Сульфит агар представляет собой твердая среду селективный и дифференциальная культура, специально разработанный для изоляции сальмонелла энтерик подвид enterica серотип Typhi, среди других видов Salmonella. Среда известна как агар BSA по аббревиатуре от английского Bismuth Sulfite Agar.
Первоначальная формула сульфитного висмутового агара была создана в 1927 году Уилсоном и Блэром (среда с содержанием глюкозы и сульфита висмута и железа); он содержал сульфит натрия, глюкозу, раствор висмута, цитрат аммония, сульфат железа и агар-агар.
Рост 48 часов инкубации Salmonella sp на агаре с сульфитом висмута. Источник: Pixnio.com Автор: Доктор У. Р. Эрвинг, USCDCP
Сегодня существует модификация исходной среды, состоящая из мясного экстракта, мясных и казеиновых пептонов, индикатора сульфита висмута, глюкозы, динатрия фосфата, сульфата железа, ярко-зеленого и агар-агара.
Существует множество способов выделения видов сальмонелл, но когда дело доходит до выделения серотипа Typhi, сульфитный висмут-агар имеет заметное преимущество перед ними, так как в большинстве случаев происходит очень низкое выделение этого микроорганизма или его полное отсутствие. ,
Однако при попытке изолировать энтеропатогены необходимо использовать более одного типа среды, поскольку агар с сульфитом висмута менее эффективен для других видов Salmonella и рода Shigella, которые подавляются или развиваются очень плохо. в этом агаре.
Следует отметить, что среди всех видов сальмонелл серотип Typhi является одним из наиболее важных энтеропатогенов человека и является его единственным резервуаром. Этот серовар вызывает брюшной тиф, гастроэнтерит, бактериемию и сепсис.
По этой причине целесообразно включать этот агар при анализе образцов воды, кала или пищевых продуктов, если есть подозрение на его присутствие.
основа
Как и большинство питательных сред, сульфитный висмут-агар содержит питательные вещества, способствующие росту бактерий, такие как пептоны и мясной экстракт. Точно так же глюкоза действует как источник энергии и углерода.
Однако не все бактерии будут расти на этой среде, так как агар с сульфитом висмута является селективной средой. Он содержит соединения, подавляющие рост грамположительных микроорганизмов и некоторых грамотрицательных бактерий. Этими соединениями являются: индикаторный сульфит висмута и ярко-зеленый цвет.
Со своей стороны, динатрийфосфат поддерживает осмолярность и pH среды.
Кроме того, агар с сульфитом висмута является дифференциальной средой благодаря присутствию сульфата железа, который показывает образование H 2 S. H 2 S, образованный бактериями, вступает в реакцию с сульфатом железа и образует четко видимый нерастворимый черный осадок.
Наконец, твердую консистенцию среды обеспечивает агар-агар.
подготовка
Взвешивают 52,3 г обезвоженной среды и растворяют в 1 литре воды. Нагрейте смесь до кипения 1 минуту при частом помешивании до полного растворения. Не перегревайте слишком сильно. Эта среда не подлежит автоклавированию, потому что сильное нагревание повреждает питательную среду.
Дать остыть до 45 ° C и встряхнуть перед подачей в стерильные чашки Петри. Рекомендуется делать пластины хорошей толщины. Для этого в каждую тарелку необходимо налить по 25 мл. Дайте застыть. Поскольку это среда, которая не стерилизуется, рекомендуется сразу же ее использовать.
Однако исследование, проведенное D'aoust в 1977 году, показало, что по мере старения агаровой среды с сульфитом висмута наблюдается лучшее восстановление Salmonella typhimurium и Salmonella enteritidis, не влияя на производительность сероваров Typhi и Paratyphi B.
Д'Ауст рекомендует использовать чашки на 4-й день охлаждения, хотя он отмечает, что по мере старения среды селективность снижается и штаммы Proteus vulgaris развиваются легче.
По этой причине для сильно загрязненных образцов, таких как фекалии, предпочтительно использовать свежеприготовленную среду. В противном случае используйте на 4-й день его приготовления. Другие авторы рекомендуют использовать тарелки на следующий день после их приготовления, хранящиеся в холодильнике.
Охлажденные пластины перед использованием необходимо закалить. PH среды должен составлять 7,5 ± 0,2. Сырая среда имеет бежевый цвет, а приготовленная среда - зеленовато-серая опалесцирующая.
Приложения
Среди образцов, которые могут быть помещены в эту среду, есть образцы фекалий, питьевой или сточной воды и продуктов питания.
Для улучшения изолятов рекомендуется провести предварительную обработку бульоном лактозы и после обогащения бульоном тетратионата или бульоном цистин-селенита перед посевом на агар сульфита висмута.
Планшеты инкубируют при 35 ° C ± 0,2 от 24 до 48 часов при аэробиозе.
Характеристики колоний на сульфитном агаре висмута
Колонии Salmonella Typhi обычно видны на этом агаре в течение 24 часов с черным центром и окружены ярко-зеленым ореолом. А через 48 часов они полностью почернеют из-за образования сероводорода.
-Эта среда подавляет большинство видов рода Shigella.
- S. Typhi и S. arizonae могут давать очень похожие колонии.
- Колиформные бактерии, которые продуцируют H 2 S, такие как Proteus и Citrobacter, образуют колонии, аналогичные колониям Salmonella, поэтому необходимо провести биохимические идентификационные тесты.
- Для получения изолированных колоний необходимо выполнить хорошую исчерченность; Это единственный способ наблюдать типичные характеристики колоний рода Salmonella.
контроль качества
Для контроля стерильности неинокулированный планшет инкубируют при 37 ° C, ожидается, что не будет роста или изменения цвета.
Для контроля качества используются известные штаммы, такие как:
Escherichia coli ATCC 25922, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella Typhi ATCC 19430, Shigella flexneri ATCC 12022, Enterococcus faecalis ATCC 29212.
Ожидается, что Escherichia coli и Shigella flexneri частично ингибируются за счет образования зеленовато-коричневых и коричневых колоний соответственно. Принимая во внимание, что обе сальмонеллы должны иметь отличное развитие с черными колониями с металлическим блеском, и, наконец, Enterococcus faecalis должен быть полностью подавлен.
Ссылки
- Уилсон, У. и Э.М. МакВ. Блэр. Использование глюкозно-висмут-сульфитно-железной среды для выделения B. typhosus и B. proteus. Журнал гигиены, 1927; 26 (4), 374-391. Получено с .jstor.org
- D'aoust JY. Влияние условий хранения на производительность агара сульфита висмута. J Clin Microbiol. 1977; 5 (2): 122–124. Доступно на: ncbi.nlm.nih.gov
- IVD Laboratories. Висмут-сульфитный агар по WILSON-BLAIR. 2009. Доступно по адресу: BismuthSulfitagar_span_Jan_2009% 20 (2) .pdf
- Himedia Laboratories. Висмут-сульфитный агар. 2017. Доступно на: himedialabs.com.
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Микробиологический диагноз Бейли и Скотта. 12 изд. Редакция Panamericana SA Аргентина.
- Моралес Р., де ла Крус Д., Лейва Г. и Ибарра М. Бактериологическое качество сырого козьего молока, производимого в Миравалесе, Пуэбла. Преподобный Мекс де Инг Ким, 2012 год; 11 (1): 45-54