БХИ АГАР: ОСНОВА, ПОДГОТОВКА И ПРИМЕНЕНИЕ - БИОЛОГИЯ - 2025

Агар BHI или Brain Heart Infusion агара среды является питательной твердой культурой. По-испански мы называем его агаром для инфузии мозга и сердца. Это неселективная питательная среда, что означает, что могут развиваться все типы грамположительных и грамотрицательных бактерий, а также некоторые дрожжевые и нитчатые грибы.

Он состоит из настоя мозга и сердца теленка, пептического гидролизата из тканей животных, панкреатического гидролизата казеина, хлорида натрия, глюкозы, динатрийфосфата и агара.

Таблички BHI. Источник: Фотография автора MSc. Мариельса Гил.

Следует отметить, что агар BHI - одна из наиболее часто используемых питательных сред в бактериологических лабораториях. Его можно использовать без добавок в качестве первичной культуры, пересева колоний, полученных на других селективных средах, или для поддержания штаммов в лаборатории.

С другой стороны, это идеальная среда для использования в качестве основы при приготовлении обогащенных сред, таких как кровяной агар и шоколадный агар. Оба идеально подходят для изоляции требовательных микроорганизмов с точки зрения питания. Однако следует отметить, что, поскольку он содержит глюкозу, он не подходит для наблюдения за схемами гемолиза.

Аналогичным образом, агар BHI может быть использован для приготовления специальных сред для изоляции трудноразвиваемых патогенных микроорганизмов в обычных средах, среди которых: Haemophilus sp, Francisella tularensis, Corynebacterium diphtheriae и Histoplasma capsulatum.

С добавкой антибиотика агар BHI становится селективной средой для изоляции грибов.

основа

Это питательная питательная среда для выделения умеренно требовательных микроорганизмов, и ее обогащение может быть увеличено за счет добавления крови и других пищевых добавок.

Это неселективная питательная среда, поэтому она позволяет расти большинству грамположительных и грамотрицательных бактерий, а также некоторым грибам. Однако его можно сделать избирательным, добавив антибиотики.

Среда содержит настой мозга и сердца теленка, пептический гидролизат тканей животных и панкреатический гидролизат казеина; Все эти соединения действуют как источники витаминов, аминокислот, азота и углерода.

Глюкоза - это углевод, который дает энергию микроорганизмам после того, как они его ферментируют. Между тем, хлорид натрия и динатрийфосфат поддерживают осмотический баланс и обеспечивают pH, близкий к нейтральному. Наконец, агар дает среднюю твердую консистенцию.

подготовка

Взвесить 52 грамма обезвоженной среды и растворить в одном литре дистиллированной воды. Доведите смесь до источника тепла до кипения, часто помешивая в процессе растворения.

Чашки с агаром BHI или клинья можно приготовить без добавок.

клинья

Для приготовления клиньев подайте препарат до тех пор, пока половина каждой пробирки не будет заполнена, накройте и стерилизуйте в автоклаве при 121 ° С в течение 15 минут, при выходе уложите на основу, пока они не затвердеют. Позже храните в холодильнике до использования.

BHI клинья для бактериотек. Источник: Фотография автора MSc. Мариельса Гил.

Тарелки

Растворенную смесь автоклавируют при 121 ° C в течение 15 минут, оставляя охлаждаться до 50 ° C, и 20 мл среды подают в стерильные чашки Петри. Им дают застыть, переворачивают и хранят в холодильнике до использования. Перед посевом дайте пластинам нагреться до комнатной температуры.

PH среды должен оставаться на уровне 7,4 ± 0,2.

Сырая среда имеет бежевый цвет, а приготовленная среда - светло-янтарный цвет.

Приготовление кровяного агара

После стерилизации среды охладите до температуры примерно 45-50 ° C, затем добавьте кровь (50 мл), осторожно перемешайте до гомогенизации и в асептических условиях подайте по 20 мл в каждую чашку Петри. Если на пластине образуются пузырьки, пламя зажигалки следует быстро пропустить через пузырьки, чтобы устранить их.

Точно так же можно приготовить специальные среды, добавив соответствующие добавки, когда смесь достигнет температуры от 45 до 50 ° C.

Среда остается вишнево-красной.

Приложения

Используйте без добавок

Агар BHI без добавок полезен в качестве первичной культуры и для посева чистых штаммов микроорганизмов с низкой или средней требовательностью к их последующей идентификации.

Поскольку это среда светлого цвета, она идеально подходит для наблюдения за пигментами, и, поскольку она не содержит мешающих веществ, на ней можно проводить некоторые биохимические тесты, такие как оксидаза и каталаза, или проводить другие биохимические тесты из колоний из этого агар.

Точно так же клинья агара BHI широко используются для поддержания штаммов в течение определенного времени в лаборатории (бактериотека).

Планшеты или клинья, засеянные по поверхности штаммами бактерий, инкубируют при 37 ° C в течение 24-48 часов. Между тем, у грибов температура и время инкубации будут зависеть от типа разыскиваемого гриба.

В качестве базового агара для приготовления других сред

С помощью этой основы можно приготовить обогащенную и селективную среду.

обогащенный

Его основная функция - служить основой для приготовления кровяного агара для повседневного использования в микробиологических лабораториях. В частности, база BHI способствует изоляции Streptococcus sp. Однако у него есть недостаток, заключающийся в том, что он не подходит для наблюдения за паттернами гемолиза, поскольку он содержит глюкозу.

Он также используется при приготовлении агара с кроличьей или лошадиной кровью для выделения Haemophilus sp. Для достижения наилучших результатов можно добавить обогащающую добавку (IsoVitaleX).

Если образцы поступают из дыхательных путей, в агар можно добавить бацитрацин для подавления сопутствующей флоры и повышения вероятности восстановления штаммов Haemophilus sp.

В качестве альтернативы можно приготовить кровяной агар (бараний или человеческий) с теллуритом цистина для выделения Corynebacterium diphtheriae. Аналогичным образом, полезно приготовить агар с кроличьей кровью с добавлением цистина и глюкозы для выделения Francisella tularensis.

Засев чашек с кровяным агаром производится путем истощения, и они инкубируются при 35-37 ° C в течение 24-48 часов при микроаэрофильности (5-10% CO ₂ ).

выборочный

Эта среда с добавлением антибиотиков может заменить агар Сабуро для выделения грибов.

Комбинация агара BHI с хлорамфениколом, гентамицином или пенициллином, стрептомицином и лошадиной кровью идеально подходит для выделения Histoplasma capsulatum.

В зависимости от выделяемого микроорганизма рекомендуется инкубация при 35-37 ° C или при комнатной температуре в условиях аэробиоза. Иногда инкубация необходима в обоих температурных диапазонах, используя для этого 2 чашки.

Некоторые грибы, такие как Trichophyton mentagrophytes, необходимо инкубировать при комнатной температуре до 7 дней.

контроль качества

Из каждой приготовленной партии рекомендуется инкубировать 1 планшет или клин при 37 ° C в течение 24 часов и убедиться в отсутствии роста; Это особенно важно при приготовлении кровяного агара, поскольку это легко контаминируемая среда.

С другой стороны, качество среды можно оценить путем инокуляции известных или сертифицированных стандартных штаммов и наблюдения за их развитием.

В этом смысле для оценки агара BHI без добавок можно использовать штаммы Escherichia coli ATCC 25922, Staphylococcus aureus ATCC 25923 или Candida albicans ATCC 10231. Их инкубируют при 37 ° C в условиях аэробиоза в течение 24-48 часов. Во всех случаях ожидается удовлетворительный рост.

Штаммы Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 или Trichophyton mentagrophytes ATCC 9533 могут быть засеяны для оценки чашек с кровяным агаром.

Бактериальные штаммы инкубируют при 37 ° C в условиях микроаэрофильности в течение 24 часов, в то время как гриб инкубируют при комнатной температуре во влажной камере до 7 дней. Во всех случаях ожидается удовлетворительный рост.

Ссылки

1. Britannia Laboratories. Агар для инфузии сердца мозга. 2015. Доступно на: britanialab.com.
2. BD Laboratories. Агар Brain Heart Infusion (BHI). 2013. Доступно на: bd.com.
3. Laboratorios Difco Francisco Soria Melguizo, SA Агар для инфузии сердца и мозга. 2009.
4. Лаборатория Neogen. Агар для инфузии сердца мозга. Доступно на: foodsafety.neogen.com
5. Гил М. Кровяной агар: основа, применение и приготовление. 2018. Доступно на: lifeder.com.
6. Авторы Википедии. Мозговое сердечное вливание. Википедия, свободная энциклопедия. 19 сентября 2018 г., 03:58 UTC. Доступно на: wikipedia.org. Доступ 2 марта 2019 г.
7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Микробиологический диагноз Бейли и Скотта. 12 изд. Редакция Panamericana SA Аргентина.