КРОВЯНОЙ АГАР: ОБОСНОВАНИЕ, ИСПОЛЬЗОВАНИЕ И ПРИГОТОВЛЕНИЕ - БИОЛОГИЯ - 2025

Кровяной агар является твердой культуральной среды , обогащенный дифференциальной , но неселективный. Он используется для восстановления и роста большого количества разнообразных микроорганизмов из клинических образцов или для субкультур.

Классический кровяной агар следует использовать для посева большинства клинических проб, полученных в лаборатории; за исключением образцов кала, если они не пригодны, если они не подготовлены с некоторыми изменениями.

Пластина с кровяным агаром

Эта питательная среда в основном состоит из обогащенного основного агара и 5% крови. Основа агара может варьироваться в зависимости от потребностей, но в основном она будет состоять из пептонов, аминокислот, витаминов, мясного экстракта, хлорида натрия, агара и других.

Что касается крови, обычно требуется контакт с виварием для получения крови от животных, таких как овца, кролик или лошадь. Однако это не всегда возможно, и иногда используется человеческая кровь.

Среду с кровяным агаром можно приготовить в лаборатории или приобрести готовую в специализированных компаниях. Подготовка этой среды - один из самых деликатных, любая небрежность в ее приготовлении приведет к загрязнению партии.

Вот почему должны быть приняты все возможные меры предосторожности, а в конце должен быть проведен контроль качества путем инкубации при 37 ° C 1 чашки на каждые 100 приготовленных.

основа

Staphylococcus aureus культивировали на кровяном агаре. Натан Ридинг на Flickr Натан Р. в Твиттере, через Wikimedia Commons. Уже упоминалось, что кровяной агар обладает характеристиками обогащенной, дифференциальной и неселективной среды. Основа каждого из этих свойств объясняется ниже.

Кровяной агар является обогащенной средой, поскольку он содержит 5-10% крови на основе агара в качестве основной добавки. Оба соединения содержат много питательных веществ, и это свойство позволяет большинству культивируемых бактерий расти в нем.

Этот рост происходит без ограничений; по этой причине он неизбирательный. Однако, если в эту среду добавляют соединения, которые предотвращают рост одних микроорганизмов и благоприятствуют росту других, она становится селективной. Это тот случай, когда добавляются определенные типы антибиотиков или противогрибковых средств.

Точно так же кровяной агар является дифференциальной средой, поскольку он позволяет нам различать 3 типа бактерий: бета-гемолитические, альфа-гемолитические и гамма-гемолитические.

Бета-гемолитики - это те, которые обладают способностью полностью лизировать или разрушать эритроциты, образуя четкий ореол вокруг колоний, поэтому они производят ß- или ß-гемолиз, и эти микроорганизмы называются ß-гемолитиками.

Примерами ß-гемолитических бактерий являются Streptococcus pyogenes и Streptococcus agalactiae.

Альфа-гемолитики - это те, которые проводят частичный гемолиз, при котором гемоглобин окисляется до метгемоглобина, вызывая зеленоватую окраску вокруг колоний. Это явление известно как α- или α-гемолиз, а бактерии классифицируются как α-гемолитики.

Примерами α-гемолитических бактерий являются Streptococcus pneumoniae и Streptococcus группы viridans.

Наконец, есть так называемые гамма-гемолитические или негемолитические бактерии. Они растут на агаре, не вызывая на нем изменений, эффект, известный как γ-гемолиз, а микроорганизмы являются γ-гемолитическими.

Пример γ-гемолитических бактерий: некоторые штаммы Streptococcus группы D (Streptococcus bovis и Enterococcus faecalis).

Приложения

Культуральная среда с кровяным агаром - одна из наиболее часто используемых в микробиологической лаборатории.

К микроорганизмам, способным расти на среде кровяного агара, относятся: строгие аэробные, факультативные, микроаэрофильные, анаэробные, грамположительные или грамотрицательные бактерии, быстрорастущие или медленно растущие бактерии.

Также растут некоторые требовательные к питанию или привередливые бактерии, а также грибы и дрожжи. Точно так же он полезен для субкультивирования или реактивации штаммов, которые метаболически очень слабы.

Однако выбор группы крови и основного агара будет варьироваться в зависимости от вероятного микроорганизма, который предположительно выздоравливает, и использования чашки (посев или антибиотикограмма).

Выбор группы крови

Кровь может быть ягненка, кролика, лошади или человека.

Наиболее рекомендуется, за некоторыми исключениями, кровь ягненка. Например, чтобы изолировать виды Haemophilus, где рекомендуемая кровь - это кровь лошади или кролика, поскольку кровь ягненка содержит ферменты, ингибирующие фактор V.

Наименее рекомендуется человеческий, однако он используется чаще всего, возможно потому, что его легче всего получить.

Кровь должна быть дефибринирована, получена без каких-либо добавок и от здоровых животных. При использовании крови человека необходимо учитывать несколько факторов:

Если кровь поступает от людей, перенесших бактериальные инфекции, у них будут специфические антитела. В этих условиях может подавляться рост некоторых бактерий.

Если он получен из банка крови, он содержит цитрат, и некоторые бактерии могут не расти в его присутствии. С другой стороны, если кровь поступает от пациентов, принимающих антибиотики, рост чувствительных бактерий может быть подавлен.

А если кровь принадлежит диабетику, избыток глюкозы мешает правильному развитию структуры гемолиза.

Выбор основного типа агара

Базовый агар, используемый для приготовления кровяного агара, может быть очень широким. Среди них: питательный агар, агар для инфузии мозга и сердца, соевый агар с триптиказой, агар Мюллера-Хинтона, агар Тайера-Мартина, агар Колумбия, агар Brucella, агар Campylobacter и т. Д.

Использование кровяного агара в соответствии с базовой средой, используемой для его приготовления

Питательный агар

Эта основа используется меньше всего, поскольку на ней в основном будут расти нетребовательные бактерии, такие как кишечные палочки, Pseudomonas sp, S. aureus, Bacillus sp. Не рекомендуется изолировать стрептококк.

Агар для инфузий мозга и сердца (BHI)

Он является одним из наиболее широко используемых в качестве основы для кровяного агара, поскольку он содержит необходимые питательные вещества для роста большинства бактерий, включая Streptococcus sp и другие требовательные бактерии. Хотя нецелесообразно наблюдать закономерности гемолиза.

Для этой основы обычно используется кровь ягненка.

Также могут быть приготовлены варианты кровяного агара, в которые добавляются другие соединения для выделения определенных микроорганизмов. Например, агар Brain Heart Infusion Agar с добавлением кроличьей крови, цистина и глюкозы можно использовать для выделения Francisella tularensis.

А теллурит цистина полезен для изоляции Corynebacterium diphteriae. Можно использовать кровь человека или ягненка.

При первом бета-гемолизе он будет выглядеть как узкий ореол, а при втором ореол будет намного шире.

Точно так же эта основа вместе с бацитрацином, кукурузным крахмалом, лошадиной кровью и другими обогащающими добавками (IsoVitaleX) используется для выделения рода Haemophilus sp из респираторных образцов.

Кроме того, если добавить комбинацию антибиотиков хлорамфеникол - гентамицин или пенициллин - стрептомицин с лошадиной кровью, это идеально для изоляции требовательных патогенных грибов, даже с более высоким выходом, чем глюкозный агар Сабуро. Это особенно полезно при изоляции Histoplasma capsulatum.

Триптиказо-соевый агар

Эта база наиболее рекомендуется для лучшего наблюдения за картиной гемолиза и для выполнения диагностических тестов, таких как таксоны оптохина и бацитрацин. Это классический кровяной агар, который обычно используется.

На этой основе вы также можете приготовить специальный кровяной агар для Corynebacterium diphteriae с теллуритом цистина и кровью ягненка .

Точно так же комбинация этого агара с кровью ягненка плюс канамицин-ванкомицин идеально подходит для роста анаэробов, особенно Bacteroides sp.

Агар Мюллера-Хинтона

Эта основа с добавлением крови используется для проведения антибиотикограммы требовательных микроорганизмов, таких как Streptococcus sp.

Это также полезно для изоляции таких бактерий, как Legionella pneumophila.

Тайер Мартин Агар

Эта среда идеальна в качестве основы для кровяного агара при подозрении на род Neisseria, особенно Neisseria meningitidis, поскольку N. gonorrhoeae не растет на кровяном агаре.

Он также используется для проверки чувствительности к Neisseria meningitidis.

Колумбийский агар

Эта основа отлично подходит для посева образцов биопсии желудка на Helicobacter pylori.

Среду готовят путем добавления 7% крови ягненка, дефибринированной антибиотиками (ванкомицин, триметоприм, амфотерицин B и цефсулодин), чтобы ограничить рост других типов бактерий, которые могут присутствовать.

Эта же основа с добавлением крови человека или ягненка, налидиксовой кислоты и колистина полезна для выделения Gardnerella vaginalis. Он также идеально подходит для оценки антимикробной чувствительности одного и того же микроорганизма к антибиотикам.

Кроме того, его используют для приготовления кровяного агара для выращивания анаэробов, добавляя аминогликозиды и ванкомицин.

Эта база позволяет правильно наблюдать за схемами гемолиза.

Бруцелл агар

Эта среда, используемая в качестве основы для кровяного агара вместе с добавлением витамина К, идеально подходит для культивирования анаэробных бактерий. В этом случае рекомендуется употребление крови ягненка.

Кампилобактер агар

Агар Campylobacter с добавлением 5% овечьей крови и 5 антибиотиков (цефалотин, амфотерицин B, триметоприм, полимиксин B и ванкомицин) представляет собой среду, используемую для выделения Campylobacter jejuni в образцах стула.

подготовка

В каждом коммерческом доме на обратной стороне контейнера есть инструкция по приготовлению литра питательной среды. Для приготовления желаемого количества могут быть выполнены соответствующие расчеты в зависимости от выбранного основного агара.

Взвесьте и растворите

Основной агар дегидратирован (порошок), поэтому его необходимо растворить в дистиллированной воде, доведенной до pH 7,3.

Количество, указанное выбранным основным агаром, взвешивают и растворяют в соответствующем количестве воды в колбе, затем нагревают на умеренном огне и перемешивают вращательными движениями до тех пор, пока весь порошок не растворится.

Стерилизовать

После растворения стерилизовать в автоклаве при 121 ° C в течение 20 минут.

Совокупность крови

Покидая автоклав, колбе дают остыть до температуры от 40 до 50 ° C; Это температура, которую поддерживает человеческая кожа, и в то же время агар еще не затвердел.

Для этого следует дотронуться до колбы рукой, и, если тепло терпимо, это идеальная температура для добавления соответствующего количества дефибринированной крови (50 мл на каждый литр агара). Осторожно перемешайте до гомогенизации.

Прохождение агрегации крови имеет решающее значение, потому что, если это происходит, когда среда очень горячая, красные кровяные тельца разрушаются, и среда не будет использоваться для наблюдения гемолиза.

Если он будет добавлен слишком холодным, он будет комковаться, и поверхность среды не будет гладкой, чтобы обеспечить надлежащий надрез.

Разлить по чашкам Петри

Подавать в стерильных чашках Петри сразу после гомогенизации крови. В каждую чашку Петри наливают примерно 20 мл. Эта процедура выполняется в вытяжном шкафу с ламинарным потоком или рядом с горелкой.

При подаче кровяного агара в чашки Петри на поверхности чашки не должно оставаться пузырьков воздуха. Если это происходит, пламя горелки Бунзена быстро проходит над пластиной, чтобы устранить их.

Пластинам дают застыть и хранят в перевернутом холодильнике (2-8 ° C) до использования. Перед использованием чашек с кровяным агаром их необходимо закалить (дать им нагреться до комнатной температуры), чтобы их можно было засеять.

Приготовленных пластин хватает примерно на 1 неделю.

Ссылки

1. Байона М. Микробиологические условия культивирования Helicobacter pylori. Rev Col Gastroenterol 2013; 28 (2): 94-99
2. Гарсия П., Паредес Ф., Фернандес дель Баррио М. (1994). Практическая клиническая микробиология. Университет Кадиса, 2-е издание. Служба публикаций УЦА.
3. «Кровяной агар». Википедия, свободная энциклопедия. 10 декабря 2018, 14:55 UTC. 27 декабря 2018 г., 01:49 en.wikipedia.org.
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Микробиологический диагноз Бейли и Скотта. 12 изд. Аргентина. Редакция Panamericana SA
5. CEDIVET Лаборатория ветеринарно-диагностического центра. Гватемала. Доступно на: trensa.com.
6. Конеман Э, Аллен С., Джанда В., Шрекенбергер П., Винн В. (2004). Микробиологическая диагностика. (5-е изд.). Аргентина, редакция Panamericana SA