КЛЕД-АГАР: ОБОСНОВАНИЕ, ПРИМЕНЕНИЕ И ПОДГОТОВКА - БИОЛОГИЯ - 2025

CLED агар (цистин-Лактоза-Электролит-Дефектный) представляет собой твердый культуральную среду дифференциал, используемый для диагностики инфекций мочевых путей. Состав питательной среды разработан для хорошего роста патогенов в моче и идеально подходит для количественного определения колониеобразующих единиц (КОЕ).

Питательная среда CLED неселективна, поскольку в ней могут расти грамотрицательные и грамположительные микроорганизмы. Но это не проблема, так как большинство ИМП вызывается только одним типом микроорганизмов.

CLED агар

В случае полимикробных инфекций можно получить 2 или 3 разных бактерии, но это очень редко и в большинстве случаев это зараженные образцы.

К грамотрицательным бактериям, которые могут расти в этой среде, относятся бациллы, принадлежащие к семейству Enterobacteriaceae, и другие кишечные бациллы, уропатогены, наиболее часто выделяемые в образцах мочи, следующие: Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Proteus mirabilis, Morganella morganii, Pseudomonas aeruginosa, среди прочих.

Аналогичным образом, среди грамположительных бактерий, которые могут расти в этой среде, есть Staphylococcus aureus, Staphylococcus saprophyticus, Enterococcus faecalis, Streptococcus agalactiae, Corynebacterium sp, Lactobacillus sp и даже дрожжи, такие как комплекс Candida albicans.

Однако из-за химического состава среды она не допускает роста некоторых требовательных патогенов мочеполовой системы, таких как Neisseria gonorrhoeae, Gardnerella vaginalis и других.

Обоснование использования CLED-агара

Питательная среда CLED содержит мясной экстракт, панкреатический гидролизат казеина и гидролизат желатина в качестве источника энергии. Они обеспечивают питательные вещества для развития нетребовательных бактерий.

Он также содержит цистин, аминокислоту, которая способствует росту колиформных бактерий, которые отличаются своим небольшим размером.

Точно так же она содержит лактозу как ферментируемый углевод, по этой причине эта среда является дифференцированной; возможность отличить ферментирующие бактерии от не-лактозной ферментации.

Ферментирующие бактерии вызывают изменение pH среды за счет производства кислот, образования желтых колоний, в то время как неферментирующие бактерии не вызывают изменений в среде, поэтому они приобретают цвет исходного агара, зеленый.

Реакция ферментации выявляется благодаря наличию индикатора pH, которым в этой среде является бромтимоловый синий.

С другой стороны, низкая концентрация электролитов в среде подавляет типичный инвазивный рост рода Proteus, называемый эффектом роения. Это дает преимущество перед другими средами, поскольку позволяет подсчитывать КОЕ, в том числе, если присутствует род Proteus.

Однако низкая концентрация электролитов подавляет рост некоторых видов рода Shigella, что является недостатком по сравнению с другими средами.

Обоснование использования агара CLED (Bevis)

Существует вариант или модификация этой среды, созданная Бевисом, который включил кислый фуксин (индикатор Андраде) в исходную композицию. Он работает вместе с бромтимоловым синим, чтобы отличить ферментирующие от неферментирующих бактерий.

Разница между традиционной и модифицированной средой заключается в цвете, который принимают колонии. В случае бактерий, ферментирующих лактозу, колонии становятся красновато-оранжевыми с розовым или красным ореолом, а неферментирующие - голубовато-серыми.

Приложения

CLED-агар используется исключительно для посева образцов мочи. Эта среда особенно часто используется в европейских лабораториях, в то время как в Америке она используется реже.

Для получения надежных результатов сбор проб должен соответствовать определенным параметрам, включая:

• Не принимать антибиотики перед взятием проб.
• Желательно брать мочу утром, так как она более концентрированная, когда нет возможности взять образец инвазивными методами.
• Перед взятием образца хорошо промойте гениталии.
• Отбросьте первую струю мочеиспускания, а затем поместите емкость.
• Соберите от 25 до 30 мл мочи в стерильный контейнер с хорошей этикеткой.
• Немедленно доставьте в лабораторию, окруженную льдом.
• Его необходимо обработать в течение 2 часов с момента выдачи или хранить в холодильнике при 4 ° C не более 24 часов.

Посев образцов мочи

Образец мочи следует разбавить 1:50.

Для разведения поместите 0,5 мл мочи пациента и разведите 24,5 мл стерильного физиологического раствора.

Отмерьте 0,1 мл разбавленной мочи и распределите поверхность шпателем Дригальского на среде CLED. Это лучший метод посева для подсчета колоний. По этой причине он используется в образцах мочи, поскольку результаты должны быть выражены в КОЕ / мл.

Чтобы определить количество полученных колоний, действуйте следующим образом: подсчитайте количество колоний на планшете и умножьте на 10, а затем на 50. Это даст вам количество КОЕ / мл мочи.

интерпретация

Количество выше 100 000 КОЕ / мл - указывает на инфекцию мочевыводящих путей.

Количество ниже 1000 КОЕ / мл - Нет инфекции

Подсчитывает от 1000 до 10 000 КОЕ / мл. Сомнительно, возможное загрязнение, повторный отбор проб.

МНЕ БЫ

Колонии, выращенные на агаре CLED, должны иметь грамм, и в зависимости от морфотинториальных характеристик микроорганизма проводится определенное субкультивирование.

Например, если это грамотрицательная палочка, ее высевают на агар МакКонки, где подтверждается ферментация лактозы или ее отсутствие. Кроме того, для проведения теста на оксидазу прилагается питательный агар.

Если по Грамму обнаруживаются грамположительные кокки, его можно пересеять на соленый маннитоловый агар и на питательный агар. В последнем проводится тест на каталазу. Наконец, если наблюдаются дрожжи, его высевают на агар Сабуро.

Многие лаборатории избегают использования среды CLED и предпочитают использовать только кровяной агар, MacConkey и питательный агар для посева образцов мочи.

подготовка

В колбе с одним литром дистиллированной воды растворите 36,2 г порошка агара CLED. После 5 минут отстоя нагрейте ресуспендированный агар, постоянно перемешивая, до кипения в течение 1 минуты.

Затем стерилизуйте при 121 ° C в течение 15 минут в автоклаве. По истечении времени его вынимают из автоклава и дают остыть до температуры 45 ° C. Затем в каждую стерильную чашку Петри наливают по 15-20 мл.

Процедура подачи тарелок должна выполняться внутри вытяжного шкафа с ламинарным потоком или перед горелкой Бунзена, чтобы избежать загрязнения.

Подаваемые тарелки оставляют для застывания, складывают в перевернутую решетку и хранят в холодильнике (2-8 ° C) до использования.

Конечный pH приготовленной среды должен составлять 7,3 ± 0,2.

Ссылки

1. Рекомендации по микробиологической диагностике мочевой инфекции. Чил. infectol. 2001; 18 (1): 57-63. Доступно на: scielo.org.
2. Панчи Дж. Идентификация микробного агента, вызывающего инфекции мочевыводящих путей у стационарных пациентов, подвергающихся катетеризации мочевого пузыря. 2016. Бакалавриат для получения степени бакалавра клинической лаборатории. Технический университет Амбато. Эквадор.
3. Britannia Laboratories. CLED средний. Доступно на: britanialab.com.
4. Renylab Laboratories. Инструкция по применению, CLED Agar. 2013 Доступно на: es.renylab.ind.br.
5. Cultimed Laboratories. Основное руководство по микробиологии. Доступно на: ictsl.net.
6. Муньос П., Серсенадо Э., Родригес-Крейксемс М., Диас, доктор медицины, Висенте Т., Боуза Э. Вариант агара CLED в рутинном посеве мочи. Перспективная и сравнительная оценка. Diagn Microbiol Infect Dis. 1992; 15 (4): 287-90.
7. Гарсия П., Паредес Ф., Фернандес дель Баррио М. (1994). Практическая клиническая микробиология. Университет Кадиса, 2-е издание. Служба публикаций УЦА.