СТЮАРТ МЕДИУМ: ОСНОВА, ПОДГОТОВКА И ПРИМЕНЕНИЕ - БИОЛОГИЯ - 2025

Среда Стюарт представляет собой полутвердый агар или бульон без питательных веществ, используемый для транспортировки биологических образцов. Его цель - поддерживать жизнеспособность штаммов, присутствующих в образце, в течение определенного времени, но без увеличения микробной популяции.

Он был создан Моффетом, Янгом и Стюартом в 1948 году и позже модифицирован Тошахом и Пацулой. В его состав входят глицерофосфат натрия, тиогликолят натрия, хлорид кальция и агар-агар. Последний присутствует в полутвердой среде и отсутствует в жидкости. Некоторые лаборатории добавляют в него метиленовый синий.

Культурист с транспортом Стюарта. Источник: Автор: CDC / Dr. Гильда Джонс, предоставлено: Библиотека изображений общественного здравоохранения

Обычно они используются, когда невозможно сразу засеять образец. В этом случае образец помещается в транспортную среду, пока он передается в лабораторию, которая будет обрабатывать культуру.

Таким образом гарантируется, что присутствующие микроорганизмы останутся живыми до тех пор, пока они не будут внесены в соответствующие питательные среды.

Первоначально его использовали для транспортировки образцов из уретры или влагалища, где предполагалось присутствие Neisseria gonorrhoeae. Позже они поняли, что его полезность может быть шире.

Среда Стюарта оказалась очень эффективной для сохранения лабильных и требовательных микроорганизмов, таких как Neisseria meningitidis, Haemophilus influenzae, Streptococcus pyogenes, Streptococcus pneumoniae, Corynebacterium diphteriae, Bordetella pertusis и других. В дополнение к другим не раздражающим микроорганизмам, таким как энтеробактерии.

Среда Стюарта в основном предотвращает высыхание образца, поддерживает осмотический баланс и сохраняет микроорганизмы при идеальном pH. С другой стороны, стратегически эта среда не содержит питательных веществ, что предотвращает размножение микроорганизмов.

На рынке есть специальные приспособления для транспортировки образцов, которые содержат то или иное средство передвижения, называемое культуризмом. Их также можно приготовить в лаборатории.

основа

Цель транспорта Стюарта - поддерживать образцы как можно ближе к их первоначальному состоянию до тех пор, пока они не будут обработаны.

Глицерофосфат натрия и хлорид кальция - это буферная система, которая поддерживает pH и осмолярность.

В то время как тиогликолят натрия действует как восстанавливающий агент, а в случае наличия агара, это придает ему полутвердую консистенцию, задерживая насыщение кислородом среды. Наконец, метиленовый синий является индикатором окисления, то есть обнаруживает присутствие кислорода.

Полутвердая среда с индикатором окислительно-восстановительного потенциала идеально подходит для транспортировки образцов, в которых предполагается наличие анаэробных бактерий.

Характеристики транспортного средства

Среда Стюарта, как и все транспортные средства, соответствует определенным характеристикам, в том числе:

-Поддерживает жизнеспособные штаммы микробов без размножения.

-Не содержит полезных веществ; Его соединения предназначены для поддержания гидратации образца при адекватных условиях pH и осмолярности.

- Подавляет автолизат некоторых чувствительных микроорганизмов, таких как пневмококк.

-Его использование носит временный характер, не следует продлевать его слишком долго.

подготовка

Полутвердая среда Стюарта с индикатором окислительно-восстановительного потенциала

Домашняя подготовка

Ингредиенты

Глицерофосфат натрия 10 гр

Тиогликолят натрия 1,0 гр

Хлорид кальция 0,1 г

Метиленовый синий 0,002 гр

Агар-агар 3 гр

Дистиллированная вода 1 л.

Компоненты смешать и нагреть до полного растворения. Разлить в пробирки или специальные тампоны. Их помещают в автоклав и стерилизуют при 121ºC в течение 15 минут. Дайте трубкам остыть в вертикальном положении (в форме блока). Хранить при комнатной температуре.

Подготовка с коммерческой средой

Взвесьте 14,1 г среды в 1 л дистиллированной воды. Часто встряхивая, пока полностью не растворится, можно варить. В остальном процедура как уже описана.

Обезвоженная среда кремового цвета и приготовленная должна быть синей по поверхности. Это связано с наличием метиленового синего.

Уровень pH среды должен быть доведен до 7,4 ± 0,2.

Жидкая модифицированная среда Стюарта (домашняя)

Ингредиенты

Глицерофосфат натрия 10 гр

Тиогликолят натрия 1 гр

Дигидрат хлорида кальция 0,1 г

Дистиллированная вода 1000 мл.

Он имеет те же ингредиенты, что и полутвердый, но не содержит агара или метиленового синего. В этом случае компоненты смешиваются без нагрева и по 0,5 мл распределяются в пробирки 16 x 125 мм с завинчивающимися крышками.

Его стерилизуют в автоклаве при 121 ° C в течение 10 минут. Для отбора образцов следует использовать дакроновые тампоны, если образец предназначен для ПЦР, или вискозного волокна, если он предназначен для посева.

Пробирки хранят при комнатной температуре.

Приложения

В продаже имеются специальные приспособления для транспортировки образцов, называемые культурлетами; Это устройство представляет собой удлиненную тонкую трубку, внутри которой находится тампон, а на конце есть сегмент, содержащий полутвердую или жидкую среду Стюарта.

Устройство открывается, и тампон берется образец. Затем он вводится обратно в пробирку до тех пор, пока кончик тампона не окажется в полутвердой транспортной среде; Некоторые приносят с собой полиуретановую губку, пропитанную жидкой средой Стюарта, с помощью которой сохраняется образец во влажном состоянии.

В случае подозрения на присутствие чувствительных микроорганизмов для взятия пробы следует использовать ватные палочки с углем.

Образцы, которые могут быть взяты с помощью тампонов или мазков и перенесены в эту среду, представляют собой глоточные экссудаты, ректальные мазки и различные выделения, в том числе вагинальные, уретральные, раневые, глазные, ушные и абсцессы.

Во время транспортировки пробы в транспортной среде в лабораторию следует избегать воздействия на среду экстремальных условий окружающей среды (слишком холодных или слишком горячих). Также следует избегать резких перепадов атмосферного давления.

Время, в течение которого среда способна поддерживать жизнеспособность микроорганизма, будет зависеть от рассматриваемого штамма. Например, для микроорганизмов рода Neisserias и Haemophilus они могут оставаться жизнеспособными до 24 часов, но такие штаммы, как Salmonella или Shigella, могут сохраняться в течение нескольких дней и даже недель.

Если предполагается, что обработка образца может занять более 4 дней, предпочтительнее заморозить образец при -70 ° C.

Идентификация образца в транспортном средстве

Подготовленные транспортные средства или коммерческая культуральная упаковка должны иметь этикетку, на которой будет размещена следующая информация:

Имя и фамилия пациента: позволяет избежать путаницы с образцами.

Идентификационный номер: удобно вести порядок на работе.

Источник сбора образцов: помогает бактериологу выбрать подходящую питательную среду.

Лечащий врач: Иногда это необходимо для возможных консультаций.

Дата и время взятия пробы: необходимо для принятия или отклонения пробы в соответствии со временем, прошедшим между взятием пробы и приемом в лаборатории.

Другая информация, которую было бы очень полезно приложить:

Предположительный диагноз: определяет добавление специальных питательных сред в соответствии с предполагаемым диагнозом.

Лечение антибиотиками: полезно записаться на антибиотикограмму.

Вся эта информация жизненно важна для обеспечения правильной обработки образцов.

контроль качества

Чтобы оценить эффективность среды Стюарта, известные штаммы можно инокулировать и хранить при 25 ° C, например: Bordetella pertussis ATCC 9340, Haemophilus influenzae ATCC 19418, Neisseria gonorrhoeae ATCC 19424, Neisseria meningitidis ATCC 13090, Streptococcus 301 pneumoniae ATCC.

Во всех случаях ожидается восстановление рассматриваемого микроорганизма при хранении в течение 24 часов.

С другой стороны, можно использовать другие штаммы, такие как: Shigella flexneri ATCC 12022, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Streptococcus pyogenes ATCC 12344, Enterococcus faecalis ATCC 33186, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 и Escherichia coli ATCC 11775.

Во всех случаях ожидается обильное выздоровление в течение 96 часов.

Ограничения

Некоторые исследования подтверждают, что глицерофосфат, присутствующий в среде Стюарта, может метаболизироваться некоторыми колиформными бактериями, среди других грамотрицательных бактерий, и поэтому размножаться в этой среде.

Этот риск тем больше, чем дольше откладывается обработка пробы. Точно так же на это влияет воздействие средних и высоких температур Стюарта во время транспортировки.

Ссылки

1. «Транспортное средство (микробиология)». Википедия, свободная энциклопедия. 13 апреля 2018, 10:36 UTC. 1 апреля 2019 г. Доступно на: es.wikipedia.org
2. Microkit Laboratories: питательные среды. Стюарт Транспорт. Доступно на: Доступно на: Medioscultivo.com
3. LabLisan. Транспортные средства Стюарта. Доступно на: lablinsan.cl
4. Научный МДМ. Преимущества наличия микробиологической транспортной среды Стюарта. Доступно на: mdmcientifica.com
5. Metrix Laboratories. Стюарт. 2017. Доступно по адресу: metrixlab.mx
6. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Микробиологический диагноз Бейли и Скотта. 12 изд. Редакция Panamericana SA Аргентина.
7. Конеман Э, Аллен С., Джанда В., Шрекенбергер П., Винн В. (2004). Микробиологическая диагностика. 5-е изд. Редакция Panamericana SA Аргентина.