ОТВАР С ЛАКТОЗОЙ: ОСНОВА, ПРИГОТОВЛЕНИЕ И ПРИМЕНЕНИЕ - БИОЛОГИЯ - 2025

Бульон лактозы является средством , не - селективной среды жидкой культуры , используемым главным образом в качестве более предварительного обогащения в изоляции штаммов Salmonella от микробиологического анализа в обработанные пищевые продукты, молочные продукты или воду. Это рекомендовано Международной комиссией по микробиологическим характеристикам пищевых продуктов (ICMPF).

Среда содержит ферментный гидролизат желатина, мясной экстракт и лактозу - вещества, необходимые для роста бактерий. Кроме того, лактоза - это ферментируемый углевод, поэтому некоторые колиформные бактерии способны расщеплять ее с образованием газа.

Лактатные бульоны с помутнением. Источник: Фотография автора MSc. Мариельса Гиль

По этой причине лактозный бульон рекомендован Американской ассоциацией общественного здравоохранения (APHA) для предполагаемого исследования общих и фекальных колиформных бактерий, квалифицируя его как отличную альтернативу заменителю лаурилсульфаттриптозного бульона в стандартной методике наиболее вероятного числа (MPN). ), используемый для микробиологического анализа проб пищевых продуктов, молока и поверхностных вод, подземных, рекреационных, бытовых и промышленных отходов.

основа

Для микробиологического анализа некоторых образцов стадия предварительного обогащения важна, чтобы иметь возможность выделить конкретный микроорганизм, который может находиться в очень небольшом количестве или в неблагоприятных условиях, которые нарушают или минимизируют его жизнеспособность.

Так обстоит дело с сушеными и обработанными пищевыми продуктами, возможно, зараженными Salmonellas sp. В этих случаях, если бактерии присутствуют, они подверглись физическому и химическому воздействию в процессе производства продукта.

Таким образом, микроорганизмы подвергаются воздействию неблагоприятных факторов, таких как обезвоживание, воздействие ингибирующих или токсичных продуктов, а также перекрытие, вызванное, среди прочего, присутствием других бактерий в большем количестве.

В этом смысле лактозный бульон оказывает восстанавливающее действие на поврежденные структуры микроорганизма, заставляя его восстанавливаться и воспроизводиться таким образом, чтобы его можно было обнаружить.

Точно так же бульон с лактозой обладает способностью разбавлять ингибирующие вещества, которые могут повлиять на его жизнеспособность, что способствует его развитию. Кроме того, питательный состав лактозного бульона имеет стратегическое значение, чтобы способствовать росту Salmonella sp над другими микроорганизмами.

Для окончательной идентификации его необходимо пересеять в другие стандартные питательные среды.

С другой стороны, состав среды также позволяет обнаруживать ферментирующие лактозу микроорганизмы, выделяющие газ.

подготовка

Чтобы приготовить литр лактозного бульона, необходимо взвесить 13 граммов обезвоженной среды и растворить в 1000 мл дистиллированной воды.

Для растворения среды в воде раствор можно немного нагреть, но не слишком сильно.

После получения гомогенного раствора раствор готовят следующим образом: если бульон будет использоваться для поиска кишечных инфекций, готовят штатив с пробирками, в которые вставляют пробирку для ферментации Дарема вверх дном.

Трубка Дарема является очень важной деталью, потому что она позволяет обнаруживать газообразование - данные, имеющие большое значение при поиске колиформ.

Когда пробирки готовы, в них наливают 10 мл лактозного бульона - количества, которого должно быть достаточно, чтобы покрыть всю пробирку Дарема.

Если лактозный бульон будет использоваться в качестве бульона для предварительного обогащения, нет необходимости помещать ферментационную трубку Дарема. В этом случае требуется большее количество среды (225 мл), которая будет подаваться в бутылях на 500 мл, с широким горлышком и с термостойкой завинчивающейся крышкой.

Затем пробирки или колбы автоклавируют при 121 ° C в течение 15 минут.

Конечный pH среды должен оставаться 6,9 ± 0,2 при 25 ° C.

Бульоны хранятся в холодильнике до использования.

Перед употреблением отвары необходимо довести до комнатной температуры.

С другой стороны, лактозный бульон можно приготовить в двойной концентрации.

Некоторые лаборатории добавляют бромкрезоловый пурпурный в бульон с лактозой в качестве индикатора pH, чтобы показать пробирки, в которых лактоза ферментировалась из-за изменения цвета. В этом случае бульон приобретает фиолетовый цвет, а при брожении - желтый.

Приложения

В микробиологических лабораториях широко используется лактозный бульон, поскольку это относительно недорогая среда, обеспечивающая надежные и быстрые результаты (24-48 часов).

Его можно использовать для анализа общих и фекальных колиформ в пище и воде или в качестве бульона для предварительного обогащения на сальмонеллы.

Предварительное обогащение

Предварительное обогащение - это этап, предшествующий обогащению пробы, который значительно улучшает восстановление бактерий рода Salmonella в обработанных пищевых продуктах.

Для этого образец твердой пищи (25 грамм) или жидкости (25 мл) засевают в 225 мл лактозного бульона и инкубируют в течение 24-48 часов. Впоследствии он будет субкультивирован в обогащенной среде, такой как бульон селенит-цистина или бульон тетратионата. Затем перейдите к селективным носителям XLD и SS.

Общий и фекальный колиформный анализ

Это отличная среда как индикатор фекального загрязнения.

По этой причине лактозный бульон идеально подходит для предполагаемой фазы исследования кишечной палочки методом наиболее вероятного числа.

Для образцов, в которых предполагается наличие большого количества колиформ, будет засеяно меньшее их количество (1 мл), а для образцов, в которых предполагается меньшее количество колиформных бактерий, будет засеян больший объем образцов (10 мл).

Для анализа делают 10 ^-1 , 10 ^-2 , 10 ^-3 разведения , образуя батарею из 3-5 пробирок для каждой используемой концентрации.

Из каждого разведения в бульоны с лактозой засевают одинаковый объем.

Пробирки инкубируют в течение 24 часов. Отрицательные бульоны инкубируют еще 24 часа.

Интерпретация результатов осуществляется путем наблюдения за двумя характеристиками: первая - это наличие или отсутствие мутности, и поскольку эта среда не содержит индикатора pH, изменения цвета не будет.

Второй - добыча газа или нет. Наличие газа в трубке Дарема легко обнаружить по появлению внутри нее одного или нескольких пузырьков воздуха.

Считается положительным, если соблюдаются обе характеристики, то есть помутнение с выделением газа. Положительные пробирки необходимо повторно засеять в подтверждающую среду (2% бульон с бриллиантовым зеленым желчью и бульон ЭК).

Контроль качества среды

- При приготовлении среды важно не забыть разместить пробирки Durhams, если они предназначены для изучения колиформ.

- Не перегревайте среду перед стерилизацией.

- Разложите по пробиркам перед стерилизацией, а не после.

- Не используйте среду, возраст которой превышает 3 месяца.

- Не используйте, если вы заметили какие-либо изменения в обычных характеристиках среды.

- При приготовлении партии лактозного бульона проверьте его качество, высевая известные штаммы, такие как Escherichia coli, Enterobacter aerogenes, Citrobacter freundii и Klebsiella pneumoniae. Они очень хорошо растут, с добычей газа (положительный контроль).

- Он также может включать Pseudomonas aeruginosa, Salmonella typhimurium или Enterococcus faecalis, которые хорошо растут, но без выделения газа (отрицательный контроль).

- Следует отметить, что исходный цвет обезвоженной среды бежевый, а цвет приготовленной среды очень светлый и прозрачный желтый. Если наблюдается изменение цвета или внешнего вида, они могут ухудшиться.

Ссылки

1. Асеведо Р., Севериче С., Кастильо М. Экологическая биология и микробиология. (2013) 1-е издание. Картахенский университет, Колумбия.
2. Камачо А., Джайлс М., Ортегон А., Палао М., Серрано Б. и Веласкес О. (2009). Методы микробиологического анализа пищевых продуктов. 2-е изд. Химический факультет УНАМ. Мексика.
3. Conda Pronadisa Laboratories. 2017. Двойная концентрация лактозного бульона (European Pharm.)
4. Фернандес-Рендон К., Баррера-Эскорсиа Г. Сравнение методов извлечения бактерий группы кишечной палочки из донных отложений озера Сочимилько, Мексика. Преподобный Аргент. Microbiol. 2013; 45 (3): 180-184. Доступно на: scielo.org.
5. Сотомайор Ф., Вильягра В., Кристальдо Дж., Сильва Л., Ибаньес Л. Определение микробиологического качества воды из артезианских скважин в районах Центрального, Кордильерского и Столичного департаментов. Mem. Inst. Investig. Наука. Здоровье 2013; 11 (1): 5-14. Доступно на: scielo.iics.