АГАР БЭЙРДА ПАРКЕРА: ОСНОВА, ПОДГОТОВКА И ПРИМЕНЕНИЕ - БИОЛОГИЯ - 2025

Агар Бэрда Паркер представляет собой твердую среду селективной и дифференциальной культуры. Он был создан в 1962 году для обнаружения и подсчета коагулазоположительных стафилококков (Staphylococcus aureus).

Он состоит из панкреатического гидролизата казеина, мясного экстракта, дрожжевого экстракта, хлорида лития, глицина, пирувата натрия, теллурита калия, агара и эмульсии яичного желтка.

Типичные колонии золотистого стафилококка на агаре Бэрда Паркера. Источник: Дейзи Джон

Агар Бэрда Паркера основан на способности S. aureus восстанавливать теллурит и вырабатывать лецитиназу. Оба свойства создают колонию со специфическими характеристиками для этого вида. Следовательно, он очень эффективен при обнаружении этого микроорганизма.

Типичные колонии S. aureus имеют черный или темно-серый цвет с бесцветной каймой и окружающим их светлым ореолом, что отличает их от других микроорганизмов. Этот патоген можно найти в клинических образцах, воде, косметике, а также в сырой или приготовленной пище.

Его диагностика или обнаружение имеют первостепенное значение из-за разнообразия вызываемых им патологий, таких как пищевое отравление, синдром ожога кожи, синдром токсического шока, абсцессы, менингит, сепсис, эндокардит и другие.

основа

Питательная сила

Панкреатический гидролизат казеина, мясной экстракт и дрожжевой экстракт являются источниками питательных веществ, витаминов и минералов, необходимых для общего развития микробов, в то время как пируват и глицин являются соединениями, которые способствуют специфическому росту Staphylococcus aureus.

выборочный

Агар Байрда Паркера селективен, поскольку содержит вещества, подавляющие рост сопутствующей флоры, одновременно способствуя развитию S. aureus. Ингибирующие соединения - хлорид лития и теллурит калия.

дифференцированный

Эта среда позволяет дифференцировать S. aureus от остальных коагулазонегативных стафилококков. S. aureus обладает способностью восстанавливать теллурит до свободного металлического черного теллура, образуя черные или темно-серые колонии.

Точно так же яичный желток обеспечивает субстрат для демонстрации присутствия фермента лецитиназы и липазы. S. aureus является лецитиназоположительным, поэтому вокруг колонии будет наблюдаться четкий ореол, указывающий на гидролиз лецитина.

В этом смысле появление на этом агаре глянцевых черных или темно-серых колоний со светлым ореолом вокруг них указывает на присутствие S. aureus.

Если образуется зона преципитации, это свидетельствует об активности липазы. Некоторые штаммы S. aureus являются липазоположительными, а другие - отрицательными.

В случае, если S. aureus является липазоположительным, вокруг черной или темно-серой колонии будет наблюдаться непрозрачная область, а затем светлый ореол из-за действия лецитиназы.

Колонии бактерий, отличных от S. aureus, способных расти на этой среде, образуют бесцветные или коричневые колонии без окружающего ореола.

Также можно увидеть атипичные черные колонии с бесцветной каймой или без нее, но без светлого ореола. Эти колонии не следует учитывать, они не соответствуют S. aureus.

подготовка

Эмульсия яичного желтка

Возьмите свежее куриное яйцо, хорошо вымойте его и поместите в 70% -ный спирт на 2–3 часа. Затем яйцо вскрывают в асептических условиях и белок осторожно отделяют от желтка. Затем берут 50 мл желтка и смешивают с 50 мл стерильного физиологического раствора.

Теллурит калия 1% мас. / Об.

Некоторые коммерческие предприятия продают 1% теллурит калия, готовый к использованию. Его добавляют в среду до ее застывания.

Для приготовления этого раствора в лаборатории отвешивают 1,0 г теллурита калия и растворяют в одной части воды. Впоследствии количество воды доводят до достижения 100 мл. Раствор необходимо стерилизовать методом фильтрации.

Приготовление питательной среды

Взвешивают 60 г обезвоженной среды и растворяют в 940 мл дистиллированной воды. Оставьте смесь на 5-10 минут.

Поднимите тепло, часто помешивая среду, чтобы улучшить процесс растворения. Довести до кипения в течение минуты. Стерилизовать в автоклаве при 121 ° C в течение 15 минут.

Дать постоять до температуры 45 ° C и добавить 50 мл эмульсии яичного желтка и 10 мл 1% теллурита. Хорошо перемешать и разлить по 15-20 мл в стерильные чашки Петри.

Дать застыть, заказать в перевернутом виде и хранить в холодильнике до использования.

Конечный pH приготовленной среды должен составлять 6,8 ± 0,2.

Перед посевом образца подождите, пока пластина не достигнет комнатной температуры. Засейте пластины штриховкой или поверхностным посевом шпателем Дригальского.

Цвет дегидратированной среды - светло-коричневый, цвет приготовленной среды - светло-янтарный.

использование

Клинические образцы

Клинические образцы засеваются напрямую, выходя часть материала на одном конце пластины, и оттуда он покрывается полосами от истощения. Инкубируйте от 24 до 48 часов при 35-37 ° C.

Образцы еды

Взвешивают 10 г образца пищи и гомогенизируют в 90 мл 0,1% -ной пептонной воды, из которых при необходимости готовят разведения. Засейте чашки в трех экземплярах по 0,3 мл приготовленных растворов и высейте семена на поверхности шпателем Дригальского. Инкубируйте от 24 до 48 часов при 35-37 ° C.

Эта методика позволяет подсчитывать типичные полученные колонии и идеально подходит, когда предполагается наличие S. aureus выше 10 КОЕ на г / мл образца.

Если предполагается, что количество S. aureus невелико или имеется много сопутствующей флоры, предлагается обогатить образец триптиказо-соевым бульоном с 10% NaCl и 1% пируватом натрия. Это будет способствовать росту S. aureus и подавлять развитие сопутствующей флоры. Мутные пробирки засевают на агар Бэрд-Паркера.

Образцы воды

В стерилизованной системе вакуумной фильтрации фильтруют 100 мл исследуемой воды, а затем микропористую мембрану размером 0,4 микрона удаляют стерильными пинцетами и помещают на планшет Baird Parker. Инкубируйте от 24 до 48 часов при 35-37 ° C. Этот метод позволяет подсчитывать типичные колонии S. aureus.

контроль качества

Известные штаммы, такие как Staphylococcus aureus ATCC 25923, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Escherichia coli ATCC 25922 или Proteus mirabilis ATCC 43071, могут быть использованы для оценки качества агара Байрда Паркера.

В случае штаммов S. aureus ATCC известно, что они уменьшают теллурит, и они являются липазой и лецитиназ-положительными. Следовательно, должно быть удовлетворительное развитие и рост выпуклых колоний с черным центром и бесцветной каймой, с непрозрачным ореолом и светлым крайним ореолом.

Со своей стороны, ожидается, что S. epidermidis будет плохо развиваться на этой среде, с колониями от коричневато-серого до черного цвета без светлого ореола.

Ожидается, что для E. coli и P. mirabilis он будет полностью или частично подавлен. В случае роста коричневые колонии будут развиваться без непрозрачной области или светлого ореола.

рекомендации

-Среда не должна нагреваться после добавления теллурита и яичного желтка.

-Приготовление эмульсии яичного желтка и ее добавление в середину очень уязвимо для загрязнения. Необходимо соблюдать крайнюю осторожность.

-Если есть типичные колонии S. aureus, это должно быть подтверждено проведением теста на коагулазу на указанном штамме.

-Если есть сомнительные результаты с коагулазой, необходимо провести другие подтверждающие тесты.

- Будьте осторожны, чтобы не спутать присутствие типичных колоний S. aureus с атипичными черными колониями.

Ссылки

1. Авторы Википедии. Агар Бэрда-Паркера. Википедия, свободная энциклопедия. 15 марта 2017 г., 19:36 UTC. Доступно по адресу: wikipedia.org/, дата обращения 18 февраля 2019 г.
2. BD Laboratories. Бэрд Паркер Агар. 2006. Доступно на: bd.com
3. Britannia Laboratories. Основа агара Бэрда Паркера. 2015. Доступно на: britanialab.com.
4. Лаборатории Франсиско Сориа Мельгисо. 2009. Бэрд Паркер Агар. Доступно на: http://f-soria.es/Inform
5. Britannia Laboratories. Теллурит калия. 2015. Доступно на: britanialab.com.
6. Аларкон-Лавин М., Оярсо К., Эскудеро С., Серда-Леал Ф, Валенсуэла Ф. Носительство энтеротоксигенного Staphylococcus aureus типа A в мазках из носоглотки у лиц, принимающих пищу. Rev Med Chile 2017; 145: 1559-1564
7. Венесуэльский стандартный ковен 1292-89. (1989). Продукты. Выделение и подсчет Staphylococcus aureus. Доступно на: sencamer.gob.ve