Агар Эндо или Эндо среда представляет собой твердую среду, дифференциал и с некоторой степенью селективности культуры. Первоначальная формула была создана Эндо в 1904 году, чтобы отличить ферментирующие лактозу бактерии от неферментирующих. Первоначально она была разработана для изоляции Salmonella typhi, но позже цель среды превратилась в поиск колиформ.
Принцип Endo Agar остался прежним, но его формулировка за годы претерпела бесчисленное количество изменений. В настоящее время среда состоит из пептического гидролизата животных тканей, лактозы, гидрофосфата калия, сульфита натрия, основного фуксина и агара.
A: Virgin Endo Agar B: Засеянный Endo Agar, в середине агара вы можете заметить металлический блеск штамма E. coli. Источник: A: Strolch1983 / B: LenkaM
Основное использование среды было связано с выделением и дифференцировкой грамотрицательных бактерий, принадлежащих к семейству Enterobacteriaceae и другим близким семействам.
В течение долгого времени он использовался для обнаружения колиформных бактерий в образцах воды, молочных продуктов и пищевых продуктов, но сегодня эта среда была вытеснена другими с аналогичными функциями. Однако некоторые микробиологические лаборатории используют этот агар для выделения Enterobacteriaceae из образцов клинического происхождения.
основа
Эндо-агар содержит пептоны, которые служат источником аминокислот, азота, углерода и энергии, необходимых для роста нетребовательных микроорганизмов.
С другой стороны, несколько селективный характер агара обеспечивается добавлением сульфита натрия и основного фуксина; оба компонента частично или полностью подавляют рост большинства грамположительных бактерий.
Дифференциальный характер определяется наличием ферментируемого углевода, которым в данном случае является лактоза и основной фуксин, который также служит индикатором pH.
Грамотрицательные бактерии, которые растут на этом агаре и способны ферментировать лактозу, образуют сильные розовые колонии; будучи патогномоничным для Escherichia coli, образуются темно-красные колонии с переливающимся зеленоватым металлическим блеском. Это связано с высоким образованием кислот в результате углеводного брожения.
Следует отметить, что среда вокруг колоний также приобретает ярко-розовый цвет. В то время как грамотрицательные палочки, не ферментирующие лактозу, образуют бледно-розовые колонии, похожие на средние или бесцветные.
Гидрофосфат калия уравновешивает pH среды, а агар является компонентом, обеспечивающим твердую консистенцию.
подготовка
Эндо агар
Взвешивают 41,5 г обезвоженной среды и растворяют в 1 литре дистиллированной воды. Нагрейте смесь при частом перемешивании до полного растворения среды. Стерилизовать в автоклаве при 121 ° C и давлении 15 фунтов в течение 15 минут.
При извлечении из автоклава дайте остыть до температуры примерно 45-50 ° C, встряхните смесь до гомогенизации перед подачей на стол. Разлить по 20 мл в стерильные чашки Петри.
Дайте пластинам застыть, переверните и храните в плакировке или оберните темной бумагой перед хранением в холодильнике. Очень важно защитить подготовленную среду от попадания прямых солнечных лучей. Лучше всего приготовить именно ту сумму, которая вам понадобится.
Если они хранятся в холодильнике, перед использованием следует дать тарелкам нагреться.
PH среды должен быть от 7,2 до 7,6, а цвет приготовленной среды - бледно-розовый.
Вариант агара M-Endo
Существует еще один вариант агара Эндо (м-Эндо), который следует формуле Маккарти, Делани и Грассо, который содержит больше соединений и различается по форме приготовления.
Этот вариант содержит: лактозу, триптозу, ферментный гидролизат казеина, ферментативный гидролизат животных тканей, хлорид натрия, двухосновный фосфат калия, сульфит натрия, дрожжевой экстракт, одноосновный фосфат калия, основной фуксин, дезоксихолат натрия, лаурилсульфат. натрий и агар.
В этом случае 51 г обезвоженной среды взвешивают и суспендируют в 1 литре дистиллированной воды, содержащей 20 мл этанола.
Слегка нагрейте, помешивая, пока среда полностью не растворится. Его нельзя перегревать и автоклавировать. Когда смесь станет однородной, подавайте в стерильные чашки Петри и дайте ей застыть.
использование
В некоторых странах он все еще используется для подсчета общих и фекальных колиформ в пробах продуктов питания и воды, особенно на наличие кишечной палочки в качестве основного индикатора фекального загрязнения.
M-Endo Agar рекомендован Американской ассоциацией общественного здравоохранения (APHA) для мониторинга и контроля программ дезинфекции и очистки сточных вод, а также для оценки качества питьевой воды.
Наиболее распространенным методом является мембранная фильтрация после обогащения образца бульоном лаурилсульфата в течение 2–4 часов.
Его также можно использовать в качестве заменителя агара EMB при микробиологическом анализе пищи и воды методом наиболее вероятного числа (MPN), в частности, на полной подтверждающей фазе для подтверждения наличия E. coli из мутных бульонов EC.
контроль качества
Для оценки качества приготовленной партии агара Эндо высевают известные или сертифицированные контрольные штаммы.
Среди штаммов, которые могут быть использованы для этой цели, входят: Escherichia coli ATCC 25922, Escherichia coli ATCC 11775, Enterobacter cloacae ATCC 13047, Klebsiella pneumoniae ATCC 13883, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Shigella flexneri ATCC 12022, Proteus 1173 miracaliscus ATCC 1400 и EnterCoCC 1400 miracaliscus. ,
Штаммы высевают истощением и инкубируют при 37 ° C в течение 24 часов в условиях аэробиоза.
Ожидаемые результаты:
- Для Escherichia coli: сильные красные колонии с металлическим блеском.
- Для E. cloacae и K. pneumoniae колонии должны быть слизистыми розового цвета.
- В случае S. typhimurium, S. flexneri и P. mirabilis колонии обычно бледно-розовые или бесцветные.
- Наконец, ожидается, что E. faecalis будет частично подавлен, поэтому его рост должен быть слабым с очень маленькими сильными розовыми колониями.
Ограничения
-Среда Эндо имеет низкую селективную силу, поэтому возможно, что некоторые грамположительные микроорганизмы, такие как стафилококк, энтерококк и даже дрожжи, могут расти.
- В этой среде могут развиваться другие бациллы, не принадлежащие к семейству Enterobacteriaceae, такие как Pseudomonas sp и Aeromonas sp. Характеристики этих штаммов - бесцветные колонии неправильной формы.
-Эта подготовленная среда очень чувствительна к свету, поэтому длительное воздействие на нее приводит к ухудшению индикаторной системы, необратимо повреждая среду.
- Компоненты среды считаются канцерогенными, поэтому следует избегать прямого контакта.
-Обезвоженная среда очень гигроскопична и должна храниться в оригинальном контейнере при комнатной температуре, плотно закрытой и в сухой среде.
Ссылки
- BD Laboratories. Эндо Агар. 2013. Доступно на: bd.com
- Neogen Laboratories. М Эндо Агар. Доступно на: foodsafety.neogen.com
- Эндо Агар. Википедия, свободная энциклопедия. 7 сен 2017, 08:27 UTC. 28 фев 2019, 22:55. Доступно на: en.wikipedia.
- Лаборатория MercK. Эндо-агар. 2019. Доступно на: merckmillipore.com
- Технический паспорт лабораторий. M –Endo Agar LES. 2015. Доступно на: liofilchem.net.