БЕНГАЛЬСКАЯ РОЗА: ОБОСНОВАНИЕ, ПОРЯДОК ПРОВЕДЕНИЯ, КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА - ЛЕКАРСТВО - 2024

Rose Bengal - это лабораторный тест, основанный на реакции антиген-антитело для диагностики бруцеллеза. Метод позволяет обнаруживать специфические антитела против бактерии Brucella abortus в образцах сыворотки крови человека. Результат может быть представлен качественно или полуколичественно.

Качественная форма выражает положительный или отрицательный результат теста у пациента, то есть наличие антител. Между тем, полуколичественный отчет приводится в МЕ / мл и указывает приблизительное количество присутствующих антител. Следует отметить, что антитела будут вырабатываться только в том случае, если пациент контактировал с микроорганизмом.

Роза Бенгальская реакция в пластине агглютинации. Источник: взято из видео https://youtu.be/igAVQ-GiyGY

Благодаря своей простоте, высокой чувствительности и специфичности, это один из методов сероагглютинации, наиболее часто используемых в медицине в качестве начального теста для диагностики этого заболевания.

Некоторые исследователи сравнили эффективность теста с бенгальскими розами с другими методами, такими как сероагглютинация (фебрильные антигены), и отметили, что, несмотря на хорошую корреляцию, они видели отдельные случаи, в которых тест на фебрильный антиген был отрицательным, а тест на фебрильные антигены был отрицательным. Положительная вспышка.

Полученное различие было связано с тем, что у этих пациентов был подкласс IgG-антител против Brucella abortus с лучшей связывающей способностью при кислом pH, поэтому они могли реагировать с реагентом Rose Bengal, но не с реагентом фебрильных антигенов.

В этом смысле они предложили модифицировать реагенты метода лихорадочного антигена до кислого pH, чтобы они могли обнаруживать этот тип случая.

основа

Реагент Rose Bengal состоит из антигенной суспензии. Он состоит из штамма Brucella abortus S99, разбавленного кислым лактатным буфером (pH 3,6), а также фенола и красителя бенгальской розы.

Следовательно, в образце исследуются антитела против Brucella, если они присутствуют, они будут реагировать с реагентным антигеном, и будет наблюдаться макроскопически видимая реакция агглютинации. Тест выявляет либо антитела IgM, либо антитела IgG.

Это означает, что он может обнаруживать заболевание как в острой стадии, когда преобладают антитела IgM, так и в его хронической стадии, когда преобладают антитела IgG.

Это представляет собой преимущество, поскольку увеличивает чувствительность теста, но в то же время является недостатком, поскольку не различает одну стадию от другой, поскольку реакции с антителами IgM и IgG идентичны.

Тест всегда должен выполняться вместе с отрицательным контролем и положительным контролем. Отрицательный контроль содержит сыворотку животных без антител, а положительный контроль содержит сыворотку животного происхождения с 50 МЕ / мл антител против Brucella.

использование

Бруцеллез - серьезное заболевание, которое часто бывает хроническим и опасным, поэтому очень важно диагностировать его на ранней стадии. Это зооноз, и люди могут заразиться при прямом контакте с зараженным материалом, причем наиболее уязвимыми людьми являются ветеринары и лица, ухаживающие за животными.

Заражение может также произойти при употреблении инфицированного сырого мяса, среди других форм инфекции.

Это заболевание атакует местно или системно. Системная форма является наиболее серьезным, так как различные органы могут быть затронуты, в том числе ретикулума эндотелиальной системы (печень, селезенка, костный мозг), кожи (целлюлит и лимфаденопатией), дыхательной системы (пневмония), опорно-двигательного аппарата (артриты, сакроилеит и спондилит) и др.

Тест на бенгальскую розу - очень полезный метод для проведения первоначального скрининга, поскольку он очень недорог, прост в использовании и обладает высокой специфичностью и чувствительностью.

Случаи ложноотрицательных и ложноположительных результатов очень редки и могут возникать у людей с очень низким титром антител (<25 МЕ / мл) или чрезвычайно высоким (> 1000 МЕ / мл) соответственно.

Обработать

материалы

-Розовый бенгальский комплект

-Агглютинационная пластина белый фон

Пипетка -50 мкл

-Ротатор (необязательно)

-Vortex

Техника (качественный метод)

Коммерческие наборы Rose Bengal поставляются с готовыми к использованию реагентами.

-Перед началом работы выдержите реагенты.

- На пластинах для агглютинации нарисованы кружки, каждый для разных образцов. Используйте 3 круга: первый для отрицательного контроля, второй для образца и третий для положительного контроля.

- Поместите каплю или 50 мкл контроля и образца в соответствующий кружок.

-Смешайте реагент Бенгальский роза с помощью вортекса. Поместите каплю рядом с ранее размещенными.

- Смешайте с деревянными зубочистками (используйте по одной для каждого образца или контроля). Делайте круговые движения и разводите так, чтобы охватить весь круг.

Источник: изображения взяты из видео: https://youtu.be/igAVQ-GiyGY. Отредактированный макет изображения.

-Поместите пластину на автоматический ротатор со скоростью от 80 до 100 об / мин или вращайте вручную в течение 4 минут. Прочтите доказательство в конце этого времени.

-Убедитесь, что элементы управления работают должным образом. Сравните реакцию испытуемого образца с контролем. Сообщите как положительный результат, если наблюдается агглютинация, и как отрицательный, если агглютинация отсутствует.

Положительный результат теста указывает на то, что у пациента количество антител против Brucella равно или превышает 25 МЕ / мл.

Интерпретация положительной (с агглютинацией) и отрицательной (без агглютинации) реакции. Источник: Цитруллин. Отредактированное изображение.

Техника (полуколичественная)

Если в качественной реакции образец является строго положительным, его можно определить полуколичественно. Для этого производят серийные двойные разведения образца физиологическим раствором. Описанная ранее процедура выполняется для каждого разведения.

Это также интерпретируется путем макроскопического наблюдения за агглютинацией. Результатом будет титр самого высокого разведения, при котором наблюдался положительный результат.

Для расчета приблизительного количества антител к бруцеллам используется следующая формула:

25 МЕ / мл x титр реакции = МЕ / мл

Например, если пациент в полуколичественном тесте дает положительный результат при разведении ½, ¼ и 1/8 и начинает давать отрицательный результат после разведения 1/16, это означает, что титр пациента равен 8. .

Применяя формулу:

25 МЕ / мл x 8 = 200 МЕ / мл

QA

-У комплектов есть срок годности, и его необходимо соблюдать. Не следует использовать, если срок годности реагента истек.

-Во время использования убедитесь, что реагент не содержит твердых частиц, так как это признак порчи.

-Держите от 2 до 8 ° C.

-Не замораживать, это приведет к безвозвратному повреждению реагента.

-Всегда проводите тест вместе с отрицательным и положительным контролями.

-Техника допускает пробы сыворотки с определенной степенью липемии и гемолиза, однако не рекомендуется использовать чрезмерно липемические и гемолизированные сыворотки, так как оба условия изменяют результаты теста.

-Всегда доведите реагенты до комнатной температуры перед началом анализа.

-Не интерпретируйте реакции, которые занимают больше времени, чем рекомендованное, поскольку это генерирует отчет о ложных срабатываниях, поскольку через определенное время реагент выпадает в осадок, имитируя положительную реакцию.

-Методика чувствительна на 100% и имеет специфичность 98%.

-После полуколичественного определения 1000 МЕ / мл существует возможность наблюдения эффекта прозоны (ложноотрицательный результат из-за избытка антител по сравнению с количеством антигенов).

Ссылки

1. Рубио М., Баррио Б. и Диас Р. Ценность тестов Роза де Бенгал, Кумбса и контр-иммуноэлектрофореза для диагностики случаев бруцеллеза человека, при которых агглютинация сыворотки отрицательна. Кафедра микробиологии. Служба клинической микробиологии. Университетская клиника. Университет Наварры. 406-407. Доступно на: elsevier.es/es-revista-enfermedades-infecciosas
2. «Бруцеллез». Википедия, свободная энциклопедия. 6 декабря 2019, 14:37 UTC. 18 декабря 2019, 18:09 en.wikipedia.org.
3. Монлаб Лаборатории. Monlab Bengal Rose - тест. 2016. Доступно по адресу: monlab.es/
4. Каррильо К., Готуццо Э. Бруцеллез. Преподобный Перу. Med. Exp. Public Health 1997; 14 (1): 63-66. Доступно на: scielo.org
5. Моралес-Гарсия Р., Гарсия-Мендес Н., Регаладо-Хакобо Д., Лопес-Мерино А., Контрерас-Родригес А. Клинические, серологические и полимеразные цепные реакции наблюдения за семьей, больной бруцеллезом. Преподобный чил. Инфектол. 2014; 31 (4): 425-433. Доступно на: scielo.conicyt.