МАЛОНАТНЫЙ БУЛЬОН: ОСНОВА, ПРИГОТОВЛЕНИЕ И ПРИМЕНЕНИЕ - БИОЛОГИЯ - 2025

Малонат бульон является среда жидкой культуры используется для диагностического теста (малоната), используется для дифференциации некоторых родов семейства Enterobacteriaceae. Он был создан Лейфсоном в 1933 году и позже модифицирован Юингом, который добавил к исходной формуле небольшое количество декстрозы и дрожжевого экстракта.

В настоящее время среда состоит из дрожжевого экстракта, сульфата аммония, дикалийфосфата, монофосфата калия, хлорида натрия, малоната натрия, декстрозы и бромтимолового синего. Этот тест обычно включается в батарею биохимической идентификации Enterobacteriaceae, помогая дифференцировать определенные роды и виды.

Графическое изображение малонатной пробы. A. Отрицательный тест, B. (Подкисление) Отрицательный тест, C. (Среднее подщелачивание) Положительный тест. Источник: Цветные трубки publicdomainpictures.net

Тест на малонат в основном основан на способности некоторых микроорганизмов использовать малонат натрия в качестве единственного источника углерода и сульфат аммония в качестве источника азота.

Тест на малонат обычно бывает положительным у некоторых видов родов Enterobacter, Klebsiella и Citrobacter. В то время как большинство видов родов Escherichia, Salmonella, Shigella, Edwardsiella, Yersinia, Serratia, Morganella, Proteus и Providencia дают отрицательную реакцию.

основа

Тест на малонат состоит из демонстрации тех бактерий, которые способны использовать малонат натрия в качестве единственного источника углерода и сульфат аммония в качестве источника азота.

Большинство энтеробактерий, которые не используют малонат, могут расти в этой среде, принимая в качестве питательных веществ декстрозу и дрожжевой экстракт.

В этом случае любой попытке подщелачивания с помощью пептонов будет противодействовать производство кислот, образующихся при ферментации декстрозы. Аналогичным образом, дикалий и монокалиевый фосфаты действуют как буфер, поддерживая pH на уровне 6,7.

Поэтому при отрицательном результате теста бульон остается прежнего цвета (зеленого). В редких случаях среда может стать кислой из-за ферментации декстрозы; без использования пептонов и индикатора pH цвет среды стал бы желтым. Чтобы это произошло, pH должен упасть до 6.

Теперь, когда этот тест дает положительный результат, говорят, что микроорганизм использовал малонат и сульфат аммония в качестве источников углерода и азота соответственно, без использования других компонентов.

В этом случае среда становится щелочной из-за выделения натрия и последующего образования NaOH. В этом смысле индикатор pH (бромтимоловый синий) меняет цвет среды с зеленого на синий, когда pH равен или превышает 7,6. Синий может быть светлым или насыщенным (берлинская лазурь).

Наконец, хлорид натрия поддерживает осмолярность среды, а вода является разбавителем всех компонентов.

интерпретация

Бульон того же цвета (зеленый) - отрицательный результат

Желтый бульон: отрицательный результат

Светлый или темно-синий бульон: положительный результат.

Существует вариант, называемый бульоном фенилаланина малоната, также называемый средой Шоу и Кларка. В этом случае могут быть проанализированы два теста: использование малоната в качестве источника углерода и производство пировиноградной кислоты из фенилаланина.

подготовка

Малонатный бульон

Взвешивается количество граммов, указанное на вкладыше выбранной торговой компании (оно может варьироваться от одного к другому). Навески взвешенных граммов суспендируют в одном литре дистиллированной воды. Слегка нагрейте до полного растворения. Разлить по 3 мл среды в пробирки 13/100 с ватными крышками.

Стерилизовать в автоклаве при 121 ° C в течение 15–20 минут.

Перед использованием охладите. Если они не собираются использовать сразу, храните в холодильнике до использования. Перед посевом доведите бульоны до комнатной температуры.

PH среды должен быть 6,7 ± 0,2. Цвет приготовленной среды - бутылочно-зеленый.

Бульон фенилаланина малоната

Взвешивают 11 г обезвоженной среды и растворяют в 1 литре дистиллированной воды. В остальном подготовка такая же, как описано ранее.

Его также можно приготовить, добавив 2 г / л фенилаланина к среде бульона с малонатом перед стерилизацией.

использование

Он используется как часть набора биохимических тестов, предназначенных для идентификации бактерий семейства Enterobacteriaceae.

Помогает различать:

-Род Klebsiella и Enterobacter (+) из рода Escherichia и Serratia (-).

-Виды Salmonella enterica ssp arizonae, Salmonella enterica ssp salame и Salmonella enterica ssp diarizonae (+), виды Salmonella enterica ssp enterica (-).

-Из рода Klebsiella в основном (+) из рода Actinobacillus (-).

-Иногда это может помочь дифференцировать роды и виды бактерий, не принадлежащих к семейству Enterobacteriaceae, например, среди неферментирующих грамотрицательных бацилл Alcaligenes faecalis (+) и Acinetobacter sp (-).

Источник: Конеман Э., Аллен С., Янда В., Шрекенбергер П., Винн В. (2004). Микробиологическая диагностика. 5-е изд. Редакция Panamericana SA Аргентина.

Обработать

Под зажигалку берется порция чистого одеколона с помощью правильно простерилизованной и охлажденной платиновой ручки. Отобранный образец (светлый посевной материал) растворяют в малонатном бульоне. Инкубируйте с открытой крышкой в ​​аэробиозе при 35 ° C ± 0,2 в течение 24-48 часов.

Малонатный бульон также можно инокулировать из 18-24-часовой культуры в триптиказо-соевом бульоне. В этом случае стерильной пипеткой отбирают 0,01 мл и засевают малонатный бульон. Инкубируйте с открытой крышкой в ​​аэробиозе при 35 ° C ± 0,2 в течение 24-48 часов.

По окончании времени результаты интерпретируются. Любой след синего цвета после 48 часов инкубации следует рассматривать как положительный. Тест не следует рассматривать как отрицательный, пока не истечет 48-часовое время инкубации.

В случае использования варианта бульона фенилаланина малоната сначала интерпретируется малонат, а затем добавляются 5 капель 1 н. HCl и 3-5 капель 8% хлорида железа. Темно-зеленый цвет интерпретируется как положительный тест на фенилаланин. Если же среда становится бледно-голубой, тест на фенилаланин отрицательный.

контроль качества

Для контроля стерильности среды один или два бульона следует инкубировать при 35 ° C ± 0,2 в течение 24 часов инкубации. По истечении этого времени не должно быть помутнения или изменения цвета.

Для контроля качества могут использоваться известные или сертифицированные штаммы, такие как: Enterobacter aerogenes ATCC 13048, Klebsiella pneumoniae ATCC 33945, Salmonella enterica ssp arizonae ATCC 13314 и Escherichia coli ATCC 25922.

Ожидаемые результаты:

• Enterobacter aerogenes, Klebsiella pneumoniae и Salmonella enterica ssp arizonae дают положительную реакцию (средний синий цвет).
• Для Escherichia coli результат должен быть отрицательным, то есть ожидается, что не будет изменения цвета (зеленый) или что он станет желтым из-за ферментации глюкозы.

Ограничения

Не используйте бульон с помутнением, осадками, изменением цвета или любыми признаками порчи.

Ссылки

1. Pedraza J, Sanandres N, Varela Z, Aguirre E, Camacho J. Микробиологическая изоляция Salmonella spp. и молекулярные инструменты для его обнаружения. Uninorte Health. Барранкилья (Col.) 2014; 30 (1): 73-94. Доступно на: scielo.org.co
2. Баррель Малонатный бульон, модифицированный Юинг. 2007. Доступно на: bd.com
3. Лаборатории Сенны. Бульон малонато. Доступно на: cientificasenna.com
4. RenyLab. Бульон малонато. 2013. Доступно на: es.renylab.ind.br
5. Mbiolog Диагностика. Бульон малонато. Доступно на: mbiolog.com
6. Конеман Э, Аллен С., Джанда В., Шрекенбергер П., Винн В. (2004). Микробиологическая диагностика. 5-е изд. Редакция Panamericana SA Аргентина.
7. Conda Pronadisa Laboratories. Отвар фенилаланина малоната. Доступно на: condalab.com