КАМЕРА НОЙБАУЭРА: ИСТОРИЯ, ХАРАКТЕРИСТИКИ, ПРИМЕНЕНИЕ - БИОЛОГИЯ - 2025

Камера Нойбауэра , гематометр или гемоцитометр, представляет собой лабораторный прибор, состоящий из специальной толстой стеклянной пластины. Эта камера используется для подсчета некоторых типов клеток, таких как эритроциты, лейкоциты и тромбоциты, хотя ее можно использовать для подсчета спор, спермы, паразитов и т. Д.

Он имеет очень своеобразные характеристики, так как состоит из 3-х зон, центральной для подсчета и двух зон поддержки. Каждая камера имеет две счетные зоны или перекрестие, одну вверху и одну внизу.

Камера Нойбауэра. Источник: SantiBadia. Отредактированное изображение.

У них есть несколько разделов в виде сетки. Счетные области представляют собой средние квадраты, расположенные в 4-х углах обеих сеток, плюс центральный квадрат.

Сборка камеры должна производиться с большой осторожностью, так как любая деталь влияет на количество клеток. Можно сделать много ошибок, но если они возникнут, камеру необходимо разобрать, почистить и собрать заново. К основным ошибкам можно отнести следующее:

Переполнение камеры или недостаточное заполнение, предоставление камере высохнуть, попытки удалить излишек жидкости с помощью марли, наклон камеры при транспортировке, заполнение грязной или влажной камеры, отсутствие перемешивания разведения или образца, среди прочего. Все эти ошибки приведут к нереальной стоимости.

история

Камера Нойбауэра - это высокоточный прибор, производственный процесс которого проходит строгий контроль качества. Он был создан для точного подсчета частиц или форменных элементов на мм ³ , например ячеек в различных жидкостях. Его изящная графика вырезана алмазным карандашом.

Характеристики камеры Нойбауэра

Вся камера имеет размер обычного предметного стекла, поэтому ее можно поместить на предметный столик микроскопа.

Камера состоит из трех центральных прямоугольных поверхностей (а, б, в). В зоне «b» находится R-зона или зона счета, также называемая сеткой. По одному с каждой стороны камеры, разделенные зоной «d».

Графическая диаграмма камеры Нойбауэра. Источник: Практическое руководство по гематологии. Школа биоанализа Университета Карабобо, Венесуэла.

Каждая сетка представляет собой полированную область, на которой выгравирована счетная область. Он состоит из квадрата с площадью поверхности 9 мм ² и внутри разделен на 9 квадратов с площадью поверхности 1 мм ² каждый. Четыре угловых квадрата разделены на 16 меньших квадратов ( площадью 0,0625 мм ² ).

Эти сетки образуются сериями миллиметровых линий, которые пересекаются друг с другом, образуя идеально нарисованные сетки, ограниченные указанными измерениями. Эти линии выгравированы алмазным наконечником.

Улучшенный ретикулум Нойбауэра. Источник: Практическое руководство по гематологии Школы биоанализа Университета Карабобо, Венесуэла.

Четыре стороны соответствуют счетной области. Именно по этим сторонам или углам подсчитывается большинство клеток (эритроцитов и лейкоцитов), а тромбоциты - в центральной области.

Центральная зона имеет несколько разделов, она состоит из квадрата размером 1 мм ^2, разделенного на 25 квадратов, каждый с площадью поверхности 0,04 мм ² . Они, в свою очередь, разделены на 16 сеток площадью 0,0025 мм ² .

Описание улучшенного ретикулума Нойбауэра. а) Площадь углов, б) центральная площадь, в) срединная площадь центральной площади. Источник: Практическое руководство по гематологии Школы биоанализа Университета Карабобо, Венесуэла.

Зоны «а» и «с» служат опорой для размещения специального объекта-укрытия, называемого гематометрическим предметным стеклом или крышкой гематиметра.

Высота между фольгой и счетной поверхностью 0,1 мм. Измерения площади поверхности ящиков для подсчета, а также высоты камеры и разведения пробы являются данными, необходимыми для проведения окончательных расчетов.

Приложения

Он используется для подсчета клеток. Это особенно полезно в области гематологии, поскольку позволяет подсчитывать 3 серии клеток крови; т.е. эритроциты, лейкоциты и тромбоциты.

Однако его можно использовать в других областях, например, для подсчета сперматозоидов, спор, бактерий или других важных элементов в зависимости от типа образца.

Как пользоваться?

Базовые приготовления

Подсчет клеток обычно начинают с предыдущего разведения. Пример: для подсчета лейкоцитов приготовьте раствор Тюрка 1:20. Перед загрузкой пипетки и установкой камеры Нойбауэра раствор хорошо перемешивают.

Бывают случаи, когда разведения 1:20 недостаточно для подсчета. Например, у пациентов, страдающих некоторыми видами хронических лейкозов. В этих случаях следует делать более высокие разведения, например 1: 100.

Если, с другой стороны, количество очень низкое, как при тяжелой лейкопении, можно сделать меньшие разведения для концентрирования образца. Пример: вы можете сделать разведение 1:10.

Внесенные изменения влияют на расчеты.

Монтаж камеры Нойбауэра

Камеру Нойбауэра собирают путем размещения гематометрического предметного стекла в центральной области. Оба должны быть очень чистыми и сухими. Для размещения ламели ее берут за края и аккуратно опускают на камеру.

Его заполняют, помещая кончик автоматической пипетки или пипетки Thoma под углом 35 ° к краю зоны загрузки. Жидкость выходит плавно, а зона загрузки заполняется капиллярно. Это делается с обеих сторон, чтобы загрузить два перекрестия.

Прицельные сетки не должны быть перегружены и в них не должно быть жидкости. Нагрузка должна быть точной. Важно, чтобы начинка была однородной, то есть пузырьков не было.

После того, как камера собрана, ее оставляют на 2 минуты, чтобы клетки выпали на дно, а их визуализация и подсчет были легче.

После времени отдыха его устанавливают на предметный столик светового микроскопа для наблюдения. Сначала он фокусируется на 10-кратном увеличении, а при необходимости - на 40-кратном.

Для улучшения визуализации уменьшается прохождение света от микроскопа. Для этого конденсатор опускается, а диафрагма немного закрывается.

Counting

Для подсчета лейкоцитов или лейкоцитов необходимо подсчитать всю поверхность четырех средних угловых квадратов и центрального квадрата каждого ретикулума.

Подсчет начинается в квадрате в левом верхнем углу. Вы начинаете с первого квадрата первого ряда, то есть слева направо, пока не дойдете до противоположного конца.

Там вы спускаетесь и смотрите назад справа налево, пока не дойдете до другого конца, и так далее, ячейки в каждой сетке подсчитываются зигзагообразно. Подсчитываются 16 сеток каждого среднего квадрата.

Чтобы избежать двойного подсчета ячейки, существуют правила для ячеек, расположенных на границах каждой сетки. Ячейки в левой и верхней строках подсчитываются, а ячейки в правой и нижней строках игнорируются.

Должен быть доступен ручной счетчик ячеек, чтобы оператор нажимал кнопку устройства столько раз, сколько наблюдаемых ячеек. С помощью счетчика оператор может считать, не отрываясь от микроскопического поля. В конце подсчета вы увидите общее количество подсчитанных ячеек.

вычисления

Для расчетов можно поступить несколькими способами. Можно подсчитать одну сетку или обе, и оба будут усреднены. В этих двух ситуациях подсчитанные клетки необходимо умножить на коэффициент, который в данном случае будет равен 40. Таким образом, ^{получается} общее количество на мм ³ .

Но если две сетки подсчитываются, а среднее значение не берется, его необходимо умножить на другой коэффициент, в данном случае на 20.

-Множитель умножения

Вот как рассчитывается коэффициент умножения.

При расчетах принимаются во внимание различные данные, включая титр разбавления, высоту камеры и подсчитываемую площадь.

разбавление

Используемое стандартное разведение составляет 1:20 для подсчета лейкоцитов.

Высота камеры

Высота между камерой и листом клеток крови составляет 0,1 мм.

Подсчитанная площадь

Если подсчитано 5 квадратов площадью 1 мм ² , это означает, что общая площадь счета составляет 5 мм ² . Эти данные необходимо умножить на высоту камеры, чтобы получить общий подсчитанный объем. То есть 5 мм ² x 0,1 мм = 0,5 мм ³ .

Формулы и расчеты

На основании имеющихся у нас данных сказано:

Если в 0,5 мм ³ - есть --- количество подсчитанных ячеек

В 1 мм ³ --- будет - X кол-во ячеек

X количество ячеек = (количество ячеек подсчитано x 1) / 0,5 мм ³

Но нужно учитывать и разведение. Следовательно, формула выглядит следующим образом:

(количество клеток подсчитано x 1) x 20 / 0,5 мм ³

Наконец, чтобы подвести итог, подсчитанное количество клеток можно умножить на 40. Таким образом, ^{получается} значение лейкоцитов на мм ³ .

При подсчете двух сеток изменяются данные для подсчитываемой площади, которая в данном случае будет 10 квадратов, то есть 10 мм ² . И общий посчитанный объем 1 мм3. Формула будет такой:

(количество клеток подсчитано x 1) x 20/1 мм ³

Следовательно, в этом случае коэффициент умножения будет равен 20.

Ошибки

-Если при загрузке камеры она будет превышена или превышена жидкостью, высота камеры будет изменяться. Это приводит к тому, что количество больше, чем на самом деле. Если вы попытаетесь удалить излишки марлей или ватой, это большая ошибка. Это действие заставит клетки сконцентрироваться, увеличивая количество.

-Если он плохо загружен, счет будет ниже реального.

-Если камеру установить и дать высохнуть, подсчет будет невозможен, потому что это даст неправильные результаты.

-Если разбавленный образец не будет хорошо перемешан перед загрузкой камеры, существует риск ошибки в считывании, поскольку клетки не будут равномерно распределены. Следовательно, концентрация клеток будет ниже или выше, в зависимости от того, отбирается ли образец с поверхности жидкости или со дна пробирки соответственно.

-Присутствие пузырьков уменьшает количество жидкости, которая должна попасть в сетку, препятствуя правильной визуализации и распределению клеток. Все это существенно влияет на результат.

-Во время подсчета не поднимайте глаза от микроскопа, пока каждый большой квадрат не будет заполнен, чтобы не заблудиться.

-Одна из причин ошибки - наклон камеры после установки. По этой причине предметный столик микроскопа необходимо осторожно поднимать.

Рекомендация

Если по какой-либо причине вы обнаружите ненормальное наполнение камеры, рекомендуется разобрать этот препарат, очистить камеру и собрать заново с нуля.

Соблюдайте особую осторожность при чистке камеры, чтобы не поцарапать перекрестие. С другой стороны, имейте в виду, что гематометрический слайд хрупкий и хрупкий. Неправильное обращение может сломать его.

Прежде чем приступить к подсчету, убедитесь, что клетки хорошо распределены. Неравномерное распределение клеток происходит из-за плохого перемешивания или разбавления образца. Если это произойдет, сборку необходимо повторить.

Один из способов узнать, хорошо ли распределены ячейки, - это сравнить количество ячеек в каждом большом квадрате, количество ячеек, подсчитываемых каждым квадратом, не должно сильно отличаться от одного к другому.

-Если количество лейкоцитов превышает 50 000 мм ^3, рекомендуется повторить подсчет, сделав большее разведение.

-Если вы измените разбавление, вы должны пересчитать коэффициент умножения, так как это влияет на формулу.

Ссылки

1. Кардона-Майя В., Бердуго Дж., Кадавид А. Сравнение концентрации сперматозоидов с использованием камеры Маклера и камеры Нойбауэра. Actas Urol Esp 2008; 32 (4): 443-445. Доступно на: scielo.
2. Камера Нойбауэра. (2018, 27 марта). Википедия, свободная энциклопедия. Дата консультации: 04:10, 23 июня 2019 г., сайт es.wikipedia.org
3. Менесес А., Рохас Л., Сифонтес С. Применение альтернативного метода подсчета в камере Нойбауэра для определения концентрации Trichomonas vaginalis. Преподобный Cub Med Trop 2001; 53 (3): 180-8. Доступно на: researchgate.net
4. Гомес-Перес Роальд Э. Анализ спермограммы. Преподобный Венес. Эндокринол. Metab. 2007; 5 (2): 19-20. Доступно на: ve.scielo
5. Практическое руководство по гематологии Школы биоанализа Университета Карабобо. Венесуэла.1998 г.