ИММЕРСИОННОЕ МАСЛО: СОСТАВ, ХАРАКТЕРИСТИКИ, ПРИМЕНЕНИЕ - БИОЛОГИЯ - 2024

Погружение масло представляет собой вязкую прозрачную жидкость , имеющую высокий показатель преломления. По этой причине он широко используется в микроскопических наблюдениях, поскольку он обеспечивает свойство концентрировать свет, когда он проходит через объектив 100X микроскопа, увеличивая его разрешающую способность.

Это происходит потому, что между объективом и мазком образуется вязкая пленка, предотвращающая рассеяние световых лучей, когда они достигают воздуха, таким образом концентрируя световые лучи в направлении образца.

Капельница с масляной иммерсией и микроскоп, сфокусированный 100-кратным объективом с масляной иммерсией. Источник: Pixabay.com

Иммерсионное масло используется только с объективом 100X. Вот почему объектив 100X также называют иммерсионным. Остальные известны как сухие цели. Этот объектив нельзя использовать без иммерсионного масла, так как без него визуализация была бы неудовлетворительной.

Основная функция иммерсионного масла - обеспечивать более четкие, резкие и четкие изображения, позволяя наблюдать детали, которые с другими объективами были бы невозможны.

Первым маслом, использованным для этой цели, было анисовое масло, которое использовалось вместе с первой иммерсионной линзой, созданной Джованни Баттиста Амичи. Это только предотвратило хроматическую аберрацию, но не увеличило числовую апертуру линзовой системы.

Тогда использовали кедровое масло, но у него было много недостатков, вынудивших его не использовать. Среди них была высокая кислотность, которая в краткосрочной перспективе нанесла ущерб целям.

Впоследствии другие вещества, такие как вода и глицерин, использовались до тех пор, пока не были созданы синтетические иммерсионные масла, которые постепенно очищались, пока не достигли нынешнего иммерсионного масла, которое представляет собой сложное соединение органических веществ.

Состав иммерсионного масла

Иммерсионное масло состоит из смеси органических соединений, таких как терфенил, гидрогенизированный терфенил, природные углеводороды и полибутены.

Характеристики иммерсионного масла

Иммерсионное масло представляет собой светло-желтую жидкость, слегка вязкую на вид, с характерным запахом и плотностью от 0,92 до 0,99 г / см ³ .

Иммерсионное масло не растворяется в воде и имеет температуру кипения 340 ° C. Показатель преломления a (n 20 ° C / D): находится в пределах 1,482 - 1,516. Между тем, индекс вспышки составляет 110 ° C, а вязкость колеблется от 100 до 120 мПа · с.

Этот продукт необходимо утилизировать надлежащим образом, так как он экотоксичен. Другими словами, это вредно для окружающей среды, в основном поражая водных животных. С другой стороны, это раздражает кожу и слизистые оболочки. При проглатывании он нефротоксичен и кардиотоксичен.

Иммерсионное масло стабильно при температуре от 15 до 25 ° C - температуре, при которой оно должно храниться.

Основы иммерсионного масла

При использовании линз с большим увеличением следует увеличить интенсивность света. Однако многие световые лучи теряются, потому что они рассеиваются при достижении воздуха (пространство между покровным стеклом и линзой), и даже некоторые лучи полностью отражаются.

Иммерсионное масло имеет показатель преломления, подобный стеклу. Поэтому, когда масло входит в контакт между линзой 100X и покровным стеклом, световые лучи концентрируются.

Сконцентрированные лучи проходят через образец и повышают резкость изображения, то есть увеличивают числовую апертуру объектива и корректируют хроматические и сферические аберрации.

Использование или приложения

Использование иммерсионного масла особенно необходимо, когда необходимо наблюдать изображение в более широком смысле, используя объектив с максимальным увеличением (объектив 100X), чтобы увидеть детали, важные для постановки диагноза.

Поэтому он широко используется в микроскопических исследованиях в различных областях, таких как: гистология, цитология, гематология и бактериология. Например, это полезно для изучения характеристик клеток и тканей пациента.

Он также используется для анализа мазков крови, где мы хотим детализировать характеристики гемопаразитов внутри и вне эритроцитов, а также в препаратах Грама, чтобы определить морфотинториальные характеристики микроорганизмов.

Обычно он используется в фиксированных препаратах, но не рекомендуется в свежих препаратах. Это связано с тем, что поверхностное натяжение масла заставляет покровное стекло перемещаться, вызывая смещение образца во время наблюдения и препятствуя анализу.

С другой стороны, иммерсионное масло полезно не только в обычной световой микроскопии: оно также используется в флуоресцентных микроскопах полного внутреннего отражения (TIRFM) и в конфокальных флуоресцентных приложениях.

Шаги по наблюдению за препаратом с иммерсионным маслом

Чтобы просмотреть предметное стекло под микроскопом, его сначала следует сфокусировать с помощью объектива с наименьшим увеличением, обычно 10X, с низкой интенсивностью света.

Затем он попадает в объектив 40X, и световой путь немного увеличивается. Некоторые анализы могут быть выполнены при таком увеличении, но требуется 100-кратное увеличение, чтобы увидеть структурные детали.

Перед тем, как перейти к объективу 100X, капля иммерсионного масла помещается на покровное стекло именно там, где вы хотите наблюдать, а затем перемещают турель микроскопа, чтобы разместить объектив 100x в препарате.

Интенсивность света регулируется (увеличивается) (перемещением конденсатора и открытием диафрагмы). Затем с помощью нескольких небольших движений микрометрического винта (вперед или назад) он должен идеально сфокусироваться, если в микроскопе используются парафокальные объективы.

Если вы попытаетесь сфокусировать препарирование непосредственно с помощью иммерсионного объектива, у вас могут возникнуть проблемы с поиском фокусировки. Это не невозможное действие, но сложность значительно возрастает.

уход

Чтобы использовать иммерсионное масло, необходимо учитывать определенные условия.

Когда был сделан цветной препарат, такой как мазок, окрашенный Гимза или Грамом, дождитесь полного высыхания мазка, прежде чем помещать масляную иммерсию. В противном случае масло вместе с водой сформирует мицеллы, которые не позволят увидеть препарат.

С другой стороны, после наблюдения за партией препаратов, то есть в конце рабочего дня, объектив 100X следует тщательно очистить, используя бумагу для линз с этанолом. Если оставить линзу грязной, на ней высохнет масло, и тогда его будет очень трудно удалить, что повредит поле зрения.

Точно так же необходимо учитывать, что масло легко воспламеняется и его следует хранить вдали от источников тепла (зажигалок). Важно избегать нагрева выше 65 ° C.

Наконец, масло - токсичный продукт. Поэтому следует избегать прямого контакта с кожей и слизистыми оболочками, где он может вызвать легкое раздражение. Во избежание несчастных случаев при обращении с ним рекомендуется использовать перчатки и защитные очки.

В случае контакта с маслом следует промыть место большим количеством воды. Если масло попало в глаза, его следует промыть таким же образом, не закрывая глаза. В случае случайного проглатывания важно проглотить теплую воду и вызвать рвоту, а также обратиться к ближайшему врачу.

Ссылки

1. «Флуоресцентный микроскоп полного внутреннего отражения». Википедия, свободная энциклопедия. 30 декабря 2018 г., 22:46 UTC. 14 мая 2019, 01:54
2. IVD. Микроскопия Масляная иммерсия. Доступно по адресу: Пользователи / Команда / Загрузки.
3. Экологическая биология и микробиология. Работа оптического микроскопа. Доступно по адресу: eumed.net/libros.
4. Санчес Лера Рита Мария, Олива Гарсия Нинфа Роса. История микроскопа и его влияние на микробиологию. Rev Hum Med, 2015; 15 (2): 355-372. Доступно на: scielo.
5. Герреро Дж. Практика № 1: Основы и использование обычного составного оптического микроскопа. Universitat d´Alacant Доступно на: rua.ua.es/dspace
6. Шарлау - паспорт безопасности материала. Иммерсионное масло для микроскопии. 2001. Доступно по адресу: insumos-labcentral.