, тетратионатный бульон идеален, когда предполагается присутствие бактерий рода Salmonella в небольших количествах или когда они подвергаются злоупотреблению в результате воздействия ингибирующих веществ или промышленных процессов, которые минимизируют их жизнеспособность.

основа

Присутствующие пептоны соответствуют панкреатическому перевариванию казеина и пептическому перевариванию тканей животных. Они являются источником углерода, азота и других питательных веществ для роста бактерий.

Со своей стороны, тиосульфат натрия реагирует с йодированным раствором с образованием тетратионата. Это подавляет рост колиформных бактерий и способствует развитию бактерий, содержащих фермент тетратионатредуктазу, среди которых есть род Salmonella, а также Proteus.

Соли желчных кислот также действуют как ингибиторы для большинства грамположительных и некоторых грамотрицательных бактерий (колиформ).

Карбонат кальция поглощает токсичные вещества, образующиеся при разложении тетратионата, который образует серную кислоту. В этом смысле карбонат кальция нейтрализует кислотность, поддерживая стабильный pH среды.

В случае ярко-зеленого цвета это вещество увеличивает селективную способность тетратионатного бульона, подавляя другие микроорганизмы, кроме рода Salmonella.

подготовка

-Тетратионатный бульон

Йод-йодный раствор

Весить:

• 6 граммов йода.
• 5 г йодида калия.

Йодид калия растворяют примерно в 5 мл стерильной дистиллированной воды, затем постепенно добавляют йод, пока смесь нагревают. После полного растворения долить стерильной дистиллированной водой до отметки до конечного объема 20 мл.

Базовая среда для тетратионатного бульона

Взвешивают 46 г обезвоженной среды и растворяют в 1 литре стерильной дистиллированной воды. Перемешать и нагреть до полного растворения, довести до кипения можно лишь несколько минут. Не автоклавировать. Основу среды дают остыть примерно до 45 ° C, и в это время добавляют 20 мл йодированного раствора.

После добавления йодированного раствора в среду его следует использовать немедленно. Если вы не хотите использовать всю смесь, действуйте следующим образом:

10 мл базовой среды распределяют по пробиркам, и только в те, которые должны быть засеяны образцами, добавляют 0,2 мл йодированного раствора.

Те, которые не собираются использовать, все равно можно хранить в холодильнике, однако, поскольку среда не стерилизована, лучше всего приготовить точное количество, которое необходимо.

Цвет среды до добавления раствора йодированного йода - молочно-белый с белым осадком, после добавления - коричневый с плотным осадком. Наблюдаемый осадок является нормальным и соответствует карбонату кальция, который не растворяется. Конечный pH среды составляет 8,4 ± 0,2.

-Тетратионатный бульон с ярко-зеленым

Чтобы приготовить ярко-зеленый тетратионатный бульон, выполняются все этапы, описанные выше, но дополнительно к смеси добавляется 10 мл ярко-зеленого раствора, приготовленного с концентрацией 0,1%.

Сияющий зеленый

Этот раствор готовится следующим образом:

Взвешивают 0,1 г ярко-зеленого цвета и растворяют в 100 мл дистиллированной воды. Нагрейте до кипения до полного растворения. Хранить в янтарной бутылке.

использование

Для образцов кала (посев кала) протокол следующий:

Засейте 1 г твердого стула или 1 мл жидкого стула в пробирке с 10 мл готового к употреблению тетратионатного бульона. Энергично встряхните и инкубируйте в аэробных условиях при 43 ° C в течение 6-24 часов.

Затем возьмите аликвоту от 10 до 20 мкл бульона и пересейте в селективную среду для сальмонелл, такую ​​как агар SS, агар XLD, ярко-зеленый агар, кишечный агар Hektoen и другие.

Параллельно с этим в селективную среду для Salmonella следует засеять прямой образец (фекалии) без обогащения. Для ректальных мазков слейте собранный материал в трубку и действуйте, как описано выше.

Для образцов пищевых продуктов взвесьте 10 г твердой пищи или 10 мл жидкой пищи и засевайте флакон 100 мл готового к употреблению тетратионатного бульона. Действуйте так же, как описано выше, но инкубируйте при 37 ° C.

Как видно, соотношение между образцом и бульоном всегда будет 1:10.

контроль качества

Известные контрольные штаммы можно использовать для тестирования питательной среды. Наиболее широко используются штаммы, сертифицированные ATCC.

Используемые штаммы: Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella abony DSM 4224, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Escherichia coli ATCC 25922, Enterococcus faecalis ATCC 19433 и Staphylococcus aureus ATCC 25923.

Ожидается отличный рост штаммов Salmonella, в то время как Escherichia coli может иметь слабый или регулярный рост, а грамположительные штаммы (Enterococcus и Staphylococcus) частично или полностью подавляются.

рекомендации

-Поскольку эта среда не подавляет рост Proteus, некоторые лаборатории обычно добавляют 40 мг / л новобиоцина, чтобы предотвратить развитие этого штамма микробов. Антибиотик необходимо добавлять перед раствором йода.

-После приготовления среды, включающей раствор йода иода, необходимо провести инокулирование не более 2 часов.

-При распределении среды по пробиркам смесь необходимо непрерывно гомогенизировать для ресуспендирования образовавшегося осадка.

- В менее загрязненных образцах тетратионатный бульон инкубируют при 35–37 ° C, а для сильно загрязненных образцов рекомендуется инкубация при 43 ° C.

Ссылки

1. Лаборатория Конда Пронадиса. 2010. Основа тетратионатного бульона по Müeller-Kauffmann. Доступно в:
2. BD Laboratories. 2003. Основа тетратионатного бульона. Доступно в:
3. Britannia Laboratories. 2015. Бульон на основе тетраната. Доступно в:
4. BBL Media. 2005 г. Готовится в пробирках для культивирования сальмонелл.
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Микробиологический диагноз Бейли и Скотта. 12 изд. Редакция Panamericana SA Аргентина.
6. Flores-Abuxapqui J, Puc-Franco M, Heredia-Navarrete M, Vivas-Rosel M, Franco-Monsreal J. Сравнение культуральных сред селенита натрия и тетратионата натрия, инкубированных при 37 ° C и 42 ° C для выделение Salmonella spp из фекалий носителей. Rev Biomed 2003; 14 (4): 215-220