КАРТОФЕЛЬНЫЙ АГАР С ДЕКСТРОЗОЙ: ОБОСНОВАНИЕ, ПРИГОТОВЛЕНИЕ И ПРИМЕНЕНИЕ - БИОЛОГИЯ - 2025

Картофельный агар с декстрозой является средой, твердое вещество , не - селективная питательные веществ культуры. В нем могут расти бактерии и грибы, но его использование особенно показано для изоляции мицелиальных грибов и дрожжей. Он также известен как среда PDA для английского выражения Potato Dextrose Agar.

Это особенно полезно для изоляции фитопатогенных грибов, то есть грибов, поражающих растения. Для посева образцов из инфицированных овощей можно использовать другие средства, такие как агар Сабуро или мальта-агар, однако для рутинного использования агар с картофельной декстрозой предпочтительнее из-за получения большей споруляции.

Aspergillus niger и Sinemas на картофельном агаре с декстрозой соответственно. Источник: Alextrevelian 006 в английской Википедии / Joselrojas

Он также используется для подсчета грибковых колоний в образцах косметических, фармацевтических продуктов и некоторых молочных продуктов. Кроме того, он подходит для посева образцов соскобов кожи в поисках дерматофитов, которые очень хорошо растут в этой среде и развивают свои характерные пигменты.

Среда с картофельной декстрозой - очень простая и легкая среда для приготовления в лаборатории. Он содержит, как следует из названия, настой картофеля, декстрозы и агар-агара. Кроме того, могут быть добавлены ингибирующие вещества для предотвращения роста бактерий и повышения селективности в отношении видов грибов.

основа

Картофельный агар с декстрозой - это питательная среда, которая обеспечивает питательными элементами, необходимыми для развития мицелиальных грибов и дрожжей.

Комбинация настоя картофеля с глюкозой обеспечивает идеальный источник энергии для удовлетворительного роста грибов. В то время как агар - это тот, кто обеспечивает консистенцию среды.

Сама по себе среда не подавляет рост бактерий, поэтому это неселективная среда. Чтобы сделать его селективным, необходимо добавить ингибирующие вещества, такие как винная кислота или антибиотики.

подготовка

- Домашнее (некоммерческое) приготовление картофельного агара с декстрозой

чашки Петри

Его готовят следующим образом:

Во-первых, картофель очень хорошо промывают, удаляя имеющуюся у него почву. Их нарезают тонкими ломтиками вместе со всем и скорлупой. Взвешивают 200 грамм картофеля и кипятят в литре дистиллированной воды полчаса.

По истечении времени процедите или процедите весь препарат через марлю.

Полученная жидкость дополняется дистиллированной водой до одного литра. К инфузии добавляют 20 г агар-агара и 20 г декстрозы, хорошо перемешивают и автоклавируют при 121 ° C и давлении 15 фунтов в течение 15 минут.

Дать остыть до 50 ° C и подавать в стерильных чашках Петри. Приготовленные тарелки храним в холодильнике.

клинья

Также можно приготовить дольки картофельного агара с декстрозой.

В этом случае перед стерилизацией в автоклаве в пробирки помещают от 12 до 15 мл среды, затем их автоклавируют и при выходе лежат на специальных подставках до застывания. Хранить в холодильнике.

Среда остается при pH 5,6 ± 0,2, однако некоторые лаборатории добавляют 10% винную кислоту для снижения pH до 3,1 ± 0,1, чтобы подавить рост бактерий.

В этом же смысле другие лаборатории предпочитают добавлять антибиотики, чтобы сделать его селективным для культивирования грибов и предотвратить рост бактерий.

-Коммерческое приготовление картофельного агара с декстрозой

Взвешивают 39 г коммерчески доступной обезвоженной среды и растворяют в одном литре дистиллированной воды. Оставьте на 5 минут.

Смесь нагревают при частом помешивании до полного растворения. Затем его стерилизуют в автоклаве при 121 ° C в течение 15 минут.

Могут быть приготовлены тарелки или клинья. Действуйте, как описано выше.

PH остается на уровне 5,6 ± 0,2. Если желателен pH 3,1, перед подачей в чашки следует добавить 14 мл стерильной 20% винной кислоты.

Необработанная среда имеет бежевый цвет, а приготовленная среда светло-янтарного цвета с слегка мутным или опалесцирующим эффектом.

Приложения

Процесс посева образцов растений на картофельный агар с декстрозой

-Для окрашенных листьев

Листья нарезаются кусочками.

В стакан объемом 50 см3 с 50% спиртом поместите кусочки листьев (окрашенные и здоровые), чтобы продезинфицировать поверхность в течение 20–30 секунд. Выбросьте спирт и добавьте 20% гипохлорита натрия на 40-50 секунд, если это тонкие листья, и увеличьте время до 80 секунд, если это кора и поленья.

Удалите гипохлорит натрия, возьмите дезинфицированные кусочки стерильными пинцетами и поместите их на поверхность среды (максимум 10 штук). Установите дату и инкубируйте при 20-30 ° C.

-Для фруктов и клубней

Если плод мясистый, откройте пораженный грибком плод, возьмите стерильным скальпелем кусочки как с пораженных, так и с здоровых частей и поместите их на поверхность агара.

Если фрукт цитрусовый, например лимон или апельсин, его необходимо открыть и посеять семена.

Когда поражена поверхность плода и наблюдаются споры, в идеале следует использовать метод натертой решетки на тарелке; Это состоит в прикосновении к спорам стерилизованным и охлажденным шпателем в форме буквы «L», а затем нанесении зигзагообразного посева на агар 2–3 раза.

-Для зерна

Их дезинфицируют, как описано в листьях, а затем помещают на агар.

-Для веток и стеблей

Соскабливают кору, а затем берут кусочки здоровой и больной части и высевают прямо на агар.

Засеянные планшеты инкубируют в аэробных условиях при 20-30 ° C в течение 72 часов.

Процесс посева образцов кожи, волос или чешуи ногтей на картофельный агар с декстрозой

Образец следует брать с помощью лезвия скальпеля № 11 для стрижки пораженных волос, чешуек кожи или ногтей в поисках дерматофитов. Перед взятием пробы необходимо продезинфицировать участок 70% спиртом.

- Образец кожи

При чешуйчатых поражениях край поражения следует соскоблить, так как грибок там больше всего.

При экссудативных поражениях образец берут сухим или влажным тампоном. Сразу посейте на картофельный агар с декстрозой или агар Сабуро. Избегайте транспортных средств.

Другой метод отбора проб - техника квадратного ковра Мариата и Адана Кампоса. В этом случае пораженное место 5 раз протирают кусочком стерильной ваты для последующего разведения.

Образец можно помещать прямо в питательную среду.

-Пример волос

В зависимости от патологии пораженная часть может быть отрезана или выкорчевана. Поместите образец в питательную среду.

-Пример гвоздя

Определенную часть пораженного ногтя можно поцарапать или порезать. Это будет зависеть от типа травмы.

Перед посевом образец разрезают на кусочки размером 1 мм, чтобы увеличить вероятность контакта гриба с питательной средой.

Процедура идентификации

Колонии, полученные в планшете, выделяют в пробирки, содержащие агар с картофельной декстрозой, для проведения макроскопического исследования колоний (внешний вид, цвет, консистенция, степень развития.

Микроскопическое исследование (наблюдение за структурами и их образованиями) можно проводить с помощью микрокультивирования или прямого наблюдения под микроскопом между слайдом и слайдом.

Подсчет колоний

Эту среду также можно использовать для определения грибковой и дрожжевой нагрузки, присутствующей в образцах растений, пищевых продуктов, косметических средств или лекарств. Для этого используется картофельный агар с декстрозой с добавлением антибиотиков, таких как: (хлорамфеникол, хлортетрациклин или оба).

Налейте 1 мл образца (желательно разбавленного) в стерильную пустую чашку Петри, затем растопите подушку картофельного агара с декстрозой и дайте остыть до 45 ° C. Вылейте в чашку Петри и вращайте до гомогенизации. Дайте ему отдохнуть, пока он не затвердеет.

Инкубируйте в аэробных условиях при 20–25 ° C (плесень) или 30–32 ° C (дрожжи) в течение 5–7 дней или более, в зависимости от типа искомого грибка и типа образца. Две чашки можно использовать для инкубации в обоих диапазонах температур.

Подсчет грибковых колоний в образце пищи. Картофельный агар с декстрозой с добавлением антибиотиков. Источник: фото Pxhere.com / 777267

Поддержание грибковых штаммов

Картофельный агар с декстрозой можно использовать для поддержания жизнеспособности грибковых штаммов в течение нескольких лет.

Для этого грибок выращивают на дольках картофельного агара с декстрозой, а когда грибок вырастает, его покрывают минеральным маслом. Масло следует стерилизовать в автоклаве в течение 45 минут, и оно должно иметь вязкость приблизительно от 300 до 330 единиц по шкале Сейболта. Масло должно быть на 1-2 см выше кончика фаски.

контроль качества

Из каждой приготовленной партии возьмите 1 или 2 планшета и инкубируйте их при 25 ° C в течение 48 часов или при 20 ° C в течение 96 часов. Хороший контроль стерильности - это такой контроль, при котором не наблюдается развития колоний.

Также можно использовать известные или сертифицированные контрольные штаммы, такие как:

Saccharomyces cerevisiae ATCC 9763, Candida albicans ATCC 10231, Aspergillus brasiliensis ATCC 16404, Trichophyton mentagrophytes ATCC 9533. Хороший рост ожидается во всех случаях.

Ссылки

1. Britannia Laboratories. Картофельный глюкозный агар. 2015. Доступно на: britanialab.com.
2. Neogen Laboratories. Картофельный агар с декстрозой. Доступно на: foodsafety.neogen.com
3. Лаборатория Инсумолаб. Картофельный агар с декстрозой. Доступно на: insumolab.cl
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Микробиологический диагноз Бейли и Скотта. 12 изд. Редакция Panamericana SA Аргентина.
5. Касас-Ринкон Г. Общая микология. 1994. 2-е изд., Центральный университет Венесуэлы, Библиотечные издания. Венесуэла Каракас.
6. Асейтуно М. Оценка микробиологического качества теней для век, компактного типа порошка в национальной производственной лаборатории, в соответствии с эталонным методом Pharmacopea Usp 2005. Диссертация на соискание звания химика-фармацевта. Университет Сан-Карлос в Гватемале.
7. Куэтара М. Обработка поверхностных образцов. Ибероамериканский журнал микологии. 2007; стр. 1-12