AGAR MRS: ОСНОВА, ПОДГОТОВКА И ПРИМЕНЕНИЕ - БИОЛОГИЯ - 2024

Агар МРС является селективной твердой культуральной средой , используемой для выделения и подсчета молочно - кислых бактерий, особенно из рода Lactobacillus. Этот агар был создан в 1960 году Ман, Рогозой и Шарпом и носил то же имя, но из-за его сложности часто используется аббревиатура MRS.

Он состоит из протеозопептона, мясного экстракта, дрожжевого экстракта, глюкозы, монолеата сорбитана, дикалия фосфата, ацетата натрия, цитрата аммония, сульфата магния, сульфата марганца и агара.

Ман Рогоза и агар Шарпа (MRS), засеянный Lactobacillus sp. Источник: фотография, предоставленная для этой статьи авторами: Баез Э., Гонсалес Дж., Эрнандес Г., Лопес Э., Мега М. Фотография сделана во время исследования под названием: Оценка молочнокислых бактерий и бифидобактерий с пробиотическим потенциалом в грудном молоке и детском стуле. ,

Эта композиция обеспечивает правильное развитие молочнокислых бактерий из клинических образцов, таких как фекалии, выделения из влагалища, образцы из ротовой полости и грудного молока, а также из молочных и мясных продуктов.

Обычно он не используется в клинических лабораториях, поскольку молочнокислые бактерии редко участвуют в процессах заболевания. Однако в области пищевой микробиологии чаще используют агар MRS.

С другой стороны, эта среда используется некоторыми исследовательскими центрами, целью которых является изучение молочнокислых бактерий.

основа

Агар Ман, Рогоза и Шарпа имеет довольно сложный состав. Разбивая функции каждого из его компонентов, можно объяснить его основу.

Протеозный пептон, мясной экстракт, дрожжевой экстракт и глюкоза - это питательные вещества, которые являются источником углерода, азота, витаминов и минералов, необходимых для роста бактерий. Кроме того, глюкоза - универсальный источник энергии, используемый в большинстве питательных сред.

С другой стороны, чтобы способствовать росту молочнокислых бактерий, необходимо присутствие кофакторов (катионов), необходимых для метаболизма Lactobacillus и родственных бактерий; Эти соединения представляют собой соли натрия, магния и марганца.

Аналогичным образом, монолеат сорбитана или полисорбат 80 являются важным источником жирных кислот, поскольку они абсорбируются в виде питательных веществ.

Кроме того, монолеат сорбитана и цитрат аммония действуют, подавляя развитие сопутствующей флоры, особенно грамотрицательных бактерий, обеспечивая селективный характер этого агара.

Наконец, агар-агар - это тот агар, который придает твердую консистенцию среде.

Существуют и другие варианты агара Ман Рогоза Шарпа; один из них дополнен цистеином (MRSc), очень полезным для изоляции бифидобактерий, среди других микроорганизмов. С другой стороны, есть среда MRS, дополненная неомицином, паромомицином, налидиксовой кислотой и хлоридом лития, специально для селективного подсчета бифидобактерий в молочных продуктах.

подготовка

Взвешивают 68,25 грамма обезвоженной среды и растворяют в одном литре дистиллированной воды. Дать постоять 5 минут. Чтобы полностью раствориться, включите источник тепла, часто помешивая, и кипятите 1-2 минуты. Стерилизовать в автоклаве при 121 ° C в течение 15 минут.

Покидая автоклав, дайте постоять несколько минут и разложите еще горячим по стерильным чашкам Петри.

Дайте застыть и переверните тарелки, закажите на стеллаже для тарелок и поставьте в холодильник до использования. Перед использованием дайте пластинам нагреться до комнатной температуры.

PH среды должен составлять 6,4 ± 0,2. Некоторые коммерческие дома рекомендуют pH от 5,5 до 5,9.

Дегидратированная среда имеет бежевый цвет, а приготовленная - темно-янтарная.

И обезвоженную среду, и подготовленные чашки следует хранить при 2-8 ° C.

Приложения

Чашки с агаром MRS могут быть засеяны на поверхности (шпатель Дригальского). Также можно сеять по глубине. Планшеты следует инкубировать при 37 ° C в условиях микроаэрофильности (4% O ₂ и 5-10% CO ₂ ) в течение 24–72 часов.

Способ посева выбирается в зависимости от преследуемой цели (изоляция или подсчет).

Характеристики колоний

Предполагаемые колонии Lactobacillus становятся беловатыми и имеют слизистую или кремовую окраску на этом агаре. Впоследствии они должны быть идентифицированы.

Выделение молочнокислых бактерий

Для этого используется поверхностный посев. Для посева образцов требуется предварительная процедура.

В случае образцов грудного молока рекомендуется центрифугировать 1 мл образца при 14000 об / мин в течение 10 минут, чтобы удалить жировой слой. 900 мкл отбрасывают, а в оставшихся 100 мкл осадок суспендируют и выливают на поверхность агара MRS, после чего его следует равномерно распределить с помощью шпателя Дригальского.

В случае образцов стула один (1) грамм стула взвешивают и гомогенизируют в 9 мл 0,1% стерильной пептонной воды, что соответствует разведению 1/10. Затем производят серийные разведения, пока не ^{будет получено} окончательное разведение ^10-4 .

Наконец, берут 100 мкл разведений 10 ^-2 , 10 ^-3 и 10 ^-4 , и каждое разведение высевают на агар MRS, равномерно распределяя шпателем Дригальского.

Количество молочнокислых бактерий

В этом случае посев производится по глубине.

Для образцов грудного молока берут 1 мл и помещают в стерильную коническую пластиковую пробирку. Агар MRS добавляют при температуре примерно 40 ° C до конечного объема 25 мл, получая гомогенную смесь. Затем его однородно разливают в стерильные чашки Петри и дают отстояться до полимеризации.

Для образцов стула делаются разведения, как описано ранее. Возьмите 1 мл каждого разведения и поместите его в стерильные конические пластиковые пробирки. Расплавленный агар MRS добавляют до объема 25 мл.

Смесь каждого разведения равномерно разливают в стерильные чашки Петри. Наконец, его оставляют до полимеризации.

Подсчет колоний на агаре Ман Рогоза и Шарпа (MRS). Источник: Фотография предоставлена ​​для этой статьи. Авторы: Баез Э., Гонсалес Дж., Эрнандес Дж., Лопес Э., Мега М. Фотография сделана во время исследования под названием: Оценка молочнокислых бактерий и бифидобактерий с пробиотическим потенциалом в грудном молоке и фекалиях младенцев.

Уровень исследования

С каждым днем ​​все больший интерес вызывает изучение молочнокислых бактерий; Исследователи особенно стремятся узнать о новых штаммах и их потенциале в качестве заквасок для стандартизации в производстве молочных продуктов, среди прочего.

В этом смысле Alvarado et al. (2007) использовали агар MRS для проведения исследования, в котором они выделили, идентифицировали и охарактеризовали молочнокислые бактерии, присутствующие в кустарном венесуэльском копченом сыре в Андах.

В сыре они обнаружили присутствие бактерий родов Lactococcus и Lactobacillus и пришли к выводу, что смеси выделенных штаммов подходят в качестве заквасочных штаммов при производстве сыров из пастеризованного молока.

С другой стороны, Sánchez et al. (2017) использовали агар MRS для исследования присутствия молочнокислых бактерий в пищеварительном тракте поросят, чтобы использовать их в качестве нативных пробиотиков, повышающих продуктивность здоровых поросят.

С помощью этой среды им удалось выделить четыре вида: Lactobacillus johnsonii, Lactobacillus brevis, Enterococcus hirae и Pediococcus pentosaceus.

Аналогичным образом, Báez et al. (2019) использовали агар MRS для оценки молочнокислых бактерий (LAB) и бифидобактерий с пробиотическим потенциалом в грудном молоке и младенческих фекалиях.

Им удалось выделить 11 BAL и 3 Bifidobacteria sp. В грудном молоке, а также 8 BAL и 2 Bifidobacteria sp. в кале. Все они соответствовали определенным параметрам, которые доказывают, что они являются бактериями с пробиотической активностью.

Авторы пришли к выводу, что как грудное молоко, так и фекалии детей, вскармливаемых исключительно грудью, служат естественными источниками пробиотических бактерий.

контроль качества

Чтобы оценить качество агара MRS, используйте контрольные штаммы, такие как:

Lactobacillus fermentum ATCC 9338, Lactobacillus casei ATCC 393, Bifidobacterium bifidum ATCC 11863, Lactobacillus plantarum MKTA 8014, Lactobacillus lactis MKTA 19435, Pediococcus damnosus MKTA 29358, Escherichia cerei и Bifidobacillus cerei.

Ожидаемые результаты - удовлетворительный рост первых 6 бактерий, в то время как E. coli и Bacillus cereus должны быть полностью подавлены.

Ссылки

1. Альварадо С., Чакон З., Отониэль Дж., Герреро Б., Лопес Г. Выделение, идентификация и характеристика молочнокислых бактерий из венесуэльского копченого андского ремесленного сыра. Его использование в качестве закваски. Cient. (Маракайбо) 2007; 17 (3): 301-308. Доступно на: scielo.org.
2. Санчес Х., Фабиан Ф., Очоа Г., Альфаро Выделение молочнокислых бактерий из пищеварительного тракта поросенка. Преподобный investiga. ветеринарный Перу 2017; 28 (3): 730-736. Доступно на: scielo.org.
3. Баес Э., Гонсалес Г., Эрнандес Г., Лопес Э., Мега М. Оценка молочнокислых бактерий и бифидобактерий с пробиотическим потенциалом в грудном молоке и фекалиях младенцев в муниципалитете Асеведо, Миранда, 2017 г. Работа в бакалавриате для получения степени бакалавра в Биоанализ. Университет Карабобо, Венесуэла.
4. Британская лаборатория. MRS агар. 2015. Доступно на: britanialab.com.
5. Авторы Википедии. MRS агар. Википедия, свободная энциклопедия. 10 января 2018 г., 19:44 UTC. Доступно на: wikipedia.org, дата обращения 17 февраля 2019 г.
6. Рой Д. Среда для выделения и подсчета бифидобактерий в молочных продуктах. Int J Food Microbiol, 200128; 69 (3): 167-82.