MEDIUM SIM: ОСНОВА, ПОДГОТОВКА И ИСПОЛЬЗОВАНИЕ - БИОЛОГИЯ - 2024

Среда SIM представляет собой полутвердый дифференциальный агар, специально разработанный для идентификации некоторых бактерий, особенно Enterobacteriaceae. Он состоит из триптеина, пептона, сульфата железа, сульфата аммония, тиосульфата натрия и агара.

Эта среда позволяет выполнять три важных теста: производство сероводорода (H ₂ S), образование индола и подвижность, отсюда и сокращение SIM. Из-за его большой полезности он не может отсутствовать в бактериологической лаборатории.

A. Коммерческая среда SIM B. Тесты SIM H2S (-), индола (-) и подвижности (+), а также H2S (+), индола (-), теста подвижности (+). Источник: A. Фотография автора MSc. Мариэлса Хил Б. Мфлоайза

В отличие от других сред, он должен быть полутвердым, чтобы можно было обнаружить способность некоторых бактерий к движению. В этом смысле этот тест очень хорошо работает для Enterobacteriaceae, но не для неферментирующих грамотрицательных палочек, где предпочтительны другие методы, такие как висящая капля.

Среда SIM позволяет различать определенные специфические свойства, которые характеризуют одни бактерии по сравнению с другими. Например, Escherichia coli различается по H ₂ S (-), индолу (+) и подвижности (+), тогда как Proteus mirabilis - это H ₂ S (+), индол (-), подвижность (+).

основа

Это культуральная среда, которая считается дифференцированной, потому что ее использование позволяет различать микроорганизмы, способные продуцировать сероводород, от тех, которые этого не делают; он также выделяет те, которые образуют индол из триптофана, от тех, которые этого не делают, и, наконец, отличает подвижные бактерии от неподвижных.

Источник питания

Как и любая питательная среда, в ней есть элементы, обеспечивающие необходимые питательные вещества для развития нетребовательных микроорганизмов. Эти элементы представлены пептонами и триптином.

Развитие микроорганизмов в среде необходимо для того, чтобы можно было наблюдать наличие или отсутствие характеристик, которые оценивает эта среда.

Производство сероводорода

Буква S в аббревиатуре SIM относится к производству сероводорода (H ₂ S). Бактерии, способные образовывать сероводород, будут поглощать серу из тиосульфата натрия.

Как только образуется бесцветный газ H ₂ S, он вступает в реакцию с солью железа, присутствующей в среде, с образованием хорошо видимого сульфида железа (черный осадок). Бактерии, не образующие H ₂ S, оставляют среду первоначального цвета (бежевого).

Наличие черного осадка может затруднить интерпретацию моторики. Однако известно, что большинство энтеробактерий, продуцирующих H ₂ S, позитивно подвижны, например, Salmonella, Proteus и Citrobacter. Кроме того, черный осадок, покрывающий почти всю среду, свидетельствует о положительной подвижности.

Образование индола

Вторая буква аббревиатуры SIM - «I», что означает образование индола.

В этом смысле триптейн, помимо того, что он является источником питательных веществ, выполняет еще одну фундаментальную функцию. Этот пептон богат аминокислотой под названием триптофан, поэтому он может показывать бактерии, вырабатывающие триптофаназу.

Этот фермент отвечает за расщепление аминокислоты триптофана с последующим образованием индола (бесцветного вещества), пировиноградной кислоты и аммония.

Поэтому для демонстрации этой реакции необходимо добавить обнаруживающее вещество (реактив Эрлиха или реактив Ковача). Либо реагирует с индолом, образуя на поверхности агара вещество в форме кольца красного цвета фуксии. Если появляется кольцо цвета фуксии, индольный тест расценивается как положительный.

Бактерии, не обладающие этим ферментом, не образуют кольца, и это интерпретируется как отрицательный результат индольного теста.

Важно отметить, что тест на индол следует интерпретировать в последнюю очередь, поскольку после добавления реагента среда становится мутной, что затрудняет визуализацию подвижности.

подвижность

Наконец, буква «М» в слове SIM означает подвижность. Для оценки подвижности эта среда является стратегически полутвердой, так как эта характеристика важна для того, чтобы можно было наблюдать, происходит ли движение бактерий. Бактерии, обладающие жгутиками, дают положительный результат.

Положительный результат теста будет очевиден, если наблюдается помутнение как в исходном посевном материале, так и вокруг него. В то время как неподвижные бактерии развиваются только на пути первоначального инокулята.

подготовка

Средняя SIM-карта

Взвешивают 30 г обезвоженной среды и растворяют в литре дистиллированной воды. Смесь оставляют на 5 минут, а затем нагревают до кипения, часто помешивая, до полного растворения.

Разлить смесь по пробиркам с ватными колпачками и автоклавировать при 121 ° C в течение 15 минут. Выньте штатив для пробирок из автоклава и дайте ему застыть в вертикальном положении, чтобы среда имела форму блока.

Для консервации его хранят в холодильнике до употребления. Готовая среда должна иметь конечный pH 7,3 ± 0,2.

Во время инокуляции среда должна быть комнатной температуры. Средний цвет - бежевый.

Реагент Ковача

Отмерьте 150 мл амилового, изоамилового или бутилового спирта. (Используйте один из трех упомянутых).

Растворите 10 г п-диметиламинобензальдегида. Затем медленно добавьте 50 мл концентрированной соляной кислоты.

Готовый к использованию реагент бесцветный или светло-желтый. Его нужно хранить в янтарной бутылке и хранить в холодильнике. Не используйте, если он станет темно-коричневым; это означает, что он поврежден. Этот реагент предпочтительнее, когда речь идет о Enterobacteriaceae.

Реагент Эрлиха

Взвешивают 2 г п-диметиламинобензальдегида, растворяют в 190 мл абсолютного этилового спирта и медленно перемешивают с 40 мл концентрированной соляной кислоты. Таким же образом храните реактив Ковача. Реагент Эрлиха чаще всего используется для неферментирующих и анаэробных бактерий.

Приложения

Среда SIM широко используется в бактериологических лабораториях. Его преимущество состоит в том, что при идентификации Enterobacteriaceae в одной пробирке можно наблюдать три основных характеристики.

Посевная

Правильный способ посева этой среды - использовать иглу, с помощью которой отбирают часть чистой исследуемой колонии и вставляют ее вертикально в центр среды. Следует выполнить одиночный выпад. Прокол не должен доходить до дна трубки, правильнее всего - покрыть только две трети глубины.

Повторение посевного материала не рекомендуется, так как это может привести к ложной интерпретации положительной подвижности. Засеянную среду инкубируют в аэробных условиях при 37 ° C в течение 24 часов.

По истечении этого времени наблюдают, производилась ли продукция H ₂ S, и считывают подвижность. Наконец, обнаруживается индол, добавляется от 3 до 4 капель реактива Эрлиха или Ковака, осторожно перемешивается и интерпретируется.

Источник: Конеман Э., Аллен С., Янда В., Шрекенбергер П., Винн В. (2004). Микробиологическая диагностика. 5-е изд. Редакция Panamericana SA Аргентина.

контроль качества

В качестве контроля стерильности одну или две пробирки инкубируют без инокуляции в печи при 37 ° C в течение 24 часов. Ожидается, что по истечении этого времени роста или изменения цвета не будет.

В качестве контроля качества могут использоваться известные сертифицированные штаммы, такие как: Escherichia coli ATCC 25922, Enterobacter aerogenes ATCC 13048, Klebsiella pneumoniae ATCC 13883, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Shigella sonnei ATCC 29930, Proteus vulgaris ATCC 13315.

Ожидаемые результаты: Escherichia coli H ₂ S отрицательный, индол и положительная подвижность, Enterobacter aerogenes только положительная подвижность, Salmonella typhimurium H ₂ S и положительная подвижность при отрицательном индоле. Proteus vulgaris все положительные, а Klebsiella pneumoniae и Shigella отрицательные.

Ограничения

-Некоторые штаммы Morganella morganii, среди других штаммов, могут выделять коричневатый пигмент в этой среде из-за выработки меланина, это не следует путать с осадком сульфида железа. В неопытных специалистах эта ситуация может генерировать ложные срабатывания в интерпретации Н ₂ S теста .

- Строгие аэробные бактерии будут расти только на поверхности трубки, что затрудняет интерпретацию подвижности.

Ссылки

1. BD Laboratories. BBL SIM Средний. 2008. Доступно на: bd.com.
2. Neogen Laboratories. SIM-карта среднего размера. Доступно по адресу: foodsafety
3. Дифко Франсиско Сориа Мельгисо. SIM-карта среднего размера. 2009 г. Доступно на: http://f-soria.es
4. Лаборатория Бризуэла-Лаб. Средняя SIM-карта. Доступно на: .brizuela- lab.com
5. Britannia Laboratories. Средняя SIM-карта. 2015. Доступно по адресу: studyres.es/doc.
6. Конеман Э, Аллен С., Джанда В., Шрекенбергер П., Винн В. (2004). Микробиологическая диагностика. 5-е изд. Редакция Panamericana SA Аргентина.