ПЕРЕКРЕСТНЫЕ ТЕСТЫ: ДЛЯ ЧЕГО ОНИ НУЖНЫ, МЕТОДИКА, ОБОСНОВАНИЕ, ФАЗЫ - ЛЕКАРСТВО

Crossmatch ряд лабораторных исследований проводится с целью определить , совместимы ли с кровью реципиента продуктов крови от донора ( в основном цельной крови и упаковывают шаровидной).

Это дополнительный дополнительный тест к совместимости по ABO и резус-фактору. Причина перекрестного сопоставления заключается в том, что иногда два человека (донор-реципиент) могут иметь одну и ту же группу ABO и Rh, но их кровь все еще несовместима.

Источник: unsplash.com

Такая несовместимость происходит из-за наличия антител против ряда белков красных кровяных телец, известных как минорные антигены. Эти антигены обычно не проверяются, поскольку они предназначены для определения группы крови (ABO) и резус-фактора.

Это связано с тем, что минорные антигены встречаются гораздо реже и имеют различную экспрессию у каждого человека, поэтому практически невозможно сгруппировать их по категориям, как это делается с группой и резус-фактором.

Вместо этого донорские эритроциты смешивают с сывороткой пациента (тест основного совпадения) и эритроциты пациента с донорской сывороткой (тест второстепенного совпадения) для обнаружения наличия реакций антиген-антитело.

Когда в сыворотке пациента или донора есть антитела к минорным антигенам, тест считается положительным, поэтому в большинстве случаев эту конкретную единицу крови переливать нельзя.

ABO Group

Чтобы полностью понять, что такое перекрестные реакции, вам сначала нужно знать основы групп крови.

В этом смысле наиболее важно знать, что кровь можно разделить на четыре группы: A, B, AB и O.

Каждая из этих групп экспрессирует на поверхности красных кровяных телец определенный белок (антиген), который определяется как чужеродный элемент антителами потенциального рецептора другой группы.

Самым поразительным в реакциях антиген-антитело при сопоставлении крови является то, что для существования антител не требуется предварительного контакта с антигеном. Это известно как естественные антитела.

Природные антитела

Как правило, чтобы антитела существовали в организме человека, необходимо, чтобы белые кровяные тельца человека ранее подвергались действию антигена.

Это означает, что при первом контакте чужеродного антигена с организмом антитела отсутствуют, поскольку они образуются позже, после первоначального контакта. Следовательно, иммунная система не может иметь антитела, например, против определенного вируса, если она не подвергалась воздействию этого вируса в прошлом.

Единственное исключение из вышесказанного - антигены AB. В этих случаях у человека есть антитела против антигена, которого нет в его эритроцитах, даже если он никогда не контактировал с эритроцитами другого человека. Это известно как естественные антитела.

Антигены и антитела, относящиеся к группе крови

В случае системы ABO группы крови определяются по наличию специфических антигенов (A или B) на мембране эритроцитов и, напротив, антител против отсутствующего антигена на мембране эритроцитов.

Таким образом, человек с группой крови А экспрессирует антиген А на поверхности своих красных кровяных телец, в то время как в сыворотке есть анти-В-антитела.

Напротив, у пациентов группы B обнаруживается антиген B, тогда как антитела являются анти-A.

Однако у пациентов с кровью AB есть антигены как A, так и B. Следовательно, антител отсутствуют, поскольку это разрушило бы эритроциты этого человека.

Совершенно противоположное происходит в группе O, где мембрана эритроцита не представляет ни одного из двух антигенов (ни A, ни B), в то время как в сыворотке есть антитела анти-A и анти-B.

Несовместимость группы ABO

Из вышесказанного можно легко сделать вывод о совместимости групп крови ABO, поскольку знание антигена мембраны эритроцита автоматически определяет антитела в сыворотке. Так что:

- Кровь A совместима с группой A и группой O.

- Группа крови B совместима с кровью B и O.

- Люди с группой O могут получать кровь только O (так как у них есть антитела против A и B), хотя их кровь получают все другие группы без проблем, поскольку в ней отсутствуют антигены.

- В заключение. люди с группой крови AB могут получать кровь из всех других групп (A, B, O и, конечно, AB), поскольку у них нет антител против какого-либо из антигенов. Однако только люди в группе AB могут получать кровь AB, так как все другие группы имеют антитела, которые разрушают эти эритроциты.

Минорные антигены

Как и в случае с группами ABO, на поверхности эритроцитов можно найти ряд белков, которые действуют как антигены так же, как антигены группы ABO.

Однако эти антигены присутствуют не у всех людей. Их сочетание неоднородно, а пенетрантность (уровень экспрессии белка) варьируется, поэтому разделение на группы, подобные той, которая существует для ABO и Rh, невозможно. Именно отсюда он получил свое название от «второстепенных антигенов», также известных как «антигены низкой заболеваемости».

Хотя они нечасты, могут существовать естественные антитела против минорных антигенов. Среди них наиболее распространены Lewis, MNSs, anti N, Kell, Duffy, anti Fyb и Kidd. Все они ответственны за очень серьезные гемолитические и посттрансфузионные реакции.

Кроме того, может иметь место сенсибилизация против минорных антигенов из-за предыдущего контакта либо с указанными антигенными белками из-за предыдущих переливаний, либо из-за перекрестного иммунитета.

Перекрестный иммунитет

Говорят, что существует перекрестный иммунитет, когда два антигена из двух разных источников (например, эритроцита и бактерии) очень похожи до такой степени, что антитела против одного из этих антигенных белков также реагируют с другим, потому что они почти идентичны. .

Чтобы лучше понять это, возьмем предыдущий гипотетический пример (антигены из красных кровяных телец и бактерий). Ни в том, ни в другом случае нет естественных антител, но если человек подвергается воздействию бактерий, они будут генерировать антитела против них.

Такие антитела позже будут реагировать против красных кровяных телец, если антигены красных кровяных телец очень похожи на антигены бактерий, которые вызвали образование антител.

Если это произойдет, красные кровяные тельца с этим конкретным антигенным белком не могут быть переданы человеку, у которого есть антитела, поскольку это приведет к отторжению. В этом заключается важность перекрестных реакций.

Для чего нужен кросс-матч?

Поскольку невозможно сгруппировать кровь разных людей на основе минорных антигенов, единственный способ узнать, есть ли антитела против минорных антигенов эритроцитов другого человека в крови одного человека, - это сопоставление. .

В тех случаях, когда присутствуют антитела, запускается реакция гемолиза или агглютинации, поэтому делается вывод, что реакция была положительной; то есть есть антитела против минорных антигенов (хотя точно неизвестно, каким именно). В противном случае тест отрицательный.

основа

Перекрестные совпадения основаны на реакции антиген-антитело. Поэтому с их помощью можно определить, есть ли в сыворотке реципиента антитела против антигенов эритроцитов донора (или наоборот), вызывая реакцию антиген-антитело.

Если антител нет, реакция не происходит, и результат теста считается отрицательным. Напротив, если реакция положительная (во время теста наблюдается гемолиз или агглютинация), можно сделать вывод о наличии антител.

В связи с этим важно отметить, что антитела против эритроцитов могут быть как в сыворотке донора, так и в сыворотке реципиента. Вот почему существует два типа перекрестных реакций.

Типы перекрестных реакций

В сыворотке пациента могут присутствовать антитела против донорских эритроцитов; но может произойти и обратное, то есть антитела в сыворотке донора против эритроцитов пациента.

Вот почему существует два типа кроссматча:

- Главный кросс-матч.

- Незначительный перекрестный матч.

Оба типа обычно выполняются в банке крови перед переливанием продуктов крови, поскольку при положительном результате любого из тестов существует высокий риск реакций переливания, которые могут поставить под угрозу жизнь пациента.

Главный кросс-матч

Этот тест определяет, содержит ли сыворотка реципиента антитела к эритроцитам донора.

Если это произойдет, продукты крови нельзя будет вводить, поскольку большое количество антител, присутствующих в плазме пациента, очень быстро разрушает эритроциты донора, вызывая катастрофические реакции в организме реципиента. Эти реакции настолько серьезны, что могут быть опасными для жизни.

Незначительный перекрестный матч

В этом случае определяется, есть ли в сыворотке донора антитела против эритроцитов реципиента.

Если это так, антитела начнут разрушать эритроциты реципиента. Однако, учитывая, что количество антител ограничено, реакция менее интенсивна; хотя это все еще опасно.

Этапы

И основной, и второстепенный перекрестный матч делятся на три фазы:

- Физиологический раствор.

- Термический или инкубационный.

- Кумбс.

На первом этапе эритроциты и сыворотка смешиваются в физиологическом растворе. Затем добавляется альбумин, и образец инкубируется при 37ºC в течение 30 минут, чтобы, наконец, перейти к фазе комбса.

Техника

Методика перекрестного сопоставления относительно проста, так как включает добавление донорских эритроцитов к сыворотке пациента (основное перекрестное сопоставление), а также эритроцитов реципиента к донорской сыворотке (незначительное перекрестное сопоставление).

Чтобы вызвать реакцию антиген-антитело за относительно короткое время, необходимо выполнить ряд стандартизированных шагов. Эти шаги в упрощенном виде резюмируются ниже.

Важно отметить, что в следующем разделе описывается основной тест на совместимость, хотя шаги такие же для второстепенного теста на совместимость, но с заменой происхождения эритроцитов и сыворотки.

Солевая фаза

- Добавьте в пробирку 2 капли сыворотки от реципиента (от донора, если это незначительное перекрестное совпадение).

- Возьмите образец эритроцитов у донора (у реципиента, если это незначительное перекрестное совпадение).

- Вымойте и центрифугируйте эритроциты.

- Ресуспендировать в растворе от 3% до 5%.

- Поместите каплю этого раствора в пробирку с сывороткой реципиента.

- Осторожно перемешайте.

- Центрифуга.

- Прочтите результат на индикаторной лампе.

Термическая фаза

- Добавьте 2 капли 22% альбумина в пробирку, в которой завершилась фаза солевого раствора.

- Инкубируйте при 37ºC в течение 30 минут.

- Центрифуга 15 секунд.

- Прочтите результат на индикаторной лампе.

Фаза Кумбса

- Возьмите клетки из пробирки и промойте их физиологическим раствором.

- Удалите супернатант.

- Добавьте две капли реагента Кумбса.