MEDIO MIO: ОСНОВА, ПОДГОТОВКА И ПРИМЕНЕНИЕ - БИОЛОГИЯ - 2025

Среда MIO - это биохимический тест, используемый для помощи в идентификации видов бактерий, принадлежащих к семейству Enterobacteriaceae. Он довольно питателен и состоит из глюкозы, дрожжевого экстракта, пептона, триптеина, гидрохлорида L-орнитина, бромкрезола пурпурного и агара.

Значение его аббревиатуры (MIO) описывает каждый из параметров, которые можно наблюдать в этой среде; моторика, индол и орнитин. Подвижность - это способность микроорганизма двигаться из-за наличия жгутиков. Чтобы это свойство соблюдалось, консистенция среды должна быть полутвердой, чтобы препарат содержал меньше агара.

Схема интерпретации результатов в среде MIO. Источник: Подготовлено автором MSc. Мариельса Гиль

Производство индола показывает наличие фермента триптофаназы, который действует на аминокислоту триптофан, что требует использования раскрывающего реагента, чтобы сделать производство индола видимым.

Наконец, орнитин определяет, способна ли бактерия декарбоксилировать аминокислоту, то есть есть ли у нее фермент орнитиндекарбоксилаза.

основа

Пептон, дрожжевой экстракт и триптеин

Эти элементы вносят свой вклад в питательную ценность этой среды. Они служат источником питательных веществ и незаменимых аминокислот для развития бактерий.

Кроме того, триптеин является источником триптофана, чтобы показать присутствие фермента триптофаназы, которая разрушает триптофан путем восстановительного дезаминирования, высвобождая индол, пировиноградную кислоту, аммиак и энергию.

Индол бесцветен, поэтому его присутствие обнаруживается добавлением пяти капель реактива Эрлиха или Ковача, оба с п-диметиламинобензальдегидом.

Альдегидная группа этого соединения реагирует с индолом, образуя на поверхности агара кольцеобразный продукт цвета фуксии.

Любой след цвета следует рассматривать как положительный результат теста. Пробную печать следует читать немедленно, так как со временем цвет ухудшается.

Кроме того, этот тест должен быть выявлен после того, как будут отмечены результаты подвижности и декарбоксилирования орнитина.

интерпретация

Положительный результат: образование кольца красного цвета фуксии при добавлении капель реактива Ковача.

Отрицательный результат: без образования колец.

подвижность

Способность бактерий перемещаться будет очевидна, если будет наблюдаться мутная среда или если вокруг первоначальной инокуляции появится толстая линия роста.

Об отрицательном тесте на моторику будет свидетельствовать наблюдение за тонкой линией роста, и все вокруг нее не будет расти.

Важно определить подвижность до того, как будет обнаружен индол, поскольку добавление реагента затуманивает всю среду.

У подвижных, но медленнорастущих бактерий сложно продемонстрировать подвижность на этой среде. В этом случае рекомендуется использовать другие тесты или методы, такие как средняя подвижность или метод отложенного падения.

глюкоза

Глюкоза - это ферментируемый углевод, который, помимо обеспечения энергией, подкисляет окружающую среду, что является необходимым условием декарбоксилирования аминокислоты орнитина.

Ферментация глюкозы должна происходить всегда, исходя из того принципа, что все бактерии, принадлежащие к семейству Enterobacteriaceae, ферментируют глюкозу.

L-орнитин

Если бактерии продуцируют фермент орнитиндекарбоксилазу, это может действовать после того, как среда подкислена ферментацией глюкозы.

Фермент орнитиндекарбоксилаза воздействует на карбоксильную группу аминокислоты, образуя амин, называемый путрезином, который снова подщелачивает среду.

Этот тест следует прочитать через 24 часа инкубации, потому что, если вы попытаетесь прочитать до того, как вы можете неверно интерпретировать тест и дать ложноотрицательный результат.

Следует помнить, что первая реакция, которая происходит, - это ферментация глюкозы, поэтому среда становится желтой в начальной фазе (первые 10–12 часов). Если впоследствии произойдет декарбоксилирование орнитина, среда станет пурпурной.

Перед обнаружением индола важно интерпретировать тест декарбоксилирования орнитина, так как добавление реактива Ковача изменяет цвет среды.

интерпретация

Отрицательный тест: средний с желтым цветом или с желтым фоном.

Положительный результат: средний полностью фиолетовый.

Индикатор PH

В этом случае используется бромкрезоловый пурпурный; тот, который отвечает за обнаружение изменения pH в среде. При подкислении индикатор становится желтым, а при подщелачивании - пурпурным.

Техника посева и развития

Для посева среды MIO используется прямая петля или игла, с помощью которых собирается часть исследуемой колонии.

В середине МИО по прямой линии делается глубокий прокол. Не рекомендуется выполнять двойной прокол, так как это может дать ложное представление о моторике, если проколы не будут проводиться в одном и том же месте.

Инкубируйте от 24 до 48 часов при 37 ° C в условиях аэробиоза. Посмотрите на результаты в следующем порядке: подвижность, декарбоксилирование орнитина и, наконец, обнаружение индола.

Рекомендуется в асептических условиях удалить 2 мл среды, перенести их в стерильную пробирку и провести там тест на индол, чтобы в случае отрицательного результата оставшуюся часть исходной пробирки можно было инкубировать еще 24 часа, чтобы снова выявить индол.

Проявление индола проводят следующим образом: к среде MIO добавляют от 3 до 5 капель реактива Ковача и интенсивно перемешивают. Наблюдают, появляется ли кольцо красно-фуксии.

подготовка

MIO средний

Взвесьте 31 г среды MIO и растворите в одном литре дистиллированной воды.

Нагрейте, пока смесь не закипит в течение одной минуты, часто встряхивая, пока агар полностью не растворится. Разлить по 4 мл среды в пробирки 13/100 с ватными крышками.

Стерилизовать в автоклаве при 121 ° C в течение 15 минут. Выньте из автоклава и оставьте стоять прямо на стеллаже таким образом, чтобы образовался полутвердый блок.

Хранить в холодильнике при 2-8 ° С. Дайте ему нагреться перед посевом штамма бактерий.

Цвет обезвоженной среды бежевый, а цвет приготовленной среды слегка опалесцирующий пурпурный.

Конечный pH приготовленной среды составляет 6,5 ± 0,2.

Среда становится желтой при кислом pH и пурпурной при щелочном pH.

Реагент Ковача (Индол-проявитель теста)

Этот реагент готовят следующим образом:

Отмеряют 150 мл амилового, изоамилового или бутилового спирта (любого из трех). В нем растворено 10 г п-диметиламинобензальдегида. Затем медленно добавляют 50 мл концентрированной соляной кислоты.

Приготовленный реагент бесцветный или светло-желтый. Его следует хранить в янтарной бутылке и хранить в холодильнике. Темно-коричневый цвет показывает его ухудшение.

Также реактив Ковача может быть заменен реактивом Эрлиха. Последний, будучи более чувствительным, предпочтительно обнаруживает индол в бактериях, которые производят его в незначительных количествах, например, в некоторых неферментирующих грамотрицательных палочках и некоторых анаэробах.

использование

Эта среда представляет собой тест, который дополняет батарею биохимических тестов для идентификации бактерий, принадлежащих к семейству Enterobacteriaceae.

Данные декарбоксилирования орнитина служат для дифференциации Shigella sonnei с положительным результатом от Shigella boydii, Shigella flexneri и S. dysenterieae с отрицательным результатом.

Он также отличает род Klebsiella с отрицательным результатом теста от рода Enterobacter, у большинства его видов положительный результат теста.

Источник: Конеман Э., Аллен С., Янда В., Шрекенбергер П., Винн В. (2004). Микробиологическая диагностика. 5-е изд. Редакция Panamericana SA Аргентина.

контроль качества

Каждый раз, когда готовится партия среды MIO, можно проводить контрольный тест. Для этого используются известные или сертифицированные штаммы для наблюдения за поведением среды.

Можно использовать следующие штаммы: Escherichia coli, Morganella morganii, Klebsiella pneumoniae, Enterobacter aerogenes и Proteus mirabilis.

Ожидаемые результаты - E. coli и M. morganii. Дэн M: +, I: + и O: +.

Klebsiella pneumoniae все отрицательные (M: -, I: -, O :-). Proteus mirabilis и Enterobacter aerogenes дают M: + I: - и O: +.

Ссылки

1. Мак Фаддин Дж. (2003). Биохимические тесты для идентификации бактерий, имеющих клиническое значение. 3-е изд. Редакция Panamericana. Буэнос айрес. Аргентина.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Микробиологический диагноз Бейли и Скотта. 12 изд. Редакция Panamericana SA Аргентина.
3. Конеман Э, Аллен С., Джанда В., Шрекенбергер П., Винн В. (2004). Микробиологическая диагностика. 5-е изд. Редакция Panamericana SA Аргентина.
4. Britannia Laboratories. MIO Medio 2015. Доступно на: britanialab.com
5. BD Laboratories. Среда BBL Motility Indole Ornithine (MIO). 2007. Доступно на: bd.com
6. Valtek Laboratories. Средняя подвижность MIO, индол, орнитин. 2010. Доступно на: andinamedica.com