СОЕВЫЙ АГАР С ТРИПТИКАЗЕИНОМ: ОБОСНОВАНИЕ, ПОДГОТОВКА И ПРИМЕНЕНИЕ - БИОЛОГИЯ - 2025

Соевый агар триптона или Trypticase соевого агара является твердой культуральной средой, а также пищевые неселективным. Он обозначается буквами TSA для его аббревиатуры на английском языке Trypticase Soy Agar. В его состав входят триптеин, соевый пептон, хлорид натрия и агар-агар.

Благодаря высокой питательной ценности он идеально подходит для выращивания умеренно требовательных и нетребовательных микроорганизмов. Среда без дополнительных добавок не рекомендуется для первичных культур, но она очень полезна для субкультивирования чистых штаммов и поддержания их жизнеспособности, среди прочего.

Дольки триптиказеинового соевого агара в пробирках с бакелитовыми крышками. Источник: Фотография автора MSc. Мариельса Гил.

Кроме того, этот агар служит основой для приготовления обогащенной среды, такой как кровяной агар, особенно когда требуется наблюдать за схемами гемолиза и устанавливать таксоны оптокина и бацитрацина, необходимые для диагностики Streptococcus pneumoniae и Streptococcus pyogenes соответственно.

С другой стороны, в сочетании с антибиотиками полезно изолировать клинически важные факультативные и строго анаэробные микроорганизмы из образцов со смешанной флорой.

Наконец, состав соевого агара с триптиказеином и его характеристики соответствуют требованиям, установленным различными фармакопеями (европейской, японской и североамериканской).

основа

Для правильного развития бактерий необходимо наличие источников энергии, таких как аминокислоты, витамины, пуриновые и пиримидные основания.

В этом смысле триптеин и соевый пептон обеспечивают микроорганизмами эти питательные вещества, тем самым обеспечивая их полное развитие. Однако для привередливых бактерий необходимо дополнить этот агар дефибринированной или подогретой кровью, чтобы увеличить ее обогащение.

С другой стороны, если в среду добавляются антибиотики, она становится селективной. Также можно добавить 0,6% дрожжевой экстракт, чтобы способствовать изоляции видов рода Listeria, в то время как добавление цистинового теллурита и крови ягненка идеально подходит для Corynebacterium diphteriae.

Наконец, хлорид натрия обеспечивает осмотический баланс среды, а агар обеспечивает твердую консистенцию.

подготовка

Чашки с соевым агаром с триптиказеином

Для приготовления соевого агара с триптиказеином необходимо взвесить 40 г дегидратированной коммерческой среды на цифровых весах. Его растворяют в одном литре дистиллированной воды, содержащейся в колбе.

Смесь оставляют на 5 минут, а затем относят к источнику тепла, чтобы помочь растворить среду. Его следует часто помешивать и варить 1-2 минуты. Затем среду стерилизуют в автоклаве при 121 ° C в течение 15 минут.

Дать остыть до 50 ° C и разлить по стерильным чашкам Петри. Дать застыть, перевернуть, разложить по тарелкам и хранить в холодильнике.

Конечный pH среды должен составлять 7,3 ± 0,2.

Следует отметить, что цвет дегидратированной питательной среды светло-бежевый, и ее следует хранить при температуре от 10 до 35 ° C в сухом месте.

В свою очередь, приготовленный агар имеет светло-янтарный цвет. Подготовленные тарелки до использования хранить в холодильнике (2-8 ° C).

Перед использованием тарелки должны достичь комнатной температуры.

Чашки с соевым агаром с триптиказеином с добавлением крови

Кровяной агар готовят путем добавления 5% дефибринированной крови во время охлаждения триптиказеинового соевого агара до 50 ° C. Смесь гомогенизируют путем легкого вращения.

Подавать в стерильных чашках Петри. Средний цвет должен быть вишнево-красным.

Чашки с соевым агаром с триптиказеином с добавлением подогретой крови

Чтобы приготовить кровяной агар на основе TSA, действуйте так же, как уже описанные процедуры, но при выходе из автоклава его оставляют в покое до тех пор, пока температура среды не станет примерно от 56 до 70 ° C. В это время помещается кровь и перемешивается, пока среда не станет коричневой.

Подавать в стерильных чашках Петри. Цвет среды - шоколадно-коричневый.

Дольки триптиказеина соевого агара

Процедура приготовления агара такая же, как и для чашек, с той разницей, что вместо подачи среды на чашки Петри ее перед стерилизацией распределяют от 10 до 12 мл в пробирки с бакелитовыми крышками.

Затем пробирки автоклавировали при 121 ° C в течение 15 минут. Когда они уходят, их наклоняют с помощью опоры и дают им затвердеть.

Подготовленные клинья высеваются по площади и служат для сохранения жизнеспособности некоторых нетребовательных микроорганизмов в течение определенного времени.

Приложения

Триптиказеиновый соевый агар используется в следующих случаях:

-В качестве основы для приготовления классического кровяного агара, который обычно используется в большинстве лабораторий.

-Изоляция требовательных бактерий.

-Наблюдение за картиной гемолиза.

-Проведение диагностических тестов.

-В качестве основы для приготовления специального кровяного агара для Corynebacterium diphteriae с цистиновым теллуритом и кровью ягненка.

-В качестве основы для приготовления агара с кровью ягненка плюс канамицин-ванкомицин для роста анаэробов, особенно Bacteroides sp.

- Для содержания нетребовательных штаммов (Bacterioteca).

- Аэробный микробиологический подсчет при исследовании микробного предела воды, окружающей среды, пищевых продуктов и косметических образцов.

Посевная

Образцы можно высеять непосредственно на поверхность соевого агара с триптиказеином с добавлением крови или других добавок. Посеяна истощением.

В то время как чашки с соевым агаром с триптиказеином без добавок обычно используются для субкультивирования штаммов микробов (бактерий или дрожжей).

контроль качества

Контроль стерильности

Чтобы проверить стерильность различных сред, приготовленных с использованием триптиказеинового соевого агара, рекомендуется сделать следующее: из каждой подготовленной партии 1 или 2 незасеянные чашки или пробирки следует инкубировать при 37 ° C в течение 24 часов, чтобы продемонстрировать их стерильность. Во всех случаях он должен оставаться без роста.

При обнаружении загрязнения необходимо выбросить всю партию.

Контроль роста

Следующие бактериальные штаммы могут быть использованы для изучения правильного функционирования соевого агара с триптиказеином: Escherichia coli ATCC 8739, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Pseudomonas aerugiosa ATCC 9027 и Enterococcus faecalis ATCC 29212.

Штаммы засевают и инкубируют в аэробных условиях при 37 ° C в течение 24 часов.

Во всех случаях рост должен быть удовлетворительным.

Также можно использовать грибы, такие как Candida albicans Complex ATCC 10231 и Aspergillus niger ATCC 16404. Ожидается хороший рост для обоих штаммов.

Контроль роста и характер гемолиза триптиказеинового соевого агара с добавлением крови

Для проверки правильного функционирования кровяного агара, приготовленного с этой основой, можно использовать следующие штаммы: Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 и Streptococcus pneumoniae ATCC 49619.

Их засевают и инкубируют при 37 ° C в условиях микроаэрофильности в течение 24 часов.

Во всех случаях рост должен быть удовлетворительным, с учетом того, что бета-гемолиз (светлый ореол вокруг колонии) должен наблюдаться у S. pyogenes, а альфа-гемолиз (зеленоватый ореол вокруг колонии) должен наблюдаться у обоих штаммов S. pneumoniae. колонии).

Ссылки

1. Авторы Википедии. Триптиказ I агар. Википедия, свободная энциклопедия. 17 декабря 2018 г., 15:47 UTC. Доступно на: https://en.wikipedia.org
2. Britannia Laboratories. Соевый агар Triptein. 2015. Доступно на: britanialab.com.
3. Neogen Laboratories. Трипто-соевый агар. Доступно на: foodsafety.neogen.com
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Микробиологический диагноз Бейли и Скотта. 12 изд. Аргентина. Редакция Panamericana SA
5. BD Laboratories. Триптиказ I - Агар. 2014. Доступно на: .bd.com