Цетримид агар или цетримид является селективной твердой культуральной средой предназначена для выделения синегнойной палочки. Он основан на демонстрации производства характерных пигментов этого вида и был сделан из модификации Техагара, созданной Кингом, Уордом и Рэйни.
Исходная формула содержала соли хлорида магния, сульфата калия, панкреатического переваривания желатина и агар-агара. Модификация формулы заключалась в добавлении цетримида (цетилтриметиламмонийбромид) и глицерина.
Цетримидный агар, засеянный Pseudomonas aeruginosa Источник: BiotechMichael, из Wikimedia Commons
Цетримидный агар полезен для микробиологического исследования образцов, в которых предполагается наличие синегнойной палочки. Следует отметить, что эта бактерия чрезвычайно важна, потому что, хотя она является частью нормальной микробиоты окружающей среды, она часто ведет себя как условно-патогенный микроорганизм.
По этой причине одной из наиболее распространенных проблем, вызываемых этим микробом, являются внутрибольничные инфекции, то есть те, которые возникают в больничной среде, нападая на пациентов с ослабленной иммунной системой.
С другой стороны, из-за сродства этого микроорганизма к влажности наиболее уязвимыми целями заражения являются: вспомогательное дыхательное оборудование, лекарства, небулайзеры, источники воды, кондиционеры, дезинфицирующие средства, мыльные растворы, растворы для инъекций, открытые раны. , катетеры, мочевыводящие пути и др.
В этом смысле цетримидный агар полезен для проведения микробиологического контроля и культивирования ранее упомянутых элементов.
основа
Цетримидный агар основан на способности среды стимулировать рост P. aeruginosa, стимулировать выработку его пигментов и, в свою очередь, подавлять рост других микроорганизмов.
Эти свойства обусловлены функцией каждого из его компонентов. Присутствующий желатиновый пептон служит источником азота, витаминов и минералов. Глицерин или глицерин работают как источник углерода.
Со своей стороны, цетримид (бромид цетилтриметиламмония) - это вещество, которое подавляет рост бактерий, отличных от P. aeruginosa, включая другие виды, принадлежащие к тому же роду.
Ингибирование происходит потому, что цетрамид действует как катионный детергент, способный дестабилизировать плазматическую мембрану большинства бактерий, за исключением P. aeruginosa и некоторых других, которым удается выжить.
С другой стороны, он содержит хлорид магния и сульфат калия. Эти соединения стимулируют фенотипическую экспрессию, связанную со способностью Pseudomonas aeruginosa продуцировать различные пигменты, включая: пиоцианин, пиовердин, пиорубин, пиомеланин и флуоресцеин. Наконец, он содержит агар-агар, придающий ему твердую консистенцию.
интерпретация
Интерпретация роста, полученного в этом агаре, проводится следующим образом:
Наблюдение за круглыми, гладкими колониями с правильными краями, с образованием сине-зеленоватых, зеленых, коричневых или красноватых пигментов, а также с испусканием фруктового запаха (аминоацетофенон) является предполагаемым результатом присутствия этой бактерии в указанном образце.
С другой стороны, наблюдение яркого зеленовато-желтого пигмента на колониях указывает на P. aeruginosa, когда пластина подвергается воздействию ультрафиолетового света.
Флуоресценция колоний P. aeruginosa на цетримидном агаре в ультрафиолетовом свете.
Следует отметить, что каждый наблюдаемый цвет обусловлен выработкой определенного пигмента. Сине-зеленый пигмент соответствует выработке пиоцианина, зеленый - пиовердину, красноватый - пиорубину, коричневый - пиомеланину, а яркая желто-зеленая флуоресценция под УФ-светом - флуоресцеину.
подготовка
Взвешивают 43 г обезвоженной среды и растворяют в дистиллированной воде. Добавьте 10 мл глицерина. Отнесите смесь к источнику тепла. Дать покипеть несколько минут до полного растворения.
Автоклав при 121 ° C в течение 15 минут. Дайте постоять и подавайте в стерильных чашках Петри при температуре около 50 ° C.
Дать застыть, перевернуть, разложить по тарелкам и хранить в холодильнике до использования. Чашки с цетримидным агаром следует вынуть из холодильника перед посевом и дать им нагреться до комнатной температуры.
Конечный pH среды должен составлять 7,2 ± 0,2.
Цвет обезвоженной среды бежевый, а препарат непрозрачно-белый.
Приложения
Все виды образцов, в которых подозревается наличие синегнойной палочки, можно высевать на цетримидный агар. Следовательно, он полезен во всех областях микробиологии (экологической, промышленной, клинической, водной и пищевой).
Очень важно анализировать среду в больнице и, таким образом, иметь возможность применять корректирующие меры, поскольку этот микроорганизм достигает пациентов через зараженное оборудование, лекарства, растворы и расходные материалы, которые используются пациентом.
Таким образом, микроорганизм может инфицировать нижние дыхательные пути, мочевыводящие пути и раны пациентов с ослабленным иммунитетом.
Подсчет колоний P. aeruginosa также может быть выполнен с помощью тестов на предельное содержание микробов.
Посевная
Цетримидный агар можно использовать в качестве первичной культуры. Планшет инокулируется на одном из краев, и оттуда он распределяется по остальной части чашки. Жидкие образцы можно высевать на поверхность шпателем Дригальского.
Планшеты инкубируют в аэробных условиях при 37 ° C в течение 24 часов инкубации.
Ограничения
-Небольшой процент штаммов Pseudomonas aeruginosas не производит пиоцианин, поэтому можно интерпретировать ложноотрицательный результат.
-Некоторые виды Pseudomonas, имеющие клиническое значение, подавляются в этой среде.
- Несмотря на соблюдение характеристик, описанных для Pseudomonas aeruginosa, они должны быть подтверждены дополнительными идентификационными тестами. Тест, который нельзя пропустить, - это оксидазный тест, он должен дать положительный результат.
-Некоторые энтеробактерии могут расти в этой среде и вырабатывать желтый пигмент, но он отличается от синегнойной палочки тем, что когда планшет подвергается воздействию ультрафиолетового света, флуоресценция отсутствует.
- Serratia marcescens успевает развиваться и выделяет розовый пигмент.
- Если чашки, засеянные цетримидным агаром, выдерживают некоторое время при комнатной температуре, штаммы P. aeruginosa могут потерять флуоресценцию, наблюдаемую в ультрафиолетовом свете, однако это свойство восстанавливается, если их снова инкубировать при 37 ° C.
контроль качества
Для анализа хороших характеристик цетримидного агара можно использовать контрольные штаммы, такие как: Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Stenotrophomonas maltophilia ATCC 13637, Escherichia coli ATCC 25922 и Staphylococcus aureus ATCC 25923.
Ожидаемые результаты:
- Хороший рост P. aeruginosa с сине-зеленым пигментом и положительным флуоресцеином.
- S. maltophilia и S. aureus будут частично или полностью подавлены.
- Ожидается, что Escherichia coli будет полностью подавлена.
Ссылки
- Каллико А., Седре Б., Сифонтес С., Торрес В., Пино И., Каллис А., Эснард С. Фенотипическая и серологическая характеристика клинических изолятов синегнойной палочки. VacciMonitor. 2004; 13 (3): 1-9.
- Conda Pronadisa Laboratories. Цетримидная агаровая основа. 2014. Доступно на: condalab.com
- Britannia Laboratories. Цетримидный агар. 2015. Доступно на: britanialab.com.
- BD Laboratories. BD Pseudosel agar (Цетримидный агар). 2013. Доступно на: bd.com
- Лаборатория Франсиско Сориа Мельгисо, Калифорния. Цетримидный агар. 2009 г. Доступно на: http://f-soria.es