АГАР ЧАПЕКА: ОБОСНОВАНИЕ, ПОДГОТОВКА, ИСПОЛЬЗОВАНИЕ И ОГРАНИЧЕНИЯ - БИОЛОГИЯ - 2025

Чапека (ЦС) является селективной твердой средой , специально предназначенной для выращивания сапрофитных бактерий и грибов. Он был создан ботаником Фридрихом Иоганном Францем Чапеком польского происхождения и американским химиком Артуром Вейландом Доксом; по этой причине этот агар также известен как среда Чапека-Докса.

Исходная среда была жидкой, но позже был добавлен агар, чтобы сделать среду твердой. Среда Чапека состоит из нитрата натрия, фосфата калия, сульфата магния, хлорида калия, сульфата железа, сахарозы, агара и дистиллированной воды.

Агар Чапека A. Aspergillus parasiticus B. Aspergillus fumigatus Источник: A. Medmyco / B. Фото: д-р Дэвид Мидгли. Wikipedia.com

PH агара Чапека составляет 7,3, но есть вариант, в который добавляется 10% молочная кислота, pH которой остается на уровне 3,5. Эта кислая среда используется для выращивания ацидофильных микроорганизмов.

С другой стороны, некоторые коммерческие компании изменили состав агара Чапека, заменив сульфат магния и фосфат бикарбоната глицерофосфатом; эта модификация предотвращает образование осадка фосфата магния, наблюдаемого при использовании обычной формулы. Точно так же есть еще один вариант, в который добавляют дрожжевой экстракт.

Наконец, агар Чапека рекомендован Американской ассоциацией общественного здравоохранения APHA для изучения Actinomycetes sp, Aspergillus sp, Paecilomyces sp и Penicillium sp. Эти виды характеризуются тем, что являются экологическими микроорганизмами и условно-патогенными микроорганизмами.

основа

Эта среда содержит сахарозу; этот углевод служит источником углерода, а нитрат натрия - источником азота, но, в отличие от других сред, азот неорганический.

По этой причине среда Чапека считается селективной, поскольку могут расти только микроорганизмы, способные использовать неорганические соединения в качестве единственного источника азота.

В качестве регулирующего вещества осмолярности среды выступает двухкалийфосфат. Со своей стороны, сульфат магния, хлорид калия и сульфат железа являются необходимыми минералами для роста сапрофитных (свободноживущих) микроорганизмов. Эта формула образует осадок фосфата магния.

Наконец, агар-агар - это соединение, которое обеспечивает твердую консистенцию среды, а вода является растворителем для всех компонентов.

С модифицированной формулой агара Чапека не образуется осадок, и она улучшает рост некоторых грибов.

Чрезвычайная кислотность кислотного агара Чапека делает его более селективной средой, позволяющей расти только ацидофильным микроорганизмам, способным использовать неорганический азот. Между тем, дрожжевой агар Чапека улучшает характеристики некоторых грибов.

подготовка

Средний Чапек-Докс

Взвешивают 49 г обезвоженной питательной среды и растворяют в дистиллированной воде. Подать огонь до кипения. Часто встряхивайте смесь до полного растворения.

-Чапек агар клинья

Распределить растворенную смесь по пробиркам и автоклавировать при 121 ° C в течение 15 минут. При извлечении из автоклава гомогенизируйте перед укладкой пробирок и дайте им застыть.

-Чапек агаровые чашки

Автоклавировать растворенную смесь при 121 ° C в течение 15 минут, дать ей остыть до 50 ° C, гомогенизировать и вылить 20 мл в стерильные чашки Петри. Дать застыть, перевернуть и хранить в холодильнике до использования.

PH должен оставаться на уровне 7,3 ± 0,2. Цвет дегидратированной среды белый, а приготовленная среда - светло-янтарная, слегка мутная из-за наличия флокулирующего осадка.

Среда Чапека при кислом pH

Приготовьте, как уже описано, но добавив 10 мл стерильной 10% молочной кислоты на каждый литр приготовленной среды. Модифицированная среда Чапека должна иметь pH 3,5 ± 0,2.

Модифицированная среда Чапека

Взвешивают 45,4 г обезвоженной среды и растворяют в 1 литре воды. В остальном подготовка такая же, как описано выше. Цвет дегидратированной среды белый, а приготовленная среда - беловатая. Конечный pH среды составляет 6,8 ± 0,2.

Чапек-дрожжевая среда

Также называется агаром с дрожжевым экстрактом Чапека (CYA). Он содержит элементы классического агара Чапека плюс дрожжевой экстракт.

использование

Среда Чапека используется для поиска сапрофитных микроорганизмов в образцах почвы, овощей, зерновых, воздуха, насекомых и других.

Агар Чапека при кислом pH используется для роста ацидофильных микроорганизмов, а модифицированный агар Чапека особенно полезен для образования хламидоспор у видов комплекса Candida albicans.

Наконец, дрожжевой агар Чапека очень полезен для выделения Aspergillus и Penicillium.

Посевная

-Чапек агар

Для поиска актиномицетов в почве действуйте следующим образом: образец обрабатывают фенолизированной водой в течение 30 мин, а затем 1 мл суспензии высевают на агар Чапека. Инкубируйте при 28 ° C в течение 5-7 дней.

Образцы овощей, зерна и насекомых помещают непосредственно на агар. Вы также можете сделать разведения и засеять 0,1 мл на поверхности агара.

-Модифицированный агар Чапека

Для посева используют прямую петлю или иглу, пропитывают тампоном и засевают агар путем прокола до касания основания чашки. Инкубируйте в течение 24 часов при 28 ° C и исследуйте под микроскопом над и под планшетом, чтобы увидеть, образовались ли хламидоспоры.

Температура и время инкубации

Температура и время инкубации варьируются в зависимости от типа выделяемого микроорганизма. Планшеты обычно инкубируют от одной до двух недель в диапазоне температур от 20 до 25 ° C.

Однако для некоторых штаммов существуют определенные условия. Например, большинство видов рода Aspergillus оптимально растут при 30 ° C; однако A. fumigatus растет при 50 ° C.

Что касается времени инкубации, одна или две недели - это нормально, однако Candida albicans может развиваться через 24-48 часов при 25 ° C.

Характеристики некоторых колоний на этой среде

-Penicillium atrovenetum

Развивается через 12 дней инкубации при 27 ° C. Их колонии небольшие (25 мм).

Колонии имеют бархатистый вид с четко выраженной белой границей и сине-зеленым оттенком в центре, который с возрастом становится серым. Обратная сторона колонии оранжевая, что делает середину такого же цвета за счет образования пигмента.

-Aspergillus niger

Он развивается с мицелием от белого до желтого и черными спорами.

-Грибковые микроорганизмы албиканс

Развиваются кремовые светло-бежевые колонии. В модифицированном агаре Чапека он образует хламидоспоры.

-Aspergillus parasiticus

Темно-зеленый мицелий развивается через 7 дней при 25 ° C.

контроль качества

Для оценки качества питательной среды можно высаживать сертифицированные контрольные штаммы, такие как: Aspergillus niger MKTA 16404, Candida albicans MKTA 10231.

Aspergillus niger развивает мицелий от белого до желтого и черные споры приблизительно за 5 дней, тогда как Candida albicans будет иметь удовлетворительный рост через 24 часа инкубации при 25 ° C; колонии кремового цвета.

Ограничения

Некоторые исследования показали, что для выделения актиномицетов агар с лучшим урожаем - это агар с картофельной декстрозой, на втором месте агар Чапека, но для выделения Aspergillus и Penicillium агар Чапека является наиболее эффективным.

Ссылки

1. Dávila M, et al. Антагонистические актиномицеты против фитопатогенных грибов, имеющих сельскохозяйственное значение. Преподобный Мекс. Наука. Agríc 2013, 4 (8): 1187-1196. Доступно на: scielo.org.
2. Luna M, Lozada Y, Wheats Á. Выделение штаммов Aspergillus niger, продуцирующих охратоксин А, в хранящемся зеленом кофе (Coffea arabica). Преподобный Мекс. Mic. 2010; 32: 63-68. Доступно на.scielo.org.
3. Авторы Википедии. Чапек средний. Википедия, свободная энциклопедия. 13 января 2019 г., 20:30 UTC. Доступно на: en.wikipedia.org
4. Conda Pronadisa Laboratories. Модифицированный агар Чапека-Докса. Доступно на: condalab.com
5. Microkit средств массовой информации. Czapek-Dox Agar. Доступен на: Medioscultivo.com