Агар Hektoen или Hektoen энтеросолюбильного агара твердой среды является селективным и дифференциальной культурой. Он был создан в Институте Hektoen Кингом и Мецгером для изоляции энтеропатогенных бактерий родов Shigella и Salmonella.
Среда состоит из протеозопептона, дрожжевого экстракта, солей желчных кислот, лактозы, сахарозы, салицина, тиосульфата натрия, хлорида натрия, цитрата железа, цитрата аммония, бромтимолового синего, кислого фуксина и агара. Этот состав позволяет дифференцировать роды Shigella и Salmonella от остальных бактерий, способных расти в этой среде.
A. Агар Hektoen первого сорта B. Агар Hektoen засеянный. Источник: Flickr.com/ Первым загрузчиком был Филиппинджл из французской Википедии.
Хотя существуют другие среды с той же функцией, что и агар Hektoen, они имеют большее преимущество по сравнению с другими средами, особенно если вы хотите восстановить виды Shigella.
Представители обоих полов вызывают серьезные желудочно-кишечные проблемы у людей из-за употребления зараженной пищи; следовательно, передача фекально-оральная. Вот почему использование агара Hektoen в основном показано при микробиологическом анализе стула и образцов пищи.
основа
Hektoen Agar содержит пептоны и дрожжевой экстракт в качестве источника питательных веществ, обеспечивающих необходимые элементы для развития микробов.
Однако в нем также есть соли желчных кислот, которые действуют, подавляя рост некоторых бактерий, особенно грамположительных и некоторых грамотрицательных. Именно по этой причине он считается селективной средой.
С другой стороны, агар Hektoen представляет собой дифференциальную среду. Это свойство обеспечивается присутствием ферментируемых углеводов, таких как лактоза, сахароза и салицин, вместе с системой индикатора pH, представленной бромтимоловым синим и кислым фуксином.
Все бактерии, способные расти на этой среде, но не принадлежащие к роду Salmonella и Shigella, будут развивать колонии лосося или апельсина, за исключением рода Proteus. Это происходит из-за ферментации одного или нескольких присутствующих углеводов, которые подкисляют среду, что приводит к изменению индикатора pH.
Со своей стороны, представители рода Shigella и Salmonella не способны ферментировать какие-либо присутствующие углеводы, используя только пептоны в качестве источника энергии, который подщелачивает среду, и поэтому их колонии сине-зеленые.
В этой среде также можно выделить бактерии, способные образовывать сероводород (бесцветный газ). Тиосульфат натрия действует как источник серы, а цитрат железа - как проявитель. Оба соединения делают возможным образование черного осадка сульфида железа, который показывает реакцию.
Черный осадок в центре колонии с прозрачным ореолом вокруг него придает вид рыбьего глаза. Эта характеристика предполагает присутствие рода Salmonella.
Наконец, хлорид натрия поддерживает осмотический баланс, а агар обеспечивает твердую консистенцию среды.
подготовка
Взвесить 76 г обезвоженной среды и растворить в литре дистиллированной воды. Энергично встряхните смесь и дайте ей постоять 10-15 минут. Его можно нагревать и варить, совершая вращательные движения до полного растворения. Этот носитель не автоклавирован.
Когда среда достигает температуры примерно 45 ° C, объем 20 мл наливается непосредственно в стерильные чашки Петри.
Дают агару затвердеть. На тот момент они готовы к использованию. Их рекомендуется использовать немедленно. Если это невозможно, их хранят в холодильнике до использования.
Тарелки перед посевом нужно вынуть из холодильника, чтобы довести их до комнатной температуры.
PH среды должен составлять 7,5 ± 0,2. Цвет дегидратированной среды фиолетовый, а приготовленная среда коричневато-зеленая.
использование
Использование агара Hektoen рекомендуется для поиска бактерий рода Shigella и Salmonella в образцах стула и пищевых продуктов.
Возможность выделения этих бактерий значительно увеличивается, если образец предварительно обогащен специальными бульонами, такими как селенитный бульон, цистин-селенитный бульон, тетратионатный бульон и т. Д.
Посевной материал должен быть прочным, а посев производится штрихами. Планшеты инкубируют при 37 ° C в течение 24-48 часов в условиях аэробиоза.
Рекомендуется инкубация в течение 48 часов, потому что характеристики колоний более ясны для их интерпретации и дифференциации в это время.
контроль качества
Для контроля качества этой среды используются сертифицированные штаммы бактерий, такие как: Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Shigella flexneri ATCC 12022 и Shigella sonnei ATCC 25931.
Ожидаемые результаты следующие: Salmonella typhimurium и Salmonella enteritidis должны образовывать сине-зеленые колонии с черным центром или без него. В то время как виды Shigella будут расти как сине-зеленые колонии.
Также могут быть включены штаммы Escherichia coli ATCC 29212, Proteus mirabilis, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Enterococcus faecalis ATCC 29212 и Staphylococcus aureus ATCC 25923.
В этих случаях наблюдаемые характеристики следующие: E. coli и K. pneumoniae образуют в этой среде колонии лососево-оранжевого цвета с осадком того же цвета вокруг них. В то время как у Proteus развиваются сине-зеленые колонии с черным центром или без него.
В то время как S. aureus и E. faecalis необходимо подавлять, E. faecalis иногда удается вырасти в виде очень маленьких желтых колоний.
С другой стороны, поскольку эта среда не автоклавирована, важно оценить стерильность среды. Таким образом, из каждой приготовленной партии от одного до двух незасеянных планшетов следует инкубировать при 37 ° C в течение 24 часов в условиях аэробиоза.
Очевидно, никакого роста на пластине не ожидается.
Ограничения
- Виды Proteus могут развиваться в этой среде, и характеристики их колоний можно спутать с видами Salmonella или Shigella. По этой причине любая подозрительная колония должна быть подтверждена биохимическими исследованиями.
- Необходимо сопровождать использование этой среды другими менее селективными агарами, потому что, если искомый микроорганизм обнаруживается в низких концентрациях, он может не развиваться в этой среде.
-Не перегревайте во время приготовления, так как чрезмерное нагревание изменяет состав среды.
-Необычно могут появиться колонии сальмонелл, ферментирующих лактозу, которые могут остаться незамеченными.
Ссылки
- Авторы Википедии. Кишечный агар Гектоен. Википедия, свободная энциклопедия. 13 марта 2019 г., 23:38 UTC. Доступно на: .wikipedia.org / по состоянию на 16 марта 2019 г.
- BD Laboratories. Кишечный агар BD Hektoen (HE Agar). 2013. Доступно на: bd.com
- Britannia Laboratories. Hektoen Enteric Agar. 2015. Доступно на: britanialab.com.
- Дифко Франсиско Сориа Мельгисо Лаборатории. Гектоен-агар. Доступно на: f-soria.es
- Руководство Difco & BBL, Hektoen Enteric Agar. 2-е издание. Доступно на: bd.com/europe