АГАР ИЗ КУКУРУЗНОЙ МУКИ: ИСТОРИЯ ВОПРОСА, ПОДГОТОВКА И ПРИМЕНЕНИЕ - БИОЛОГИЯ - 2025

Агар кукурузной муки представляет собой твердая культуральная среда, низкая питательная питания, полезной для пересева некоторых грибов и для демонстрации хламидоспоры в штаммах Candida Albicans комплекса. По-английски он известен как агар с кукурузной мукой.

Обычная среда из кукурузной муки имеет очень простой состав, она содержит кукурузную муку, агар-агар и воду. Из-за низкого уровня питательности он идеально подходит для использования в течение умеренных периодов времени для поддержания грибковых штаммов, особенно черных грибов.

A. Графическое изображение комплекса Candida albicans на агаре из кукурузной муки. Б. Хламидоспоры комплекса Candida albicans, наблюдаемые под микроскопом, сформированные на агаре из кукурузной муки. Источник: A. GrahamColm / B. Автор: CDC / Dr. Уильям Каплан, предоставлено: Библиотека изображений общественного здравоохранения.

Споруляция комплекса Candida albicans в этой среде благоприятна, если 1% Tween 80 добавлен во время приготовления агара. Образование хламидоспор характерно для этого вида и практически единственного, поражающего человека.

Есть и другие виды, которые образуют хламидоспоры, но они вряд ли повлияют на человека, например Candida australis, присутствующая в помете пингвинов, или C. clausenii, который является редко встречающимся сапрофитом. Точно так же их могли образовать исключительно виды C. stellatoidea и C. tropicalis.

С другой стороны, добавление глюкозы к среде кукурузной муки способствует образованию пигментов у штаммов Trichophytom rubrum.

Важно подчеркнуть, что есть грибы, которые не образуют гифы или псевдогифы в агаре из кукурузной муки, такие как Cryptococcus neoformans, которые отличаются от других родов.

Агар из кукурузной муки можно приготовить в домашних условиях в лаборатории или использовать коммерческие среды.

основа

Кукурузная мука является субстратом, агар - отвердителем, а вода - растворителем.

Агар из кукурузной муки может быть дополнен твином 80 (сорбитанмоноолеат или полисорбат полиэфир 80). Этот состав снижает поверхностное натяжение среды благодаря своей эмульгирующей способности.

Он также создает враждебную среду, которая препятствует чрезмерному размножению клеток и стимулирует рост гиф, а также способствует образованию хламидоспор; последние рассматривали структуры сопротивления. Эта структура помогает идентифицировать виды Candida albicans.

В свою очередь, глюкоза в этой среде увеличивает способность некоторых грибов формировать пигмент.

Следует отметить, что среда из кукурузной муки с глюкозой не пригодна для демонстрации хламидоспор в комплексе Candida albicans.

подготовка

Приготовление домашнего агара из кукурузной муки

Взвесить 47 г желтой кукурузной муки и растворить в 500 мл дистиллированной воды. Нагрейте до 60 ºC, помешивая препарат в течение примерно 1 часа. Затем профильтровать через кусок марли и хлопка, при желании его можно снова профильтровать, пропустив препарат через фильтровальную бумагу Whatman № 2.

Довести объем до 1000 мл дистиллированной водой. Добавьте 17 г агар-агара, нагрейте до растворения. Автоклав в течение 15 минут при 121 ºC.

Подавать в стерильных чашках Петри. Хранить в холодильнике.

Цвет приготовленной среды беловатый с комковатой поверхностью.

Если вы хотите приготовить кукурузную муку с глюкозой к описанному выше препарату, добавьте 10 г глюкозы.

Технический агар из кукурузной муки

Взвесить 17 г обезвоженной среды и растворить в 1 литре дистиллированной воды. Смесь можно нагреть, осторожно встряхивая, до полного растворения. Стерилизовать в автоклаве при 121 ºC, 15 фунтов, в течение 15 минут.

Разлить по стерильным чашкам Петри. Дайте застыть. Переверните и храните в холодильнике до использования. Перед использованием закалять.

PH должен составлять 6,0 ± 0,2 при 25 ºC.

Агар из кукурузной муки с Твин 80

В соответствии с ISO 18416 агар из кукурузной муки должен быть приготовлен следующим образом:

Взвесьте 65 грамм на литр и добавьте 10 мл Твина 80. Нагрейте и кипятите несколько минут до растворения, стараясь не перегреться слишком сильно. Стерилизовать при 121 ºC в течение 15 минут.

Агар из кукурузной муки с глюкозой

Чтобы улучшить хромогенную способность колоний Trichophyton rubrum и дифференцировать их от T. mentagrophytes, к исходной смеси можно добавить 0,2% глюкозы. Вам не нужно принимать Твин 80, поскольку глюкоза подавляет образование хламидоспор.

использование

В основном агар из кукурузной муки предназначен для изучения штаммов Candida, помогая их идентифицировать посредством характерного наблюдения за хламидоспорами у видов albicans. То есть использование этого агара служит вспомогательным методом идентификации этих дрожжей.

На этом агаре могут развиваться как сапрофитные, так и патогенные виды, но каждый из них образует характерные мицелиальные структуры. Например, виды рода Torulopsis не производят мицелий и размножаются только бластоконидиями.

Точно так же виды Trichosporon и Geotrichum продуцируют артроконидии на агаре из кукурузной муки, и иногда бывает трудно отличить одно от другого.

Артроконидии рода Geotrichum образуют расширение гиф, напоминающее хоккейную клюшку.

Также получение пигментов с использованием агара из кукурузной муки с добавлением глюкозы полезно для идентификации Trichophytom rubrum.

Посевная

Подозрительные колонии Candida, полученные в первичной культуральной среде - агаре Сабуро - из клинических образцов, косметических средств, почв, среди прочего, пересевают на агаре из кукурузной муки. Среду засевают и инкубируют при 22 ° C в течение 24-48 часов. При необходимости время инкубации можно увеличить.

Проявление хламидоспор

Для этого агар из кукурузной муки с Твин 80 должен быть засеян методом Далмау. Этот метод заключается в том, чтобы взять часть подозреваемой колонии платиновой ручкой и сделать три параллельных надреза в середине, удерживая ручку под углом 45º. Разрезы следует разделять на расстоянии 1 см друг от друга.

Затем на засеянные полосы помещают предварительно обожженный покровный объект так, чтобы половина была покрыта, а другая открыта.

Инкубируйте засеянные чашки при 30 ° C в течение 48-72 ч, а затем исследуйте под микроскопом через покровное стекло.

Поддержание грибковых штаммов

Для поддержания штаммов засеянные и выращенные чашки хранят в холодильнике (от 4 до 8 ºC). Таким образом, они могут длиться несколько недель и использоваться в учебных или исследовательских целях.

контроль качества

Для контроля стерильности планшет инкубируют без инокуляции при комнатной температуре, ожидается, что не будет роста или изменения цвета.

Для контроля качества могут быть высеяны известные штаммы, такие как: Staphylococcus aureus, ATCC 6538, Escherichia coli ATCC 25922, Aspergillus niger ATCC 16404, Candida albicans ATCC 1023, Saccharomyces cerevisiae ATCC 9763.

Ожидаемые результаты - частичное ингибирование S. aureus и E. coli. У остальных штаммов ожидается удовлетворительный рост.

Aspergillus niger растет с черными и спорулированными колониями приблизительно за 5 дней инкубации.

Колонии дрожжей Candida albicans с продуцированием хламидоспор.

Saccharomyces cerevisiae продуцируют большие дрожжевые клетки.

Ограничения

На дне чашки образуется желтый осадок, который не следует путать с колониями.

Ссылки

1. Neogen Laboratories. Кукурузный агар. Доступно на: foodsafety.neogen.com.
2. Microkit средств массовой информации. Кукурузный агар. Доступно на: Medioscultivo.com.
3. Линарес М., Солис Ф. Руководство по идентификации дрожжей. Доступно по адресу: http: //www.guia.revibero.
4. Urcia F, Guevara M. Rev. Perú Med. Exp. Общественное здравоохранение, 2002 г .; 19 (4): 206-208. Доступно на: Scielo.com
5. Касас-Ринкон Г. Общая микология. 1994. 2-е изд., Центральный университет Венесуэлы, Библиотечные издания. Венесуэла Каракас.
6. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Микробиологический диагноз Бейли и Скотта. 12 изд. Редакция Panamericana SA Аргентина.
7. Конеман Э, Аллен С., Джанда В., Шрекенбергер П., Винн В. (2004). Микробиологическая диагностика. 5-е изд. Редакция Panamericana SA Аргентина.
8. Кастильо Э. Сравнительное изучение некоторых макро- и микроскопических методов выделения и распознавания рода Candida. Колумбийский преподобный фармацевтических химических наук. 1970; 3 (1): 33-57. Доступно на: Ciencias.unal.edu.co