XLD АГАР: ОБОСНОВАНИЕ, ПОДГОТОВКА И ИСПОЛЬЗОВАНИЕ - БИОЛОГИЯ - 2025

XLD агар или ксилоза Лизин дезоксихолевого агара среды является селективным и дифференциальной твердой культурой для изоляции энтеропатогенов. Тейлор разработал формулу агара XL (ксилоза, лизин), чтобы улучшить изоляцию рода Shigella.

Он заметил, что этот род подавляется в большинстве сред, предназначенных для изоляции энтеропатогенов. Затем были добавлены дезоксихолат натрия, тиосульфат натрия и цитрат трехвалентного аммония для повышения его селективности. Эта формула оказалась полезной как для изоляции шигелл, так и для сальмонелл.

Различия колоний шигелл, сальмонелл и колиформ на XLD-агаре. A. Shigella sp, B. Salmonella sp, C. Колиформные бактерии. Источники: A. Автор: CDC / Amanda Moore, MT; Тодд Паркер, доктор философии; Одра Марш, любезно предоставлено: Библиотека изображений общественного здравоохранения B. https://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/1/1f/Salmonella_species_growing_on_XLD_agar_-_Showing_H2S_production_-_Detail.jpg C. Автор: CDC / Dr. JJ Farmer, Предоставлено: Библиотека изображений общественного здравоохранения

Агар XLD состоит из дрожжевого экстракта, дезоксихолата натрия, ксилозы, лизина, лактозы, сахарозы, тиосульфата натрия, цитрата железа и аммония, хлорида натрия, фенолового красного и агара. Агар XLD и дуэт агара SS используются в большинстве бактериологических лабораторий для исследования образцов фекалий на наличие шигелл и сальмонелл.

Другие лаборатории предпочитают комбинацию CHROMagar Salmonella и агара XLD среди других доступных вариантов. Эти дуэты можно приготовить в двойных чашках Петри. С одной стороны они помещают агар XLD, а с другой стороны - выбранную среду.

основа

-Питательная сила

XLD-агар содержит дрожжевой экстракт, который служит источником питательных веществ для микроорганизмов, которые растут на этом агаре. Кроме того, присутствие углеводов (ксилоза, сахароза и лактоза) дает энергию бактериям, которые могут их ферментировать.

-Селективность среды

В качестве ингибирующего вещества он представляет дезоксихолат натрия; Это предотвращает рост грамположительных бактерий, придавая среде селективный характер.

-Дифференциальная мощность

Типичные колонии шигелл

Как уже упоминалось, агар XLD содержит ксилозу; Этот углевод ферментируется всеми бактериями, которые растут в этой среде, за исключением рода Shigella.

Это одна из характеристик, которая придает ему особый характер, поскольку колонии Shigella отличаются от остальных развитием красных колоний, в то время как другие бактерии образуют желтые колонии.

Типичные колонии сальмонелл

Род Salmonella также ферментирует ксилозу, первоначально образуя желтые колонии. Однако после истощения углеводной ксилозы он атакует лизин за свой фермент лизиндекарбоксилазу. Декарбоксилирование лизина приводит к образованию щелочей, которые меняют цвет колонии и окружающей среды на первоначальный красный.

Такое поведение наблюдается только у сальмонелл, поскольку колиформные бактерии, декарбоксилирующие лизин, не могут подщелачивать среду. Это потому, что колиформные бактерии также сбраживают присутствующие лактозу и сахарозу; следовательно, производство кислот очень велико, оставляя желтые колонии в этих бактериях.

Следует отметить, что сальмонелла не ферментирует сахарозу или лактозу.

Производство H

XLD-агар также позволяет обнаруживать виды сальмонелл, продуцирующих H ₂ S; Для этого он полагается на источник серы, представленный тиосульфатом натрия, и проявитель реакции, которым является цитрат трехвалентного аммония.

Последний реагирует с H ₂ S (бесцветный газ) и образует видимый нерастворимый черный осадок сульфата железа. В этом смысле характеристики колоний сальмонелл будут красными с черным центром.

Следует отметить, что для протекания реакции образования H ₂ S необходим щелочной pH. Вот почему другие Enterobacteriaceae, которые образуют H ₂ S, не могут или плохо справляются с этим в этой среде, поскольку высокая кислотность, возникающая при ферментации присутствующих углеводов, ингибирует или препятствует реакции.

-Хлорид натрия, агар и фенол красный

Наконец, хлорид натрия поддерживает осмотический баланс; агар является затвердевающим агентом, а феноловый красный обнаруживает изменения pH, меняя цвет колоний и среды.

подготовка

Взвесьте 55 г обезвоженной среды XLD и растворите в 1 литре воды. Нагрейте и перемешайте смесь, пока она не дойдет до точки кипения. Не перегревайте, так как тепло повреждает среду и создает осадок, который изменяет морфологию типичных колоний.

Эту среду нельзя автоклавировать. При растворении его необходимо передать на водяную баню при 50 ° С. При остывании подавать прямо в стерильные чашки Петри. Их можно разливать в одинарные или двойные тарелки. Им дают застыть и хранят в холодильнике до использования.

Перед использованием закалять. Поскольку это нестерильная среда, рекомендуется готовить ее незадолго до даты использования.

Конечный pH среды должен составлять 7,4 ± 0,2. Цвет приготовленной среды оранжево-красный, полупрозрачный, без осадка.

Если у вас основной агар с ксилозолизином (XL), вы можете добавить дезоксихолат натрия, тиосульфат натрия и цитрат аммония железа. Таким образом получается формула агара XLD.

Приложения

XLD-агар используется для выделения энтеропатогенов, в основном из рода Shigella и, во вторую очередь, из рода Salmonella. Это полезно для анализа образцов стула, воды и пищи.

Типы образцов

фекалии

Образцы стула можно высевать непосредственно на агар XLD, обеспечивая хорошее распределение материала для получения изолированных колоний.

Чтобы улучшить восстановление сальмонелл, агар XLD можно штриховать из среды для обогащения сальмонелл.

питание

В пищу можно использовать бульоны для обогащения сальмонелл и шигелл. При сальмонелле можно использовать, среди прочего, селенитно-цистиновый бульон, ярко-зеленый тетратионатный бульон.

В случае Shigella его можно обогатить бульоном Shigella с 0,5 мкг / мл новобиоцина, инкубировать при 42 ° ± 1 ° C в течение 16-20 часов.

вода

При анализе воды рекомендуется, среди прочего, метод мембранной фильтрации и использование агара XLD.

Условия посадки и идентификации

Засеянную среду инкубируют в аэробных условиях при 35 ° C в течение 24-48 часов.

Наблюдаются типичные колонии каждого рода, подозрительные колонии должны пройти биохимические тесты для их идентификации.

контроль качества

Для оценки контроля качества среды можно использовать следующие бактериальные штаммы: Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella abony DSM 4224, Shigella flexneri ATCC 12022, Shigella sonnei ATCC 25931, Escherichia coli ATCC 25922, Proteus 43071is mirabilis. , Klebsiella pneumoniae ATCC 33495.

Для рода Salmonella характерно наличие красных колоний с черным центром или полностью черных колоний на этой среде. В то время как у представителей рода Shigella колонии должны быть красного цвета, то есть цвета среды.

В случае Escherichia coli ожидается полное или частичное подавление; если он растет, колонии желтые. Для Proteus mirabilis ожидается плохой рост розовых колоний с черным центром или без него. В конце концов род Klebsiella вырастет в виде желтых колоний.

Последние мысли

XLD-агар широко используется в бактериологических лабораториях из-за его высокой эффективности для выделения шигелл, а также хорошего восстановления для рода Salmonella.

Ралл и др. (2005) в своей работе, озаглавленной «Оценка трех обогащающих бульонов и пяти твердых сред для обнаружения сальмонеллы у домашней птицы», продемонстрировали результаты трех испытанных классических сред (ярко-зеленый агар, агар SS и агар XLD). , XLD-агар имел лучшую скорость восстановления.

Процент восстановления был следующим: 13,8% для ярко-зеленого агара, 27,6% для SS и 34,5% для XLD. Агар Рамбаха с выходом 48% и CHROMagar с 79,3% превосходил только хромогенные среды.

Ссылки

1. Болезни пищевого происхождения. Дизентерия. Доступно на: anmat.gov.ar
2. «Агар XLD». Википедия, свободная энциклопедия. 9 февраля 2019, 11:46 UTC. 10 апр 2019, 19:25 wikipedia.org
3. BBL Laboratories. CHROMagar Salmonella / BD XLD Agar (двухсторонний). 2013 Доступно на: bd.com
4. Лаборатория Neogen. XLD-агар. Доступно на: foodsafety.neogen
5. Лаборатория Франсиско Сориа Мельгисо. XLD Agar. Доступно на: http://f-soria.es/Inform
6. Rall L, Rall R, Aragon C, Silva M. Оценка трех обогащающих бульонов и пяти сред для посева для обнаружения сальмонелл у домашней птицы. Браз. J. Microbiol. 2005; 36 (2): 147-150. Доступно на: scielo.br
7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Микробиологический диагноз Бейли и Скотта. 12 изд. Редакция Panamericana SA Аргентина.