ЦИТРАТНЫЙ АГАР СИММОНСА: ОБОСНОВАНИЕ, ПРИГОТОВЛЕНИЕ И ИСПОЛЬЗОВАНИЕ - БИОЛОГИЯ

Агар Симмонс цитрата это твердый носитель , используемый в качестве биохимических тестов идентификации микроорганизмов, особенно гр - отрицательные бацилл. Оригинальный носитель был создан Козером в 1923 году.

Цитратная среда Козера состояла из бульона, содержащего фосфат натрия, фосфат аммония, монофосфат калия, сульфат магния и цитрат натрия.

A. Коммерческая среда с дегидратированным цитратным агаром Симмонса. B. Приготовленный цитратный агар Симмонса. Источник: A. Фотография сделана MSc. Мариельса Хил Б. Рото2esdios, из Wikimedia Commons

Как видно, единственным источником углерода в среде является цитрат, а азота - фосфат аммония, исключая белки и углеводы в качестве источника этих элементов, они обычно присутствуют в других средах.

Следовательно, бактерии, инокулированные в этой среде, могут воспроизводиться только в том случае, если они способны поглощать углерод из цитрата. Тест был положительным, если в среде было помутнение, однако он имел недостаток, заключающийся в том, что могло возникнуть неспецифическое помутнение.

Эта проблема была решена Симмонсом путем добавления бромтимолового синего и агара к исходной формуле Козера. Хотя принцип тот же, но трактуется по-разному.

основа

Некоторые бактерии обладают способностью выживать в отсутствие ферментации или производства молочной кислоты, им необходимо получать энергию за счет использования других субстратов. В этом тесте единственным предлагаемым источником углерода является цитрат.

Бактерии, способные выжить в этих условиях, быстро метаболизируют цитрат, альтернативно традиционному пути, используя цикл трикарбоновых кислот или цикл цитратной ферментации.

Катаболизм цитрата бактериями включает ферментативный механизм без вмешательства кофермента А. Этот фермент известен под названием цитриказа (цитратоксалоацетатлиаза) или цитрат-десмолаза. Реакция требует присутствия двухвалентного катиона, который в этом случае поставляется магнием.

В результате реакции образуются оксалоацетат и пируват, которые затем приводят к образованию органических кислот в середине щелочного значения pH, образующегося при использовании источника азота. Эти органические кислоты используются в качестве источника углерода, генерирующего карбонаты и бикарбонаты, дополнительно подщелачивая окружающую среду.

Посевной режим

Цитратную среду Симмонса следует слегка инокулировать в рыбий хвост с помощью прямой петли или иглы и инкубировать в течение 24 часов при 35-37 ° C. По прошествии времени наблюдаются результаты.

Посев производится только на поверхность агара. Не прокалывать.

интерпретация

Если среда сохраняет первоначальный цвет (зеленый) и нет видимого роста, тест отрицательный, но если среда становится синей, это указывает на присутствие щелочных продуктов, что определяется индикатором pH. В этом случае тест положительный.

Цитрат (+) и (-). Источник: MSc. Мариельса Гиль

Это происходит потому, что, если бактерия использует углерод цитрата, она также способна поглощать азот фосфата аммония, с которым она выделяет аммиак, подщелачивая среду.

С другой стороны, если в среде наблюдается рост бактерий, но нет изменения цвета, тест также должен считаться положительным, так как если есть рост, это означает, что бактерии смогли использовать цитрат в качестве источника углерода. хотя на данный момент нет изменений pH (иногда это может занять время).

Если есть какие-либо сомнения в интерпретации окончательного цвета, его можно сравнить с неинокулированной цитратной пробиркой.

подготовка

Взвесьте 24,2 г обезвоженной среды на один литр воды. Перемешайте и оставьте примерно на 5 минут. Завершите растворение среды нагреванием в течение 1-2 минут, часто встряхивая.

Разлить по 4 мл в пробирки и автоклавировать при 121 ° C в течение 15 минут. Покидая автоклав, наклоните его с помощью опоры так, чтобы агар затвердел в форме желобчатого клюва с небольшим блоком или дном и большим скосом.

Конечный pH цитратной среды составляет 6,9 (зеленый цвет). Эта среда очень чувствительна к изменению pH.

При pH 6 или ниже среда становится желтой. Этот цвет не наблюдается в тесте на бактерии.

При pH 7,6 или выше среда становится темно-берлинской.

использование

Цитратный агар Симмонса используется для идентификации определенных микроорганизмов, особенно бацилл, принадлежащих к семейству Enterobacteriaceae, и других бактерий, не ферментирующих глюкозу.

Источник: Конеман Э., Аллен С., Янда В., Шрекенбергер П., Винн В. (2004). Микробиологическая диагностика. 5-е изд. Редакция Panamericana SA Аргентина.

Последние мысли

Цитратная среда Симмонса - очень тонкий тест, поскольку при определенных ошибках могут быть получены ложноположительные результаты.

Необходимо соблюдать следующие меры предосторожности:

прививочный материал

Не следует делать очень густой или насыщенный бактериальный посевной материал, поскольку он может вызвать появление медно-желтого цвета в месте посева, не затрагивая остальную среду, но это может привести к предположению, что есть рост. Это не означает положительность теста.

Кроме того, толстый посевной материал может дать ложноположительный результат, поскольку органические соединения, образовавшиеся в клеточных стенках умирающих бактерий, могут выделять достаточно углерода и азота, чтобы повернуть индикатор pH.

Поэтому в идеале сеять с помощью иглы вместо платиновой ручки, чтобы не брать лишний материал.

Посевная

С другой стороны, когда засевается батарея биохимических тестов для идентификации рассматриваемого микроорганизма, важно, чтобы цитратный тест был засеян первым, чтобы избежать переноса белков или углеводов из другой среды.

В этом случае возможно получение ложноположительного результата, поскольку любое из этих веществ, которые были введены по ошибке, будет метаболизироваться и вызовет изменение pH.

Другой способ избежать уноса веществ - хорошо прожечь петлю и взять новый посевной материал между тестами.

Также необходимо соблюдать осторожность при прикосновении к колонии для проведения посева, поскольку следует избегать перетаскивания части агара из культуры, из которой происходят бактерии, в связи с вышеизложенным.

В этом смысле Матсен, Шерис и Брэнсон рекомендуют разводить посевной материал в физиологическом растворе перед инокуляцией цитратного теста, чтобы избежать переноса других источников углерода.

Интенсивность цвета

Следует учитывать, что интенсивность окраски при положительном результате теста может варьироваться в зависимости от коммерческого дома.

Кроме того, есть микроорганизмы, которые дают положительный результат через 24 часа, но есть и другие штаммы, которым требуется 48 часов или более для изменения pH.

Ссылки

Мак Фаддин Дж. (2003). Биохимические тесты для идентификации бактерий, имеющих клиническое значение. 3-е изд. Редакция Panamericana. Буэнос айрес. Аргентина.
Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Микробиологический диагноз Бейли и Скотта. 12 изд. Редакция Panamericana SA Аргентина.
Конеман Э, Аллен С., Джанда В., Шрекенбергер П., Винн В. (2004). Микробиологическая диагностика. 5-е изд. Редакция Panamericana SA Аргентина.
BD Laboratories. BBL Simmons Citrate Agar Slants. 2015. Доступно на: bd.com
Britannia Laboratories. Цитратный агар Симмонса. 2015. Доступно на: britanialab.com.
Valtek Diagnostic Laboratories. Цитратный агар Симмонса. 2016. Доступно на: andinamedica.com.

ЦИТРАТНЫЙ АГАР СИММОНСА: ОБОСНОВАНИЕ, ПРИГОТОВЛЕНИЕ И ИСПОЛЬЗОВАНИЕ - БИОЛОГИЯ - 2025