АГАР THAYER MARTIN: ОСНОВА, ПОДГОТОВКА И ПРИМЕНЕНИЕ - БИОЛОГИЯ - 2025

Агар Thayer Мартина это очень питательна и твердая селективная среда для выделения менингококка и гонококков; оба известны как патогенные или клинически важные Neisserias.

Одна из самых важных особенностей агара Thayer Martin Agar - высокое содержание пищевых добавок. Это свойство важно, потому что Neisserias - очень требовательные микроорганизмы с точки зрения питания и поэтому не растут в обычных средах.

Тайер Мартин / Агар Тайер Мартин, бизнес-среда. Исходное изображение 1: Снято автором MSc. Мариельса Гил, изображение 2. Pixinio.com: бактерии, колонизированные, модифицированные, Тайер, Мартин, агар.

С другой стороны, поскольку эти микроорганизмы обычно встречаются в нестерильных областях, необходимо добавление ингибиторов для предотвращения роста сопутствующей флоры, не влияя на развитие рода Neisseria.

Этот агар состоит из базового агара GC, гемоглобина, дополнительных пищевых добавок и комплекса ингибирующих веществ (антибиотиков и противогрибковых средств). В коммерческих домах каждое дополнение продается отдельно.

Посев образца в эту среду будет зависеть от разыскиваемого микроорганизма. Для Neisseria gonorrhoeae идеальными образцами являются выделения из влагалища и уретры. В то время как для Neisseria meningitidis наиболее часто используются образцы спинномозговой жидкости, глоточного и назофарингеального экссудата.

основа

Neisserias - это микроорганизмы, которые классифицируются как надоедливые, поэтому их выделение затруднительно. Таким образом, Thayer Martín представляет собой сложную среду, и каждый из ее компонентов выполняет функцию, описанную ниже:

Базовый агар ГХ

ГХ-агар содержит протеозопептон, кукурузный крахмал, хлорид натрия, дикалийфосфат, монокалиевый фосфат и агар-агар. Его компоненты обеспечивают основные питательные вещества для развития микробов, нейтрализуют токсичные жирные кислоты, помогают поддерживать осмотический баланс, определяют pH и обеспечивают твердую консистенцию среды.

гемоглобин

Гемоглобин обеспечивает факторы V и X (никотинамидадениндинуклеотид, НАД и гемин соответственно). По этой причине в этой среде также растут виды Haemophilus. Гемоглобин можно коммерчески приобрести в дегидратированной форме, или в среду можно добавить свежую дефибринированную бычью кровь.

Дополнение к обогащению

С другой стороны, в среду Тайера-Мартина также необходимо добавлять обогащающие добавки, поскольку питательных веществ, содержащихся в основном агаре, недостаточно для удовлетворения потребностей рода Neisseria.

Наиболее часто используемая обогащающая добавка называется изовиталекс. Он содержит глутамин, аденин, НАД, кокарбоксилазу, гуанин, нитрат железа, пара-аминобензойную кислоту, витамин B12, тиамин и глюкозу. Все эти соединения необходимы для правильного развития патогенных нейссериев.

Ингибиторы

Поскольку это очень питательная среда, необходимо использовать ингибиторы, которые предотвращают рост микроорганизмов из обычной флоры данного района и, таким образом, способствуют изоляции рода Neisseria.

Комплекс ингибиторов состоит из ванкомицина, колистина и нистатина. Ванкомицин подавляет рост грамположительных бактерий, колистин предотвращает рост грамотрицательных бактерий, таких как Pseudomonas и некоторые сапрофитные Neisserias, а нистатин действует на дрожжи, такие как Candida albicans.

Однако позже Агар Тайера Мартина был модифицирован; изменения заключались в добавлении триметоприма, увеличении количества агара и добавлении дополнительной глюкозы. Эти изменения значительно улучшили восстановление видов Neisseria gonorrhoeae.

Следует отметить, что триметоприм подавляет рост рода Proteus и, как следствие, образование роя. В этом смысле именно антибиотики придают селективный характер среде Тайера Мартина.

подготовка

Оригинальный агар Thayer Martin

-GC агар

Взвешивают 8,2 г обезвоженной среды для ГХ и суспендируют в 100 мл. Перемешать и кипятить 1 минуту при частом помешивании до полного растворения. Стерилизовать смесь в автоклаве при 121 ° C в течение 15 минут.

- 2% гемоглобин

Разведите 2 г обезвоженного гемоглобина в 2 или 3 мл горячей дистиллированной воды до образования однородной смеси. Постепенно добавьте воды, чтобы получить объем 100 мл. Перед стерилизацией суспензия должна быть однородной.

Стерилизовать в автоклаве 15 минут.

-Дополнение

Восстановите коммерческий флакон с разбавителем, предоставленным той же коммерческой компанией. Хорошо перемешать. Количество используемого разбавителя будет указано в инструкции к набору.

- Добавка ингибирования VCN (ванкомицин, колистин, нистатин)

Восстановите флакон с разбавителем, предоставленным коммерческой компанией. Хорошо перемешать. Количество используемого разбавителя будет указано в инструкции к набору.

-Prepared

Для каждых 100 мл агара GC действуйте следующим образом:

Когда ГХ-агар покинет автоклав, дайте ему остыть до температуры примерно 50 ° C и добавьте 2 мл приготовленного раствора гемоглобина, 2 мл обогащающей добавки (изобиталекс или бриталекс) и 2 мл ингибиторной добавки. Смешайте и подавайте в стерильных чашках Петри.

Дать застыть и хранить в холодильнике до использования.

Цвет приготовленной среды - вишнево-красный. Конечный pH среды 7,2 ± 0,2.

Модифицированный агар Тайера Мартина

Взвешивают 8,2 г обезвоженной среды для ГХ и суспендируют в 100 мл. Добавьте 1 г агар-агара и добавьте 0,3 г глюкозы. Перемешать и кипятить 1 минуту при частом помешивании до полного растворения. Стерилизовать смесь в автоклаве при 121 ° C в течение 15 минут.

Подготовьте гемоглобин и обогащающую добавку, как описано ранее.

Используемая добавка для подавления - это VCNT (ванкомицин, колистин, нистатин, триметоприм).

-Prepared

Действуйте, как описано для исходного агара Thayer Martin.

использование

Перед нанесением штрихов на образец агар Thayer Martin следует дать нагреться. Обычно используемые образцы представляют собой мазки из глотки, мазки из носа, влагалищные, уретральные и / или ректальные выделения, а также спинномозговую жидкость.

Используйте свежие образцы и сделайте сильные посевы на агар. Образцы засеваются непосредственно путем выброса материала, а затем истощение наносится на поверхность.

Планшеты инкубируют при 35-37 ° C в течение 24-48 часов в микроаэрофильном сосуде (5% CO ₂ ). По окончании инкубации чашки исследуют на наличие небольших, серых и иногда слизистых колоний.

Проведите грамм-тесты и подтверждающие биохимические тесты на подозрительных колониях.

контроль качества

Следующие микробные штаммы можно использовать для контроля качества агара Thayer Martin.

Neisseria gonorrhoeae ATCC 49226 и Neisseria meningitidis ATCC 13090; У обоих штаммов ожидается удовлетворительное развитие.

Также должны быть включены следующие штаммы: Staphylococcus epidermidis ATCC 14990, Escherichia coli ATCC 25922, Proteus mirabilis ATCC 43071 и Candida albicans ATCC 10231. Для всех из них в этой среде ожидается полное или частичное ингибирование.

Ограничения

-Нужно иметь в виду, что в среде могут расти бактерии, устойчивые к применяемым ингибиторам.

- Существуют штаммы Neisseria gonorrhoeae, которые могут быть чувствительны к концентрации используемого ванкомицина. По этой причине рекомендуется использовать шоколадный агар с добавлением изовиталекса, но без ингибиторов.

- Существуют устойчивые к нистатину штаммы дрожжей, которые могут расти в этой среде и мешать выделению патогенных Neisserias, особенно гонококков.

Ссылки

1. Valtek Diagnostic Laboratories. Тайер-Мартин Агар.2016. Доступно на: com
2. Britannia Laboratories. Модифицированная среда Thayer Martin. 2010. Доступно на: britanialab.com.
3. Авторы Википедии. Агар Тайера-Мартина. Википедия, свободная энциклопедия. 26 октября 2017 г., 16:33 UTC. Доступно на: wikipedia.org 4. Доступ 28 февраля 2019 г.
4. Britannia Laboratories. ГХ агар. 2010. Доступно на: britanialab.com.
5. Лаборатории BBL ™ Среда обогащения для привередливых микроорганизмов. 1999. Доступно на: bd.com.
6. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Микробиологический диагноз Бейли и Скотта. 12 изд. Редакция Panamericana SA Аргентина.