АГАР САБУРО: ОСНОВА, ПОДГОТОВКА И ПРИМЕНЕНИЕ - БИОЛОГИЯ - 2025

Агар Сабуро , также известные как Сабуро агар с декстрозой, является твердой средой, особенно обогащенной для выделения и развития грибов, такие как дрожжи, плесень и дерматофиты.

Следовательно, этой среды не может не хватать в микробиологической лаборатории для исследования наличия патогенных или условно-патогенных грибов, будь то из клинических или неклинических образцов. Кроме того, он также идеально подходит для роста нитчатых бактерий, таких как Streptomyces и Nocardias. Его использование очень широко, так как оно может быть использовано в микологии человека, животных, растений и в промышленной микологии.

A. Незасеянный агар Сабуро. Б. Агар Сабуро, засеянный дрожжами. Источник: Фотографии автора MSc. Мариельса Гиль

Эта среда была создана в 1896 году выдающимся дерматологом Раймоном Сабуро, который стал всемирно известным специалистом по заболеваниям кожи головы, главным образом вызываемым дерматофитами.

Его создание было настолько важным, что оно использовалось с тех пор и остается сегодня, хотя и с некоторыми изменениями.

Несмотря на то, что она предназначена для грибов, в этой среде могут расти бактерии, поэтому для образцов со смешанной флорой необходимо включение антибиотиков в их подготовку для подавления роста бактериальной флоры, которая может присутствовать.

Выбор антибиотика должен производиться тщательно и с учетом типа восстанавливаемого грибка, так как некоторые из них подавляются в присутствии определенных веществ.

основа

Агар Сабуро с декстрозой - это среда, которая в своей первоначальной формулировке является слабо селективной из-за ее кислого pH 5,6 ± 0,2, однако бактерии все еще могут развиваться, в основном при длительных инкубациях.

Среда содержит казеиновый пептон и переваривание поджелудочной железы животных тканей, которые являются источником углерода и азота для роста микроорганизмов.

Он также содержит высокую концентрацию глюкозы, которая действует как источник энергии, способствуя росту грибков над бактериями. Все это смешано с агар-агаром - компонентом, который придает ему нужную консистенцию.

С другой стороны, декстрозный агар Сабуро может быть селективным при добавлении антибиотиков.

С антибиотиками он особенно полезен для образцов ран, открытых язв или любого образца, в котором предполагается сильное бактериальное заражение.

Наиболее часто используемые комбинации декстрозного агара Сабуро с антибиотиками

-Агар Сабурауд с хлорамфениколом: идеален для восстановления дрожжей и мицелиальных грибов.

- Агар Сабуро с гентамицином и хлорамфениколом: в этой среде растут почти все мицелиальные грибы и дрожжи, и он подавляет большое количество бактерий, включая энтеробактерии, псевдомонады и стафилококки.

- Агар Сабуро с циклогексимидом: он особенно полезен для образцов с кожи или дыхательных путей, если есть подозрение на диморфные грибы.

Циклогексимид следует использовать с осторожностью; Хотя он используется для подавления роста непатогенных или экологических грибов и дрожжей, которые могут присутствовать в образце в качестве загрязнителей, он также подавляет рост некоторых грибов, таких как Cryptococcus neoformans, Aspergillus fumigatus, Allescheria boydii, Penicillium sp и других условно-патогенных грибов.

- Агар Сабуро с хлорамфениколом плюс циклогексимид: он используется в основном для выделения дерматофитов и диморфных грибов. Его недостаток состоит в том, что он подавляет некоторые виды условно-патогенных грибов, таких как Candida no albicans, Aspergillus, Zygomycetes или C. neoformans.

- Агар Сабуро с хлорамфениколом, стрептомицином, пенициллином G и циклогексимидом: он идеально подходит для образцов, сильно загрязненных бактериями и сапрофитными грибами, но имеет недостаток, заключающийся в том, что он подавляет рост Actinomyces и Nocardias в дополнение к условно-патогенным грибам, упомянутым выше.

подготовка

Если у вас есть ингредиенты по отдельности, его можно приготовить следующим образом:

Агар с декстрозой Сабуро

Весить:

- 40 гр декстрозы

- 10 г пептона

- 15 гр агар-агара

- Отмерьте 1000 мл дистиллированной воды.

Все ингредиенты смешиваются, pH доводится до 5,6. Растворенные вещества растворяют при кипячении, 20 мл среды распределяют в пробирки размером 25 х 150 мм, без ободка и предпочтительно с ватным колпачком.

Тубы с ватным колпачком. Источник: Фотография автора MSc. Мариельса Гиль

В зависимости от наличия также могут использоваться трубки других размеров.

Их автоклавировали в течение 10 минут при атмосферном давлении (121 ° C). Время автоклавирования не должно быть превышено. При выходе из автоклава пробирки наклоняют с помощью опоры до тех пор, пока они не затвердеют в канавке.

Другой способ - растворить ингредиенты, нагревая до кипения. Автоклав в течение 10 минут в том же флаконе, а затем разлить 20 мл по чашкам Петри.

Если у вас есть агаровая среда с декстрозой Сабуро, которая уже содержит все ингредиенты, взвесьте количество, указанное коммерческой компанией для одного литра воды. Остальные шаги такие же, как описано выше.

Агар с декстрозой Сабуро (модификация Эммонса)

Весить:

- 20 гр декстрозы

- 10 г пептона

- 17 гр агар-агара

- Отмерьте 1000 мл дистиллированной воды.

Все ингредиенты смешиваются, pH доводится до 6,9. Действуйте так же, как и в предыдущем случае.

Есть коммерческие фирмы, которые предлагают среду со всеми ингредиентами. В этом случае взвесьте и подготовьте, как описано на вкладыше.

Декстрозный агар Сабуро (модификация Эммонса) с хлорамфениколом

Стандартный раствор хлорамфеникола

- Взвесьте 500 мг хлорамфеникола.

- Отмерьте 100 мл 95% этанола.

- Микс

Агаровую среду с декстрозой Сабуро (Emmons) готовят, как описано ранее, и дополнительно на каждый литр среды перед автоклавированием добавляют 10 мл исходного раствора хлорамфеникола.

Декстрозный агар Sabouraud Emmons с циклогексимидом

Стандартный раствор циклогексимида

- Взвесьте 5 г циклогексимида

- Отмерьте 100 мл ацетона.

- Микс

Агаровую среду с декстрозой Сабуро (Emmons) готовят, как уже описано, и дополнительно на каждый литр среды добавляют 10 мл исходного раствора циклогексимида перед автоклавированием.

Агар с декстрозой Sabouraud (Emmons) с хлорамфениколом и циклогексимидом

Агаровую среду с декстрозой Сабуро (Emmons) готовят, как описано ранее, и дополнительно на каждый литр среды добавляют 10 мл исходного раствора хлорамфеникола и 10 мл исходного раствора циклогексимида перед автоклавированием.

Другие антибиотики, которые можно добавить

От 20 000 до 60 000 единиц пенициллина на литр среды.

30 мг стрептомицина на литр среды.

Оба должны быть включены после автоклавирования среды, слегка охлажденной (50-55 ° C).

0,04 г неомицина на литр среды.

0,04 г гентамицина на литр среды.

Особые соображения

В целях безопасности предпочтительнее высевать агар с декстрозой Сабуро в пробирки клиновидной формы (с наклонным клювом), а не в чашки Петри, чтобы избежать рассеивания и вдыхания спор.

Важно, чтобы пробирки с агаром Сабуро были покрыты ватой, а не завинчивающейся крышкой, поскольку было показано, что полуанаэробные условия ингибируют образование спор у некоторых штаммов, например Coccidioides immitis. Кроме того, большинство грибов являются аэробными.

В случае использования винтовой крышки не закрывать герметично.

контроль качества

Подготовленные носители должны пройти контроль качества, чтобы убедиться в их правильном функционировании. Для этого высевают определенные контрольные сорта.

Для агара Сабуро с декстрозой и хлорамфениколом можно использовать штаммы Candida albicans ATCC, которые должны иметь отличный рост. Другой планшет инокулируют штаммами Escherichia coli, которые необходимо полностью подавить.

Также инкубируют неинокулированный планшет, в котором не должны расти микроорганизмы.

Штаммы Trichophyton mentagrophytes можно использовать для декстрозного агара Сабуро с хлорамфениколом и циклогексимидом, и они должны хорошо развиваться. Другой планшет засевают штаммом Aspergillus flavus, в котором рост должен быть незначительным или отсутствовать. Кроме того, инокулированный планшет инкубируют, чтобы продемонстрировать его стерильность.

Для агара Сабуро с декстрозой и циклогексимидом используются штаммы Candida albicans, Trichophyton rubrum или Microsporum canis, которые должны демонстрировать хороший рост.

Аналогичным образом, включен штамм Aspergillus flavus, показывающий незначительный рост или его отсутствие. Наконец, инкубируйте незасеянный планшет для контроля стерильности.

Приложения

Первичная культура

Классический декстрозный агар Сабуро содержит 4 грамма декстрозы и отлично подходит в качестве среды для первичной изоляции, поскольку показывает характерную морфологию каждого гриба.

Он также отлично подходит для демонстрации производства пигментов. Однако это не лучший способ наблюдения за спороношением.

Он также не рекомендуется для выращивания Blastomyces dermatitidis, которое подавляется присутствующей высокой концентрацией глюкозы.

С другой стороны, при выращивании необходимо учитывать некоторые соображения.

Некоторые грибы лучше всего растут при комнатной температуре, например плесень, другие успешно растут при 37 ° C, например, некоторые дрожжи, а третьи могут расти при обеих температурах (диморфные грибы).

По этой причине иногда необходимо использовать несколько чашек с агаром Сабуро для одного и того же образца, поскольку часто выполняется двойной посев для инкубации одного планшета при комнатной температуре, а другого - при 37 ° C.

Например, Sporothrix schenckii сеют в две пластины; один инкубируется при комнатной температуре для получения фазы плесени, а другой инкубируется при 37 ° C для получения дрожжевой фазы, но в последнем случае необходимо добавить в среду 5% крови.

В других случаях, таких как образцы мицетомы, засевают две чашки с агаром Сабуро, одну с хлорамфениколом, а другую с циклогексимидом. Первый позволит разрастаться возбудителям микотомы грибкового происхождения (эумицетома), а второй - возбудителям мицетомы бактериального происхождения, например, актиномицетомам.

спорообразование

Модифицированный агар Сабуро с декстрозой Эммонс содержит 2 грамма декстрозы и используется не только для выделения, но и для споруляции и сохранения грибов.

В этой среде можно выделить штаммы Blastomyces dermatitidis.

консервация

Для консервации грибных культур их можно хранить в холодильнике (2-8 ° С). Срок хранения может составлять от 2 до 8 недель. По истечении этого времени их необходимо пересеять, чтобы повторить процесс.

Некоторые грибы лучше всего хранятся при комнатной температуре, например, Epidermophyton foccosum, Trichophyton schoenleinnii, T. violaceum и Microsporum audounii.

Поддержание штамма можно продлить, чтобы избежать плеоморфизма, если декстроза полностью удалена из агара и если количество агара в среде уменьшено, чтобы избежать высыхания.

микрокультур

Для идентификации некоторых нитчатых грибов необходимо провести микрокультивирование с использованием агара Сабуро или других специальных средств для наблюдения за структурами полового и бесполого размножения.

В микологии человека

Он используется в основном для диагностики грибковых заболеваний, особенно тех, которые поражают кожу и ее прикрепления (волосы и ногти).

Образцы могут быть выделениями, экссудатом, кожей, волосами, ногтями, мокротой, спинномозговой жидкостью или мочой. Обычно изолированные патогены - дерматофиты, грибы, вызывающие подкожные и системные микозы.

Микология животных

Животные часто поражаются грибковыми инфекциями, поэтому агар Сабуро так же полезен в микологии животных, как и для человека.

Например, дерматофиты часто поражают животных. Так обстоит дело с Microsporum canis var distortum, который часто поражает собак, кошек, лошадей, свиней и обезьян. Аналогичным образом Microsporum gypseum заражает собак, кошек и домашний скот.

Microsporum gallinae поражает таких птиц, как куры, петухи и куры.

Другие грибы, такие как Zymonema farciminosum, также являются причиной болезней животных, в основном лошадей, мулов и ослов, вызывая значительное воспаление лимфатических сосудов.

Sporothrix schenkii и Histoplasma capsulatum поражают домашних животных и человека.

Экологическая микология

Многие патогенные или условно-патогенные грибы могут концентрироваться в любой момент времени в данной среде, особенно в операционных и отделениях интенсивной терапии (ОИТ) клиник и больниц. Поэтому необходимо их контролировать.

Другими уязвимыми местами являются библиотеки и старые здания, на которые может влиять концентрация экологических грибов.

В экологических исследованиях агар с декстрозой Сабуро используется для изоляции грибов.

Промышленная микология

Агар с декстрозой Сабуро не может отсутствовать для изучения заражающих грибов при производстве косметики, продуктов питания, напитков, кожи, текстиля и прочего.

Микология растений

Растения также страдают от болезней, вызываемых грибами, поражающими различные части растения, что может даже привести к прекращению сбора урожая, что приведет к большим потерям в сельском хозяйстве.

Ссылки

1. Cuenca M, Gadea I, Martín E, Pemán J, Pontón J, Rodríguez (2006). Микробиологическая диагностика микозов и исследования противогрибковой чувствительности. Рекомендации Испанского общества инфекционных болезней и клинической микробиологии. Доступно на: coesant-seimc.org
2. Лаборатория ValteK. (2009). Декстрозный агар Сабуро с циклогексимидом. Доступно на: andinamedica.com.
3. Наварро О. (2013). Ветеринарная микология. Национальный аграрный университет. Никарагуа.
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Микробиологическая диагностика Бейли и Скотта. 12 изд. Аргентина. Редакция Panamericana SA
5. Касас-Ринкон Г. Общая микология. 1994. 2-е изд., Центральный университет Венесуэлы, Библиотечные издания. Венесуэла Каракас.