СЕЛЕНИТОВЫЙ ОТВАР: ОСНОВА, ПРИГОТОВЛЕНИЕ И ПРИМЕНЕНИЕ - БИОЛОГИЯ - 2025

Селенит является селективной культуральной средой жидкости. Он был разработан Лейфсоном для обогащения образцов, в которых предполагается присутствие энтеропатогенных бактерий рода Salmonella.

Эта среда соответствует требованиям Американской ассоциации общественного здравоохранения (APHA) и поэтому принята для исследования на наличие сальмонеллы в образцах кала, мочи, жидкой или твердой пищи, воды, среди прочего.

Селенитовый отвар. Источник: Фотография автора MSc. Мариельса Гиль

Его химический состав способствует восстановлению этих микроорганизмов и, в свою очередь, подавляет рост других. Он в первую очередь токсичен для большинства бактерий, принадлежащих к семейству Enterobacteriaceae. Однако он также позволяет восстанавливать штаммы Shigella и не подавляет рост Pseudomonas и Proteus.

Он состоит из безводного гидроселенита натрия, безводного фосфата натрия, пептонов и лактозы. Также существует вариант, в который добавлен цистин, отсюда и его название - селенитно-цистиновый бульон.

В настоящее время предпочтительным является использование селенитно-цистинового бульона, поскольку достигается более высокий процент выделения сальмонелл, эквивалентный тому, который наблюдается с другими селективными средами для той же цели, такими как бульон тетратионата натрия.

основа

Пептоны, содержащиеся в бульоне, служат питательными веществами для правильного развития микроорганизмов. Штаммы сальмонеллы используют пептоны как источник азота, витаминов и аминокислот.

Лактоза является ферментируемым углеводом, а селенит натрия - ингибирующим веществом, которое останавливает рост грамположительных бактерий и большинства бактерий, присутствующих в кишечной флоре, особенно из семейства Enterobacteriaceae. Фосфат натрия - это буфер, стабилизирующий pH среды.

В случае варианта селенитового бульона, содержащего L-цистин, это дополнительное соединение является восстанавливающим агентом, который сводит к минимуму токсичность селенита, увеличивая выделение сальмонелл.

подготовка

-Селенитовый бульон

Если у вас есть компоненты смеси, вы можете взвесить:

4 г безводного гидроселенита натрия.

10 г безводного фосфата натрия.

5 г пептонов.

4 грамма лактозы.

Растворите соединения в 1 литре стерильной дистиллированной воды. Его можно слегка нагреть до полного растворения.

Некоторые лаборатории подвергают среду воздействию пара в течение 10 минут для ее стерилизации, поскольку использовать автоклав не следует. Если среда стерилизована, ее можно хранить в холодильнике до использования.

Его также можно приготовить нестерильно и разлить по 10–15 мл в стерильные пробирки.

В этом случае его следует оставить для отдыха и немедленно использовать. Поскольку среда нестерильна, ее нельзя хранить в холодильнике для дальнейшего использования.

- Подготовка коммерческой среды

Если коммерческая среда доступна, взвесьте 23 г обезвоженной среды и растворите ее в одном литре стерильной дистиллированной воды. Кратковременно нагрейте до полного растворения. Не автоклавировать. С соблюдением правил асептики разливайте по 10 или 15 мл в стерильные пробирки.

Конечный pH среды должен составлять 7,0 ± 0,2.

Следует отметить, что цвет обезвоженной среды бежевый, а препарат светлый и полупрозрачный янтарный.

Вариант селенитно-цистинового бульона

Он содержит те же соединения, что и селенитовый бульон, но с добавлением 10 мг цистина. В остальном процедура точно такая же, как описано выше.

Приложения

Эта среда специально предназначена для использования в эпидемиологических исследованиях, когда болезнь не находится в стадии обострения, у бессимптомных пациентов или здоровых носителей.

Выделить представителей рода Salmonella обычно сложно, так как они обычно плохо контаминируют образцы. Будучи в небольших количествах, он легко перекрывается ростом других родов бактерий, которые встречаются в большем количестве.

С другой стороны, сырье, из которого производятся обработанные пищевые продукты, часто подвергается воздействию тепла, процессов обезвоживания, использования дезинфицирующих средств, излучения и консервантов, среди прочего.

Поэтому с сальмонеллами, присутствующими в сырье, плохо обращаются, подвергая продукт вышеупомянутым производственным процессам. Аналогичным образом, в случае клинических образцов, таких как фекалии, штаммы могут быть слабыми, если они поступают от пациентов, получавших лечение антибиотиками.

Следовательно, любой образец, в котором предполагается присутствие сальмонелл, должен быть предварительно обогащен бульоном лактозы, а затем обогащен бульоном селенита для оптимизации его выделения в селективных средах, таких как агар SS, агар с ксилозой, дезоксихолат лизина (XLD ), кишечный агар Hektoen (HE) и ярко-зеленый агар, среди других.

Посевная

Для образцов стула возьмите 1 г образца и поместите его в пробирку с 10-15 мл селенитового бульона. Если стул жидкий, возьмите 1 мл и растворите в отваре. В случае ректальных мазков слейте материал тампона в бульон.

В твердых образцах пищи берут 1 г и растворяют в селенитном бульоне.

В жидких продуктах смешайте в равных частях с селенитовым отваром в двойной концентрации.

Для образцов мочи центрифугируйте, слейте супернатант, возьмите весь осадок и суспендируйте его в селенитном бульоне.

Бульоны инкубируют при 37 ° C в течение 24 часов инкубации. Об росте бактерий свидетельствует помутнение. Также может быть включена дополнительная пробирка на образец для инкубации при 42 ° C. Затем из селенитового бульона высевают селективные твердые среды.

контроль качества

Для контроля стерильности селенитный бульон из каждой неинокулированной партии инкубируют при 37 ° C в течение 24 часов. Ожидается, что среда не станет мутной или изменит цвет.

Для контроля правильного функционирования среды можно использовать известные штаммы, такие как:

Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella choleraesuis ATCC 12011, Escherichia coli ATCC 25922 и Proteus mirabilis ATCC 43071.

Ожидаемые результаты:

• Для первых трех штаммов бактерий рост должен быть удовлетворительным.
• Частичное подавление Escherichia coli.
• У протея умеренный рост.

Ограничения

Среда селенитового бульона токсична для кожи человека, поэтому следует избегать прямого контакта.

Ссылки

1. Flores-Abuxapqui J, Puc-Franco M, Heredia-Navarrete M, Vivas-Rosel M, Franco-Monsreal J. Сравнение культуральных сред селенита натрия и тетратионата натрия, инкубированных при 37 ° C и 42 ° C для выделение Salmonella spp из фекалий носителей. Rev Biomed 2003; 14 (4): 215-220
2. Britannia Laboratories. Бульон Селенито. 2015. Доступно на: britanialab.com.
3. Neogen Laboratories. Селенитовый отвар. Доступно на: foodsafety.neogen.com
4. González -Pedraza J, Pereira -Sanandres N, Soto -Varela Z, Hernández -Aguirre E, Villarreal- Camacho J. Микробиологическая изоляция Salmonella spp. и молекулярные инструменты для его обнаружения. Здоровье, Барранкилья, 2014 г .; 30 (1): 73-94. Доступно по адресу: http://www.scielo.org.
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Микробиологический диагноз Бейли и Скотта. 12 изд. Редакция Panamericana SA Аргентина.