ЯРКО-ЗЕЛЕНЫЙ АГАР: ОБОСНОВАНИЕ, ПОДГОТОВКА И ИСПОЛЬЗОВАНИЕ - БИОЛОГИЯ - 2025

Агар с бриллиантовым зеленым является твердой питательной средой с высокой степенью селективности. Он используется исключительно для выделения штаммов рода Salmonella, однако есть некоторые исключения, такие как виды тифов и паратифов, которые не растут на этой среде.

Поиск представителей рода Salmonella часто проводится в кале, воде или образцах пищи. В этом смысле эта среда может быть очень полезной. Этот агар был создан в 1925 году Кристенсеном, Лестером и Юргенсом, позже он был модифицирован Кауфманном.

Ярко-зеленый агар. Ферментирующие и неферментирующие колонии соответственно. Источник: MJ Richardson / Выставка Invisible Worlds - 2012geograph.org.uk/photo/2815842 Creative Commons License.

В его состав входят плюрипептоны из пептического гидролизата тканей животных и панкреатического гидролизата казеина, а также дрожжевой экстракт, хлорид натрия, лактоза, сахароза, фенол красный, ярко-зеленый и агар-агар.

Он характеризуется тем, что является довольно негостеприимной средой для большинства бактерий, способствующей росту сальмонелл, однако некоторые колиформные бактерии способны существовать в ней, слабо развиваясь.

Важно отметить, что род Shigella не растет на этой среде, как и Salmonella typhimurium или Salmonella paratyphi. Поэтому, если вы хотите изолировать эти микроорганизмы, следует использовать другие среды, например, агар XLD.

основа

Ярко-зеленый агар

Каждый из компонентов, составляющих среду, выполняет определенную функцию, которая определяет характеристики и свойства агара.

Плюрипептоны и дрожжевой экстракт являются источником питательных веществ, из которых микроорганизмы получают азот и минералы, необходимые для своего развития. Лактоза и сахароза являются источниками энергии для микроорганизмов, способных их ферментировать.

Ярко-зеленый цвет - ингибирующее вещество, препятствующее росту грамположительных бактерий и большого количества грамотрицательных микроорганизмов.

Хлорид натрия обеспечивает осмотическую стабильность среды. Хотя феноловый красный является индикатором pH, он меняет цвет при обнаружении образования кислоты в результате ферментации углеводов.

На этой среде растут неферментирующие колонии лактозы и сахарозы розоватого или прозрачно-белого цвета на красном фоне. Например, бактерии рода Salmonella.

В то время как бактерии, ферментирующие лактозу или сахарозу, способные расти на этой среде, образуют желто-зеленые или желто-зеленые колонии на зеленовато-желтом фоне. Например, Escherichia coli и Klebsiella pneumoniae.

Варианты с ярко-зеленым агаром (BGA)

Есть и другие варианты ярко-зеленого агара; Новобиоцин-бриллиантовый зеленый с глюкозой (NBG) агар и новобиоцин-бриллиантовый зеленый с глицерин-лактозой (NBGL) агар.

Новобиоцин ярко-зеленый глюкозный агар

Содержит триптиказо-соевый агар, цитрат аммония железа, пентагидрат тиосульфата натрия, феноловый красный, глюкозу, ярко-зеленый, новобиоцин и дистиллированную воду.

Он используется для выделения колоний сальмонелл из образцов стула.

В этом случае ярко-зеленый цвет и новобиоцин являются ингибирующими веществами, которые предотвращают рост грамположительных бактерий и некоторых грамотрицательных микроорганизмов.

Тиосульфат натрия является источником сульфида, а цитрат трехвалентного железа является источником железа, что необходимо для выявления образования сероводорода за счет образования черного осадка сульфида трехвалентного железа.

Глюкоза - это ферментируемый углевод, а феноловый красный - индикатор pH.

На этой среде колонии сальмонелл развиваются большими с черным центром, окруженным красноватым ореолом, за которым следует четко видимая область. Некоторые штаммы Citrobacter freundii образуют колонии, идентичные колониям Salmonella.

Новобиоцин-бриллиантовый зеленый глицерин-лактозный агар (NBGL)

Эта среда содержит соевый агар с триптиказой, цитрат железа и аммония, тиосульфат натрия, лактозу, глицерин, ярко-зеленый, новобиоцин и дистиллированную воду.

Разница между этой средой и предыдущей заключается в том, что глюкоза заменена лактозой и глицерином, а феноловый красный не используется.

Среда также используется для выделения видов Salmonella, колонии становятся черными из-за образования сероводорода.

Только колонии, которые не производят кислоту из глицерина или лактозы, достигают достаточного образования H ₂ S, потому что низкий pH препятствует образованию H ₂ S. Это приводит к бесцветным колониям для большинства видов Proteus и Citrobacter.

подготовка

-Весить 58 граммов коммерчески доступной обезвоженной среды. Добавьте его в литр бидистиллированной воды. Перемешайте, дайте постоять несколько минут и поместите смесь на источник тепла до полного растворения.

-Автоклав при 121 ° C в течение 15 минут, не превышайте время стерилизации.

-Дайте настояться и подавайте горячим в стерильных чашках Петри. Конечный pH должен составлять 6,9 ± 0,2.

-Дайте застыть и храните в холодильнике до использования. Перед посевом чашки должны быть комнатной температуры.

- Порошковая среда зеленого цвета, а приготовленная среда имеет оранжево-коричневый или красновато-зеленый цвет, в зависимости от pH и коммерческой компании. Очень коричневый цвет свидетельствует о перегреве агара.

-Когда агар затвердеет, его не рекомендуется повторно использовать, так как среда ухудшается.

Использование / приложения

Эта среда используется, в частности, для поиска штаммов рода Salmonella в образцах стула и молочных продуктах.

Поскольку это довольно негостеприимная среда, рекомендуется высевать обильный посевной материал, если используется прямой образец. В противном случае перед посевом в эту среду следует провести предварительное обогащение и обогащение образцов.

Поскольку некоторые штаммы сальмонелл подавляются или растут с трудом, рекомендуется добавить к этой среде другой селективный агар для сальмонелл.

Каждую колонию с типичными характеристиками сальмонелл необходимо подвергнуть биохимическим исследованиям для окончательной идентификации.

контроль качества

Чтобы проверить хорошие характеристики ярко-зеленой агаризованной среды, можно использовать штаммы АТСС для наблюдения за их развитием на ней.

Наиболее частыми штаммами, используемыми для контроля качества, являются: Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Proteus mirabilis ATCC 43071, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Escherichia coli ATCC 25922, Shigella flexneri ATCC 12022, Staphylococcus aureus ATCC 12022, Staphylococcus aureus ATCC.

Первые 3 должны дать розоватые или прозрачные белые колонии на красном фоне. Сальмонелла с хорошим развитием и Proteus с небольшим или регулярным ростом.

Для клебсиелл и эшерихий ожидаются желто-зеленые колонии с желтым фоном, а в случае шигелл и стафилококков их следует подавлять.

Обезвоженная среда должна храниться при комнатной температуре в сухом месте, поскольку среда очень гигроскопична.

Ссылки

1. Laboratorio Difco Francisco Soria Melguizo SA Агар с бриллиантовым зеленым. 2009
2. Британская лаборатория. Ярко-зеленый агар. 2015.
3. БД Лаборатория. BD Brilliant Green Agar. 2013.
4. Конеман Э, Аллен С., Джанда В., Шрекенбергер П., Винн В. (2004). Микробиологическая диагностика. (5-е изд.). Аргентина, редакция Panamericana SA
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Микробиологическая диагностика Бейли и Скотта. 12 изд. Аргентина. Редакция Panamericana SA