ПЕПТОННАЯ ВОДА: ОБОСНОВАНИЕ, ПРИГОТОВЛЕНИЕ И ПРИМЕНЕНИЕ - БИОЛОГИЯ - 2025

Пептона вода является жидкая среда обогащения, неселективный, главным образом , используют в качестве разбавителя образцов пищевых продуктов или других материалов. Эта среда с химической точки зрения очень проста, она содержит мясной пептон, хлорид натрия и воду.

Он имеет определенную пищевую ценность, позволяющую обогатить пробу. Если есть бактерии, которыми злоупотребляют, эта среда может восстанавливать жизнеспособность. Это особенно полезно для восстановления бактерий, принадлежащих к семейству Enterobacteriaceae.

Пептонная вода в бутылках. Источник: MSc. Мариельса Гиль

В случае выздоровления сальмонелл рекомендуется использовать водный вариант с буферным пептоном; Он служит в качестве среды для предварительного обогащения образца, в этом случае он содержит другие элементы, такие как динатрийфосфат и дикалийфосфат.

Обычно пептонную воду готовят при нейтральном pH, однако существуют другие варианты, когда необходимо, чтобы pH составлял 8,5 ± 0,2 (щелочной), потому что выделяемые бактерии являются алкалифильными, такими как Vibrio cholerae.

Кроме того, эту среду можно использовать в качестве базовой среды для тестов на углеводное брожение.

основа

Пептоны обеспечивают питательные вещества, необходимые для роста бактерий, особенно азот и короткоцепочечные аминокислоты, в то время как хлорид натрия поддерживает осмотический баланс.

Кроме того, среда позволяет диспергировать, гомогенизировать и восстанавливать бактериальные клетки, поврежденные промышленными процессами.

В качестве разбавителя он идеален, эффективно заменяя физиологический раствор (SSF) или фосфатный буферный раствор (PBS).

Рост бактерий очевиден, наблюдая за их помутнением.

подготовка

Домашнее приготовление (не коммерческое)

Отвесить 1 г пептона и 8,5 г хлорида натрия, растворить в 1 л дистиллированной воды. Уровень pH должен быть доведен до 7,0. Для этого можно использовать 1 н. Хлорид натрия.

Приготовление на коммерческой среде

Взвесить 15 г обезвоженной среды и растворить в литре дистиллированной воды. Смесь гомогенизируйте. При необходимости смесь кипятят в течение 1 минуты для полного растворения. При необходимости подавайте во флаконах по 100 мл или в пробирках по 10 мл. Автоклав при 121 ° C в течение 15 минут.

Остудить и использовать или хранить в холодильнике. Конечный pH среды составляет 7,2 ± 0,2.

Цвет дегидратированной среды светло-бежевый, а приготовленная среда - светло-янтарный.

Подготовка к испытаниям ферментации

К предыдущему препарату - перед стерилизацией - необходимо добавить углевод до конечной концентрации 1% плюс индикатор Андраде (кислый фуксин) или феноловый красный (0,018 г / л). Трубки должны быть оснащены колоколом Дарема для наблюдения за образованием газа.

Другие варианты пептонной воды

Буферная или забуференная пептонная вода

Он содержит ферментативный гидролизат казеина, хлорид натрия, дигидрофосфат калия и додекагидрат гидрофосфата натрия. Конечный pH составляет 7,0 ± 0,2.

Для его приготовления отвешивают 20 г обезвоженной среды и растворяют в 1 литре дистиллированной воды. Дайте ему отдохнуть примерно 5 минут. Нагрейте 1 минуту до полного растворения.

При необходимости разлить по подходящим банкам. Стерилизовать в автоклаве при 121 ° C в течение 15 минут.

-Щелочная пептонная вода

Взвешивают 25 г обезвоженной среды и растворяют в 1 литре воды. Действуйте, как описано выше. PH колеблется от 8,3 до 8,7.

использование

Посевной материал делается путем непосредственного размещения образца.

Он используется для разбавления образцов, особенно когда есть подозрения, что там могут быть поврежденные бактерии. Обычно разведения составляют 1:10 и 1: 100.

Инкубируйте 24 часа при аэробиозе при 35-37 ° С.

Образцы стула

Для образцов стула на сальмонеллу рекомендуется использовать забуференную воду в качестве среды предварительного обогащения.

Для этого действуйте следующим образом:

Если стул образовался, возьмите 1 г пробы. Если они жидкие, возьмите 1 мл фекалий и поместите в пробирку с 10 мл буферной пептонной воды. В случае ректальных тампонов слейте материал, содержащийся в тампоне, в пробирку с забуференной пептонной водой.

Во всех случаях тщательно перемешайте и гомогенизируйте образец.

Инкубируйте при 37 ° C от 18 до 24 часов. Затем пересейте в обогащенном бульоне, таком как бульон селенитно-цистина или тетратионатный бульон, при 37 ° C в течение еще 18-24 часов. Наконец, культивируйте в селективных средах для сальмонелл, таких как агар SS, агар XLD, агар Hektoen и другие.

Образцы еды

Пептонная вода используется в качестве среды для обогащения или в качестве простого разбавителя, но при поиске видов сальмонелл ее используют в качестве среды предварительного обогащения, как уже было описано.

В еде действуйте следующим образом:

Для твердых продуктов отмерьте 25 г образца, а для жидких продуктов - 25 мл. Поместите указанную порцию в колбы, содержащие 225 мл пептонной воды. Перемешайте и гомогенизируйте образец.

Если предполагается, что микробная нагрузка высока, могут быть выполнены серийные или десятичные разведения для облегчения подсчета колониеобразующих единиц (КОЕ).

Количество разведений будет зависеть от типа образца и опыта аналитика.

Если, напротив, есть подозрение, что микробная нагрузка очень мала, нет необходимости проводить разведения. Впоследствии субкультивирование на селективных носителях.

В случае морской пищи, например, моллюсков, рыбы, в поисках холерного вибриона или других видов вибрионов, следует использовать пептонную воду, доведенную до pH 8,5 (щелочная пептонная вода).

контроль качества

Из каждой приготовленной партии от одной до двух пробирок следует инкубировать без инокуляции в течение 24 часов в условиях аэробиоза при 37 ° C. По прошествии времени не должно наблюдаться помутнения или изменения цвета.

Известные контрольные штаммы также можно использовать для оценки их эффективности:

Для этого можно использовать следующие штаммы бактерий: Escherichia coli ATCC 25922, Escherichia coli ATCC 8927, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Salmonella typhimurium ATCC 1428, Salmonella enteritidis ATCC 13076.

Во всех случаях ожидается удовлетворительное развитие микробов, о чем свидетельствует помутнение среды.

Ограничения

- Обезвоженная среда очень гигроскопична, поэтому ее необходимо беречь от влаги.

-Не используйте среду, если наблюдается какое-либо ухудшение качества.

-Обезвоженная питательная среда должна храниться при температуре от 10 до 35 ° C.

-Приготовленную среду необходимо хранить в холодильнике (2-8 ° C).

Ссылки

1. Камачо А., Джайлс М., Ортегон А., Палао М., Серрано Б. и Веласкес О. Методы микробиологического анализа пищевых продуктов. 2009, 2-е изд. Химический факультет УНАМ. Мексика. Версия для Администратора руководств и документов (AMyD) химического факультета UNAM 1. Доступно по адресу: http://depa.fquim.unam.mx
2. Britannia Laboratories. Буферная пептонная вода. 2015. Доступно на: britanialab.com.
3. Neogen Laboratories. Пептонная вода. Доступно на: foodsafety.neogen.com
4. Britannia Laboratories. Пептонная вода. 2015. Доступно на: britanialab.com.
5. Лаборатории Мерк. Забуференная пептонная вода. Доступно на: merckmillipore.com
6. Conda Pronadisa Laboratories. Щелочная пептонная вода. Доступно на: condalab.com
7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Микробиологический диагноз Бейли и Скотта. 12 изд. Редакция Panamericana SA Аргентина.