ТРИПТИКАЗЕИНОВЫЙ СОЕВЫЙ БУЛЬОН: ОСНОВА, ПРИГОТОВЛЕНИЕ И ПРИМЕНЕНИЕ - БИОЛОГИЯ - 2025

Соевый бульон триптон представляет собой жидкость культуральной среды, высокая питательная ценность, неселективная. Благодаря своей универсальности, это одна из наиболее широко используемых жидких питательных сред в микробиологической лаборатории.

Он также известен под названием триптический соевый бульон или переваренный казеин-соя, аббревиатура которого - TSB для его аббревиатуры на английском языке Tryptic Soy Broth или CST для его аббревиатуры на испанском языке. Его использование очень разнообразно из-за его состава. Он состоит из триптеина, соевого пептона, хлорида натрия, дикалия фосфата и глюкозы.

Триптиказеиновый соевый бульон, засеянный штаммом Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853, в котором наблюдается образование пигмента. Источник: Фотография автора MSc. Мариельса Гил.

Он способен воспроизводить клинически важные патогенные бактерии, в том числе питательные и анаэробные бактерии. Некоторые условно-патогенные и заражающие грибки также могут развиваться в этой среде.

Благодаря своей высокой питательной ценности, он обладает высокой чувствительностью к обнаружению микробного загрязнения, по этой причине он был выбран Службой инспекции здоровья животных и растений Министерства сельского хозяйства США для микробиологического анализа вакцин.

Точно так же соевый бульон с триптиказеином отвечает требованиям различных фармакопей (Европейский EP, Японский JP и Североамериканский USP) для микробиологического исследования продуктов на промышленном уровне, таких как косметика и продукты питания.

С другой стороны, стоит упомянуть, что, несмотря на большую полезность, эта среда относительно недорогая, что делает ее доступной для большинства микробиологических лабораторий. Кроме того, его очень легко приготовить.

основа

Триптеин, пептон и глюкоза придают ему необходимые питательные свойства, что делает его идеальной средой для быстрого роста микробов.

Примерно через 6-8 часов инкубации у большинства микроорганизмов уже можно увидеть рост. Однако есть медленнорастущие сорта, для роста которых могут потребоваться дни.

Хлорид натрия и дикалий фосфат действуют как регулятор осмотического баланса и pH соответственно. О наличии роста свидетельствует появление помутнения среды; если роста нет, среда остается полупрозрачной.

Благодаря его светлому цвету можно наблюдать образование пигментов, таких как тот, который показан на изображении в начале статьи, который соответствует пигменту, продуцируемому синегнойной палочкой.

подготовка

-Триптизеиновый соевый бульон

Для приготовления трипсинового соевого бульона необходимо взвесить 30 г дегидратированной коммерческой среды на цифровых весах. Затем растворяют в литре дистиллированной воды, содержащейся в колбе.

Смесь оставляют на 5 минут, а затем относят к источнику тепла, чтобы помочь растворить среду. При кипении в течение 1 минуты следует часто помешивать.

После растворения его по мере необходимости распределяют в пробирки подходящего размера. Можно использовать пробирки с ватными пробками или бакелитовые колпачки. Затем пробирки стерилизуют средой в автоклаве при 121 ° C в течение 15 минут.

PH среды должен оставаться на уровне 7,3 ± 0,2.

Следует отметить, что цвет дегидратированной питательной среды светло-бежевый, и ее следует хранить при температуре от 10 до 35 ° C в сухом месте. Приготовленный отвар имеет светло-янтарный цвет и должен храниться в холодильнике (от 2 до 8 ° С).

-Варианты триптиказеинового соевого бульона

Модифицированный соевый бульон с триптиказеином может быть приготовлен путем добавления солей желчных кислот и новобиоцина, чтобы сделать его селективным для выделения E. coli. Другой вариант для той же цели - приготовление триптиказо-соевого бульона с добавлением ванкомицина, цефиксима и теллурита (2,5 мкг / мл).

С другой стороны, в триптический соевый бульон можно добавить больше глюкозы (0,25%), если цель состоит в том, чтобы стимулировать образование биопленок.

использование

Он достаточно питателен, чтобы позволить расти привередливым или привередливым бактериям, таким как Streptococcus pneumoniae, Streptococcus sp и Brucella sp, без необходимости добавления крови или сыворотки.

Точно так же в этом бульоне могут развиваться некоторые грибы, например Candida albicans Complex, Aspergillus sp и Histoplasma capsulatum.

Кроме того, эта среда в анаэробных условиях идеальна для восстановления бактерий, принадлежащих к роду Clostridium, а также не имеющих спор анаэробных бактерий, имеющих клиническое значение.

Если добавлено 6,5% хлорида натрия, его можно использовать для роста энтерококков и других стрептококков группы D.

На уровне исследований он оказался очень полезным в различных протоколах, особенно при изучении биопленок или бактерий, образующих биопленку. Он также используется для приготовления 0,5% бактериальной суспензии Mac Farland, необходимой для проведения антибиотикограммы по методу Кирби и Бауэра.

В этом случае берут от 3 до 5 колоний одинакового вида и эмульгируют в 4-5 мл соевого бульона с триптиказеином. Затем его инкубируют в течение 2-6 часов при 35-37 ° C и затем доводят до желаемой концентрации с помощью стерильного физиологического раствора. Соевые бульоны с триптиказеином не следует использовать после 18–24 часов инкубации.

Посевная

Образец можно высеять напрямую или пересеять чистые колонии, взятые из селективной среды. Посевной материал должен быть небольшим, чтобы не замутнять среду перед инкубацией.

Обычно его инкубируют при 37 ° C в условиях аэробиоза в течение 24 часов, но эти условия могут варьироваться в зависимости от исследуемого микроорганизма. При необходимости его также можно инкубировать в анаэробных условиях при 37 ° C в течение нескольких дней. Например, быстрорастущие или привередливые микроорганизмы можно инкубировать до 7 дней.

При микробиологическом анализе фармацевтических субстанций, таких как вакцины, протоколы строже. В этих случаях бульон без роста не выбрасывают до тех пор, пока не истечет 14 дней непрерывной инкубации.

контроль качества

Из каждой приготовленной партии следует инкубировать 1 или 2 незасеянные пробирки, чтобы продемонстрировать их стерильность. Он должен оставаться неизменным.

Известные сорта также можно посадить, чтобы оценить их поведение. Среди штаммов, которые можно использовать:

Aspergillus brasiliensis ATCC 1604, Candida albicans ATCC 10231, Bacillus subtilis ATCC 6633, Staphylococcus aureus ATCC 6538 или 25923, Escherichia coli ATCC 8739, Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC30eCC305, Streptococcus pneumoniae ATCC30eCC305, Streptococcus pneumoniae ATCC30eCC305, Streptococcus pneumoniae ATCC30eCC305, Streptococcus pneumoniae ATCC30eCC305,

Во всех случаях рост должен быть удовлетворительным при соответствующих атмосферных и температурных условиях для каждого микроорганизма.

Ограничения

-Брожение глюкозы вызывает снижение pH среды за счет производства кислот. Это может быть неблагоприятным для выживания некоторых микроорганизмов, чувствительных к кислотности.

-Это не рекомендуется для содержания штаммов, потому что, помимо кислотности, бактерии истощают питательные вещества через несколько дней с последующим накоплением токсичных веществ, которые делают окружающую среду неблагоприятной.

-Вы должны соблюдать все протоколы стерильности, так как бульоны легко контаминируются.

-После приготовления соевых бульонов с триптиказеином не следует пытаться перелить бульон в другую стерильную пробирку, потому что этот тип маневра очень уязвим для заражения.

Ссылки

1. Cona E. Условия для хорошего исследования чувствительности методом диффузии в агаре. Преподобный чил. infectol. 2002; 19 (2): 77-81. Доступно на: scielo.org
2. Британская лаборатория. Соевый бульон Триптейн. 2015. Доступно на: britanialab.com.
3. Лаборатория МЦД. Триптиказеиновый соевый бульон. Доступно на: electronic-systems.com
4. Лаборатория Neogen. Триптих Соевый бульон. Доступно на: foodsafety.neogen.com
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Микробиологический диагноз Бейли и Скотта. 12 изд. Редакция Panamericana SA Аргентина.
6. Рохас Т., Васкес И., Рейес Д., Мартинес С., Медина Л. Оценка метода магнитной иммуносепарации для выделения Escherichia coli O157: H7 в молочных кремах. АЛАН. 2006; 56 (3): 257-264. Доступно на: scielo.org.ve
7. Gil M, Merchán K, Quevedo G, Sánchez A, Nicita G, Rojas T., Sánchez J, Finol M. Формирование биопленок в изолятах Staphylococcus aureus в зависимости от чувствительности к противомикробным препаратам и клинического происхождения. Vitae. 2015; 62 (1): 1-8. Доступно на: saber.ucv.ve
8. Нарваес-Браво С., Карруйо-Нуньес Дж., Морено М., Родас-Гонсалес А., Хоэт А., Виттум Т. Изоляция Escherichia coli O157: H7 в образцах бычьих фекалий двойного назначения из муниципалитета Миранда, штат Сулия, Венесуэла. Преподобный Cient. (Маракайбо), 2007 год; 17 (3): 239-245. Доступно на: scielo.org