EMB - агар является селективным и дифференциальная среда , используемая для культивирования твердой изоляции грамотрицательных бацилл, особенно энтеробактерий и других грам - отрицательных бактерий нетребовательных. Он также известен под аббревиатурой EAM, что означает эозин-метиленовый синий.
Эта среда была создана Холт-Харрисом и Тигом в 1916 году. Она содержит пептон, лактозу, сахарозу, дикалийфосфат, агар, эозин, метиленовый синий и воду. Он очень похож на агар МакКонки, особенно при использовании модифицированного агара Levine's EMB, который не содержит сахарозы.
Металлический блеск Escherichia coli на агаре EMB Источник: Кармен Морено Гонсалес, из Wikimedia Commons
Фактически, каждая лаборатория решает, работать ли с одним или другим, поскольку они выполняют одну и ту же функцию, хотя биохимически они различны.
У него даже есть тот же недостаток, что и у классического агара МакКонки, с точки зрения образования роения представителями рода Proteus. Поэтому, чтобы избежать этого явления, концентрацию агара можно увеличить до 5%.
основа
выборочный
EMB-агар является тонко селективным, поскольку он содержит анилиновые красители (эозин и метиленовый синий), которые действуют как ингибиторы, предотвращая рост большинства грамположительных бактерий и некоторых привередливых грамотрицательных палочек.
Однако этот агар имеет недостаток, заключающийся в том, что некоторые грамположительные бактерии могут сопротивляться присутствию ингибирующих веществ и расти в виде небольших бесцветных точечных колоний, таких как Enterococcus faecalis и некоторые Staphylococcus.
Некоторые дрожжи также могут расти, например, комплекс Candida albicans, который дает очень маленькие розовые колонии. Хламидоспоры могут развиваться даже из этих дрожжей, если образец засеян глубоко.
дифференцированный
С другой стороны, агар EMB также является дифференциальной средой, поскольку эти красители вместе (эозин и метиленовый синий) обладают свойством образовывать осадок при кислом pH, поэтому они служат индикаторами его образования.
Таким образом, бактерии, слабо ферментирующие лактозу или сахарозу, образуют пурпурные колонии в течение 24-48 часов. Например, роды Klebsiella, Enterobacter и Serratia.
Те бактерии, которые сильно ферментируют лактозу, такие как Escherichia coli, или сахароза, такие как Yersinia enterocolitica или Proteus penneri, образуют зеленовато-черный осадок, придающий этим видам характерный металлический блеск.
Следует отметить, что при использовании среды EMB levine (без сахарозы) Yersinia enterocolitica и Proteus penneri будут давать прозрачные колонии.
Бактерии, которые не ферментируют лактозу или сахарозу, питаются присутствием пептонов, которые обеспечивают аминокислоты и азот, необходимые для роста бактерий, и образуют прозрачные колонии. Например, роды Salmonella и Shigella, среди прочих.
Точно так же важно отметить, что род Acinetobacter может представлять колонии лавандово-голубого цвета, даже если он не является ферментером лактозы или сахарозой, но имеет свойство фиксировать метиленовый синий на своей клеточной стенке. Это также может произойти с другими окислительными бактериями.
подготовка
Исходная дегидратированная среда имеет светло-бежевый цвет.
Для приготовления этой культуральной среды необходимо взвесить 36 г обезвоженной среды и суспендировать в колбе, содержащей один литр дистиллированной воды.
Дать смеси постоять в течение 5 минут, поднести колбу к источнику тепла, интенсивно и постоянно перемешивая, пока она не закипит и не растворится полностью.
Затем уже растворенную культуральную среду необходимо стерилизовать в автоклаве при 121 ° C в течение 15 минут.
По истечении этого времени его вынимают из автоклава и оставляют на короткое время. Затем в каждую стерильную чашку Петри наливают 15-20 мл агара, еще теплого (45-50 ° C). Среда должна быть лакмусовой голубой.
После сервировки чашки оставляют слегка открытыми, пока агар не остынет. Затем их накрывают и дают полностью затвердеть. Затем их помещают в перевернутые держатели тарелок и хранят в холодильнике (8 ° C) до использования.
Эта процедура предпочтительно проводится в вытяжном шкафу с ламинарным потоком или перед горелкой Бунзена, чтобы избежать загрязнения.
Важно помнить, что каждый коммерческий дом указывает количество, которое нужно взвесить для приготовления питательной среды.
Конечный pH среды должен составлять 7,2 ± 0,2.
Приложения
Эта среда используется для высева мочи и фекалий или любых клинических образцов, особенно если подозревается присутствие непривередливых грамотрицательных бацилл, таких как бациллы, принадлежащие к семейству Enterobacteriaceae, которые очень хорошо растут на этой среде.
Энтеропатогенные бактерии родов Shigella и Salmonella отличаются бесцветными или слегка янтарными колониями.
Также растут и другие бациллы, не ферментирующие лактозу, такие как Aeromonas, Pseudomonas, Acinetobacter и другие.
Аналогичным образом, эта среда очень полезна для микробиологического анализа пищи и воды, поскольку она идеальна для полной подтверждающей фазы определения колиформных бактерий, то есть для подтверждения присутствия E. coli из мутных бульонов ЭК из методики наиболее вероятных чисел (MPN).
контроль качества
Чтобы убедиться, что свежеприготовленная питательная среда работает хорошо, можно высадить контрольные штаммы для наблюдения за характеристиками колоний и проверки того, что они дают ожидаемые результаты.
Для этого можно использовать штаммы ATCC или хорошо идентифицированные штаммы E. coli, Enterobacter aerogenes, Klebsiella sp, Salmonella typhimurium, Shigella flexneri, Pseudomonas aeruginosa и некоторых грамположительных бактерий, таких как S. aureus.
Ожидается, что E. coli образует хорошо развитые сине-черные колонии с зеленым металлическим блеском. Принимая во внимание, что Enterobacter aerogenes и Klebsiella sp должны давать хорошо развитые синевато-черные слизистые колонии.
С другой стороны, Salmonella typhimurium и Shigella flexneri должны образовывать большие колонии, бесцветные или слегка янтарные.
Наконец, род Pseudomonas aeruginosa растет в виде бесцветных колоний неправильного размера, тогда как грамположительные бактерии должны полностью подавляться или расти редко с очень маленькими колониями.
Последние мысли
Иногда стерилизация приводит к уменьшению содержания метиленового синего до среднего оранжевого цвета. Чтобы метиленовый синий окислился и приобрел пурпурный цвет, его нужно аккуратно перемешать, пока цвет не восстановится.
Кроме того, после стерилизации краситель может выпасть в осадок, поэтому перед подачей в чашки Петри его следует хорошо перемешать.
Ссылки
- Камачо А., Джайлс М., Ортегон А., Палао М., Серрано Б. и Веласкес О. 2009. Методы микробиологического анализа пищевых продуктов. 2-е изд. Химический факультет УНАМ. Мексика.
- Карранса С., Леон Р., Фалькон Н., Нойман А., Кромм С. Характеристика и распространение потенциально патогенных штаммов Escherichia coli, выделенных от цыплят-бройлеров с птицефабрик в Перу. Преподобный investiga. ветеринарный Перу 2012 23 (2): 209-219. Доступно на: scielo.org.
- Laboratorios Conda SA Агар с эозином и метиленовым синим. 2010. Доступно на: condalab.com.
- Britannia Laboratories. Levine EMB (с эозином и метиленовым синим) 2011 г. Доступно на: britanialab.com
- BD Laboratories. BD EMB Agar (агар с эозин-метиленовым синим), модифицированный. 2013. Доступно на: bd.com
- Конеман Э, Аллен С., Джанда В., Шрекенбергер П., Винн В. (2004). Микробиологическая диагностика. (5-е изд.). Аргентина, редакция Panamericana SA
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Микробиологическая диагностика Бейли и Скотта. 12 изд. Аргентина. Редакция Panamericana SA