ШОКОЛАДНЫЙ АГАР: ОСНОВА, ПРИМЕНЕНИЕ И ПРИГОТОВЛЕНИЕ - БИОЛОГИЯ - 2025

Шоколадный агар является твердой культуральной средой, обогащенным, не - селективный и не - дифференциал. Он используется в основном для изоляции микроорганизмов, требовательных с точки зрения питания, хотя в нем могут расти любые бактерии.

По этой причине его полезность возрастает, особенно при посеве образцов, которые обычно стерильны, таких как спинномозговая жидкость и суставная жидкость. Хотя он также входит в выбранные средства для посева полимикробных образцов, но в этих случаях необходимо добавлять антибиотики, подавляющие сопутствующую флору.

Шоколадный агар с ростом бактерий

Этот материал имеет характерный коричневый цвет, очень похожий на шоколад, отсюда и его название. Препарат очень похож на кровяной агар, только в этом случае кровь необходимо нагреть, чтобы красные кровяные тельца разрушились.

Его препарат, как и кровяной агар, очень деликатен, так как он легко заражается. По этой причине многие лаборатории предпочитают приобретать эту среду, уже подготовленную коммерческими компаниями, которые гарантируют ее качество.

основа

Эта среда состоит из богатой питательными веществами агаровой основы и нагретой крови. Гемолиз красных кровяных телец обеспечивает фактор X (гемин) и фактор V (NAD), необходимые для роста некоторых микроорганизмов, таких как род Haemophilus. Это также очень полезно для изоляции Neisserias sp.

Как и кровяной агар, в зависимости от необходимости в качестве основного агара можно использовать различные среды. Среди используемых сред - инфузия мозга и сердца и соевый агар с триптиказой, хотя наиболее рекомендуются агар Columbia, Müeller Hinton, GC агар и агар Thayer Martin.

Некоторые варианты шоколадного агара включают коммерчески доступные обогащенные добавки под названием Isovitalex или Polivitex.

Эти добавки содержат витамин B ₁₂ , L-глутамин, аденин, гидрохлорид гуанина, п-аминобензойную кислоту, никотинамидадениндинуклеотид (НАД), пирофосфат тиамина, нитрат железа, гидрохлорид тиамина, гидрохлорид цистеина, L-цистин и глюкозу.

Важно отметить, что шоколадный агар более обогащен, чем кровяной агар, но он не позволяет наблюдать характер гемолиза.

Приложения

Источник: pixnio.com. Автор:
Пит Зайдель, Аманда Мур, MT, Тодд Паркер, доктор философии, Одра Марш, USCDCP

Шоколадный агар, приготовленный с колумбийским агаром

Эта среда содержит панкреатический гидролизат казеина и сердца, пептический гидролизат мяса, хлорид натрия, агар, дрожжевой экстракт и кукурузный крахмал. Он также богат витаминами, минералами и незаменимыми аминокислотами.

Эта подогретая кровяная основа идеально подходит для изоляции бактерий рода Neisseria. С другой стороны, если в среду дополнительно добавить добавку для Brucella, упомянутый микроорганизм может быть изолирован. Результаты улучшаются с использованием лошадиной крови.

Шоколадный агар, приготовленный с базовым агаром GC (для гонококков)

Эта среда содержит пептоны, кукурузный крахмал, одноосновные и двухосновные буферы, хлорид натрия и агар.

Большинство коммерчески приготовленных презентаций шоколадного агара поставляются с этой основой и не содержат нагретую кровь, а скорее синтетическую смесь гемина и химической добавки факторов роста, витаминов, минералов, аминокислот, фактора V и глюкозы.

Шоколадный агар, приготовленный с агаром Müeller Hinton

Он используется для проверки чувствительности к противомикробным препаратам требовательных микроорганизмов, таких как Streptococcus pneumoniae, с использованием 5% нагретой овечьей крови.

Он также используется для первичного выделения Neisserias и Haemophilus, но в конкретном случае выделения Haemophilus предпочтительнее использовать кровь лошади, поскольку она является богатым источником факторов X и V.

С другой стороны, если образец для посева взят из нестерильной зоны, рекомендуется добавить антибиотики, чтобы подавить нормальную флору в этой зоне.

Пример респираторных образцов, в которых подозревается присутствие бактерий рода Haemophilus, бацитрацин используется для подавления роста стафилококков, микрококков, стрептококков и сапрофитных Neisserias.

В случае образцов генитального шанкра, при подозрении на Haemophilus ducreyi, успешно использовался шоколадный агар, приготовленный следующим образом: агар Мюллера-Хинтона с 5% шоколадной лошадиной крови, 1% обогащением Isovitalex и 3 мкг / мл ванкомицина.

Шоколадный агар, приготовленный с агаром Thayer Martin

Эта среда специально предназначена для изоляции Neisseria gonorrhoeae. Он должен содержать антибиотики, подавляющие сопутствующую флору. Используется кровь ягненка.

подготовка

Необходимо ознакомиться с инструкциями по приготовлению основного агара. Они находятся на обратной стороне контейнера с обезвоженной средой. Обычно они описывают, сколько вы должны весить, чтобы приготовить литр питательной среды.

Точное необходимое количество можно приготовить в лаборатории, оно может быть больше или меньше литра.

вычисления

Правило трех используется для расчета, сколько нужно взвесить, чтобы приготовить желаемый объем. Пример:

Если на 1 литр необходимо весить 40 гр, а лаборатории требуется 800 мл, говорят:

1000 мл ----------- 40 гр

800 мл -----------– X

Формула будет следующей:

X = 32 г (взвешивать на 800 мл).

Взвесьте и растворите

Необходимое количество взвешивают и помещают в колбу с водой.

Нагрейте на умеренном огне и осторожно перемешайте вращательными движениями, пока обезвоженная среда полностью не растворится, дайте ей закипеть в течение 1 минуты.

Стерилизовать

Колбу помещают в автоклав для стерилизации среды при 121 ° C в течение 20 минут.

Совокупность крови

Покидая автоклав, ему дают постоять, пока температура среды не станет примерно от 56 до 70 ° C, чтобы поместить кровь и перемешать, пока среда не станет коричневой.

Если вы добавляете добавки, самое время это сделать. Затем перемешайте и подайте по 20 мл в каждую стерильную чашку Петри.

Вся процедура должна выполняться в вытяжном шкафу с ламинарным потоком или вокруг горелки Бунзена.

Дайте постоять, пока они не затвердеют, и храните в перевернутом виде в холодильнике.

Другой способ приготовить шоколадный агар без использования крови

Базовую среду готовят, как описано выше, коммерческий дегидратированный гемоглобин растворяют и стерилизуют в автоклаве.

Оба раствора охлаждаются до 50 ° C, соединяются и добавляется добавка. Смешайте в асептических условиях и подавайте в стерильные чашки Петри.

контроль качества

Важно, чтобы кровь была помещена при указанной температуре, поскольку она является идеальной для лизирования эритроцитов и в то же время для поддержания фактора V, который чувствителен к температуре.

На поверхности агара не должно оставаться пузырьков. Из каждой партии из 100 планшетов один или два планшета следует инкубировать в печи при 37 ° C в течение 24 часов, чтобы проверить их стерильность.

Для достижения наилучших результатов сразу после приготовления следует использовать шоколадный агар.

Контрольные штаммы бактерий следует хранить в лаборатории, чтобы оценить эффективность свежей среды для роста основных требовательных микроорганизмов, имеющих клиническое значение.

Ссылки

1. Гарсия П., Паредес Ф., Фернандес дель Баррио М. (1994). Практическая клиническая микробиология. Университет Кадиса, 2-е издание. Служба публикаций УЦА.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Микробиологический диагноз Бейли и Скотта. 12 изд. Аргентина. Редакция Panamericana SA
3. Конеман Э, Аллен С., Джанда В., Шрекенбергер П., Винн В. (2004). Микробиологическая диагностика. (5-е изд.). Аргентина, редакция Panamericana SA
4. Льянес Р., Рейес А., Родригес К., Гусман Д., Ллоп А. Возможность использования базовой культуральной среды GC-Biocen Agar в лаборатории микробиологии. Rev Cubana Med Trop, 2004 год; 56 (3): 237-238. Доступно на: scielo.sld.
5. Авторы Википедии. Шоколадный агар. Википедия, свободная энциклопедия. 17 декабря 2018 г., 19:54 UTC. Доступно на: en.wikipedia.org.