ЖЕЛЧНЫЙ ЭСКУЛИНОВЫЙ АГАР: ОБОСНОВАНИЕ, ПОДГОТОВКА И ПРИМЕНЕНИЕ - БИОЛОГИЯ - 2025

Желчи эскулин агар является селективным и дифференциальной средой твердой культурой. Он используется в качестве диагностического теста для определения способности определенного микроорганизма расти в среде, содержащей желчь, а также расщеплять глюкозид эскулин на эскулетин и глюкозу.

Этот диагностический тест используется для дифференциации видов рода Streptococcus, принадлежащих к группе D (положительный результат на желчный эскулин), от других групп Streptococcus, которые отрицательно реагируют на этот тест.

Пластина с желчным эскулиновым агаром, засеянная штаммом Enterococcus (положительный результат теста). Источник: Машиночитаемый автор не предоставлен. Филиппинджл предположил (на основании заявлений об авторских правах).

Следует отметить, что некоторые Streptococcus группы viridans могут гидролизовать эскулин, но не способны расти в присутствии желчи в концентрации 40%, поэтому в данной среде реакция для этой группы отрицательная.

С другой стороны, среда с желчным эскулином также полезна для диагностики видов Listeria monocytogenes или Aerococcus sp, поскольку эти микроорганизмы являются желчными эскулином-положительными.

Эскулин-желчный агар состоит из пептона, мясного экстракта, бычьей желчи, эскулина, цитрата железа, агара и дистиллированной воды. Некоторые коммерческие предприятия включают азид натрия в состав среды.

Среду можно приготовить в лаборатории, если у вас есть все соединения по отдельности, или ее можно приготовить из коммерческой дегидратированной среды.

основа

Среда желчного эскулина содержит пептоны и мясной экстракт, оба соединения обеспечивают необходимые питательные вещества для роста микроорганизмов.

Он также содержит эскулин; Это соединение представляет собой гликозид, образованный путем объединения простого моносахарида (глюкозы) с соединением, называемым 6,7-дигидроксикумарин или эскулетин (аглюкон), связанным ацетальной или глюкозидной связью.

Тест основан на том, чтобы показать, способны ли бактерии гидролизовать эскулин. Если это происходит, эскулин распадается на эскулетин и глюкозу. Esculetina реагирует с железом, присутствующим в среде, с образованием темно-коричневого, почти черного соединения.

Это означает, что цитрат трехвалентного железа действует как проявитель реакции. Эта характеристика делает агар Bile Esculin Agar дифференциальной средой.

Со своей стороны, желчь является ингибитором, который предотвращает рост некоторых микроорганизмов, поэтому бактерия, прежде чем расщепить эскулин, должна иметь возможность расти в присутствии желчи. Поэтому эта среда считается селективной.

В этой среде могут развиваться в основном бактерии, обитающие в кишечной среде.

В этом смысле некоторые коммерческие компании добавляют в среду азид натрия для дальнейшего подавления роста кишечных грамотрицательных бацилл, повышая селективность среды для роста Streptococcus.

Наконец, агар придает твердую консистенцию среде, а вода является растворителем соединений.

подготовка

Домашний препарат желчного эскулинового агара

Весить:

5 г пептонов

3 г мясного экстракта

40 г говяжьей желчи

1 г эскулина

0,5 г цитрата железа

15 г агара

1000 мл дистиллированной воды

В случае добавления азида натрия к смеси взвешивают 0,25 г / л.

Компоненты растворить в литре дистиллированной воды, нагреть до полного растворения соединений. Разлить по 5 мл в пробирки с завинчивающейся крышкой 16 x 125 мм. Автоклав при 121 ° C, давлении 15 фунтов в течение 15 минут.

Выньте из автоклава и наклоните пробирки на подставке, чтобы агар застыл в виде широкого желобчатого клюва.

Хранить в холодильнике до использования. Перед посевом довести до комнатной температуры.

Также могут быть приготовлены чашки с желчным эскулиновым агаром; в этом случае всю смесь автоклавировали в колбе и затем распределяли по стерильным чашкам Петри. Дайте им застыть и храните в холодильнике.

PH среды должен быть 6,6 ± 0,2.

Приготовление желчного эскулинового агара из коммерческой среды

Взвесьте количество, указанное на вкладыше. Это может варьироваться от одного бизнес-центра к другому. Затем действуйте так же, как описано выше.

PH среды должен быть 6,6 ± 0,2. Цвет дегидратированной среды светло-бежевый, а приготовленная среда темно-янтарная.

Коммерческая желчная эскулиновая среда. Источник: Фотография автора MSc. Мариельса Гил.

Приложения

Среда с желчным эскулином используется в основном для дифференциации Streptococcus группы D (желчный эскулин-положительный) от остальных групп Streptococcus (желчный эскулин-отрицательный).

Комбинирование теста на рост гиперсоленого бульона с тестом на эскулин желчи позволяет идентифицировать особую группу стрептококков группы D, называемую энтерококками.

Эта особая группа Streptococcus принадлежит к группе D вышеупомянутого рода, и они способны гидролизовать эскулин в присутствии желчи, как и остальные члены группы D, но они также способны развиваться в гиперсоленой среде (BHI с хлоридом 6,5% натрия), и это свойство имеет большое значение.

Поэтому стрептококки, которые гидролизуют желчь эскулина, но не растут в гиперсоленом бульоне, называются неэнтерококками стрептококками группы D.

Посевная

Инокулируйте среду предпочтительно из чистого 24-часового бульона Тодда-Хьюитта.

Добавьте 2 капли на поверхность среды с помощью пипетки Пастера и распределите по среде с помощью платиновой петли.

Инкубируйте при 35 ° C в течение 48 часов, пока время инкубации закончится, его можно контролировать, чтобы увидеть, есть ли положительная реакция. Если по истечении времени реакция останется отрицательной, ее можно инкубировать до 72 часов.

интерпретация

Положительная реакция : появление темно-коричневого, почти черного цвета в желобчатом клюве (в случае пробирного теста) или почернение агара вокруг колоний (в случае пробирного теста).

Отрицательная реакция : через 72 часа инкубации среда не почернеет, или менее чем в половине пробирки появляется черный цвет. С другой стороны, рост бактерий в среде без появления черного цвета следует рассматривать как отрицательный тест.

контроль качества

Для оценки качества среды штамм Enterococcus faecalis ATCC 29212 должен быть доступен как положительный контроль, а штамм Streptococcus, не принадлежащий к группе D, как отрицательный контроль.

Ограничения

-Средства, не содержащие азида натрия, способствуют росту кишечных грамотрицательных бацилл. Некоторые из них могут почернить середину.

- Некоторые коммерческие предприятия добавляют желчь с низкой концентрацией (10%), и по этой причине некоторые стрептококки, не принадлежащие к группе D, могут развиваться в среде и гидролизовать эскулин, что может вызвать ошибки при интерпретации.

Ссылки

1. Конеман Э, Аллен С., Джанда В., Шрекенбергер П., Винн В. (2004). Микробиологическая диагностика. 5-е изд. Редакция Panamericana SA Аргентина.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Микробиологический диагноз Бейли и Скотта. 12 изд. Редакция Panamericana SA Аргентина.
3. Мак Фаддин Дж. (2003). Биохимические тесты для идентификации бактерий, имеющих клиническое значение. 3-е изд. Редакция Panamericana. Буэнос айрес. Аргентина.
4. Лаборатория Британия. Эскулин желчь с азидным агаром. 2015. Доступно на: britanialab.com.
5. «Желчный эскулин-агар». Википедия, свободная энциклопедия. 22 августа 2017 г., 17:30 UTC. 22 апр 2019, 17:35. es.wikipedia.org.
6. Laboratorios Bd. Наклонный желчный эскулиновый агар. 2015. Доступно на: bd.com
7. Neogen Laboratories. Желчный эскулиновый агар. Доступно на: foodsafety.neogen.com